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Dna das amostras e do molde de PCR

Dna do molde e amostras para PCR

Guidelines para o DNA do molde e amostras para PCR:

Amostras de PCR:  Tipos, quantidade e purity

Tipos de amostras para PCR

O único ou DNA double-stranded de toda a origem pode ser uma amostra de PCR. Os moldes que podem ser usados para o amplification incluem animal, bacteriano, a planta, ou o viral. A conversão de moléculas do RNA, including o RNA total, do RNA (A+) poly, do RNA viral, do tRNA, ou do rRNA deve ocorrer antes do amplification ao usar estes enquanto moldes a DNA complementar so-called (DNA) pelo transcriptase do reverso do enzyme (MuLV ou polymerase recombinant, do rTth do DNA).

Uma quantidade de material para PCR

Uma quantidade do material começar, requerida para PCR pode ser tão pouco quanto uma única molécula.  Como uma base, até quantidades do nanogram de DNA cloned o molde, até quantidades do micrograma de DNA genomic, ou até 105 moléculas do alvo do DNA são as mais melhores para testar inicial de PCR.

Purity do molde e da amostra para PCR

O purity da amostra do DNA que será usada para o amplification de PCR não não necessita ser elevado. Uma única pilha, um lysate cru da pilha, ou mesmo uma amostra pequena do molde degradado do DNA são geralmente adequados para o amplification bem sucedido. As exigências do purity da amostra devem ser que o alvo contem ao menos uma costa intata do DNA que abrange a região amplificada e que as impurezas associadas com o alvo sejam diluídas para não inibir a atividade de enzyme. Seja isso como pode, para alguns amplifications, tais como PCR longo, ele pode ser necessário para considerar a qualidade e a quantidade da amostra do DNA. Para o exemplo: 1. Quando mais moléculas do molde estão disponíveis, há menos ocorrências dos positivos falsos causados pelo cross-contamination entre amostras ou “pela contaminação” do extravasamento dos amplifications precedentes de PCR.

2. Quando os amplifications de PCR faltam o specificity ou a eficiência, ou quando as seqüências do alvo são limitadas, há uma possibilidade mais grande do rendimento inadequado do produto.

3. Quando a fração de começar o DNA disponível a PCR é incerta, é cada vez mais difícil determinar o índice do DNA do alvo.