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Chromatography Líquido Do Elevado-Desempenho do HPLC-

A Técnica Do Chromatography Líquido Do Elevado-Desempenho

A análise dos peptides e das proteínas revolutionized pela introdução do HPLC. O HPLC permite a análise rápida e sensível da estrutura do peptide e da proteína. Simplificou nossa análise na compreensão de processos biológicos e no desenvolvimento do peptide e proteína é baseado pharmaceuticals.

Mas o HPLC não para lá, é aplicações no peptide e o purification da proteína continua a expandir em uma taxa extremamente rápida. A síntese solid-phase do peptide do exemplo e o DNA recombinant as técnicas permitiram a produção de quantidades grandes dos peptides e das proteínas que necessitam purified altamente. Também uma outra aplicação muito importante para o HPLC na idade do borne-genomic é que suas técnicas estão usadas extensivamente na isolação e na caracterização de proteínas da novela.

A característica a mais significativa do hPLC seria sua definição excelente que é conseguida fàcilmente sob uma escala larga das condições para moléculas muito pròxima relacionadas, as.well.as moléculas estrutural completamente distintas. Esta característica é do fato que todas as modalidades interativas do chromatography estão baseadas nas forças do recognition que podem subtly ser manipuladas através das mudanças nas condições do elution que são específicas para a modalidade particular do chromatography. Os peptides e as proteínas interagem com a superfície chromatographic em uma maneira específica da orientação, em que seu tempo da retenção é determinado pela composição molecular de regiões específicas do contato. Para os polypeptides e as proteínas maiores que adotam um grau significativo de estrutura secundária e tertiary, a região chromatographic do contato compreende uma proporção pequena da superfície molecular total. Todos os processos biológicos dependem das interações específicas entre moléculas e o chromatography da afinidade explora estas interações específicas para permitir o purification de um biomolecule na base de sua função biológica ou estrutura química individual.

Relacionamentos da retenção e da largura de faixa do HPLC

O tempo da retenção ou o tr no HPLC são o momento feito exame para um solute à passagem através de uma coluna chromatographic. Este tempo da retenção é medido como o tempo feito exame pelo solute, depois da injeção, para emergir da coluna e para ser detectado. A fim permitir que os tempos da retenção sejam comparados às colunas diferentes ou sob circunstâncias diferentes, a época da retenção de um solute é comparada normalmente com a época da retenção de uma molécula que não seja retida na coluna específica do interesse. Isto permite que o fator unitless k da capacidade ' de um solute seja expressado nos termos do tempo tr da retenção, com o relacionamento