Análise de produtos do PCR

Análise da electroforese do gel do Agarose de produtos do PCR

A rapidamente e facilmente analise e resolva produtos do PCR, um 3% NuSieve pode ser o agarose usado de GTG (FMC Bioproducts, Rockland, MIM) e o gel do agarose de 1% Seakem GTG (FMC Bioproducts) funcionado em TBE (Tris-borato de 89 milímetros, EDTA de 2 milímetros) ou em TAE (40 milímetros de Tris-acetato, EDTA de 2 milímetros, pH aproximadamente 8.5). As faixas resolved do ADN são detectadas manchando os geles com os aproximadamente 0.5 μg/mL do brometo de ethidium, seguidas destaining com água ou o verde 1 de SYBR® (Molecular Sondagem Inc., Eugene, OU) e fotografadas finalmente sob a iluminação UV. Use um basepair 123 (bp) ou 1 escada do kilobasepair (kbp) como um marcador conveniente para estimativas do tamanho dos produtos.

Outros métodos analíticos para analisar produtos do PCR

Há uma variedade de outros métodos de deteção disponíveis para a análise de produto do PCR, tal como o ethidium brometo-manchou 8-10% geles de polyacrylamide funcionados no amortecedor de TBE, geles ou o ponto do sul/borrões, subcloning e arranjar em seqüência direto, análise da HPLC, e o uso de 96 microplates bons, nomear alguns. O reversos ponto-borram a amplificação do PCR das ligas do método com deteção nonradioactive. A introdução de tinturas fluorescentes ao PCR, junto com um instrumento apropriado por o tempo real, quantificação em linha de produtos do PCR durante a amplificação conduziu ao desenvolvimento do PCR cinético ou do PCR quantitativo. O PCR quantitativo (QPC) mede a acumulação do produto do PCR durante a fase exponencial da reação e antes que a amplificação se tornar vulnerável, isto é, quando os reagentes se tornarem limitados. O prisma 7700 de ABI (biosistemas aplicadas) e o LightCycler (produtos bioquímicos moleculars de Roche, Mannheim, Alemanha) são os dispositivos de deteção fluorescentes integrados que permitem a fluorescência que monitora ou continuamente ou uma vez por o ciclo. Estes instrumentos podem igualmente caracterizar produtos do PCR por suas características de derretimento, por exemplo, para discriminar mutações do singlebase de um selvagem-tipo seqüência. O sistema quantitativo multiplex recentemente projetado do PCR de Mx4000™ (Strategene, La Jolla, CA) Pode gerar e analisar dados para ensaios fluorescentes múltiplos do tempo real QPCR.