Cromatografia líquida de capacidade elevada da HPLC

A técnica de capacidade elevada da cromatografia líquida

A análise dos peptides e das proteínas foi revolucionada pela introdução de HPLC. A HPLC permite a análise rápida e sensível da estrutura do peptide e da proteína. Simplificou nossa análise na compreensão de processos biológicos e no desenvolvimento do peptide e proteína é baseada fármacos.

Mas a HPLC não para lá, é aplicações no peptide e a purificação da proteína continua a expandir em uma taxa extremamente rápida. Por exemplo a síntese solid-phase do peptide e as técnicas do ADN de recombinação permitiram a produção de grandes quantidades de peptides e de proteínas que precisam de purified altamente. Igualmente um outro pedido muito importante para a HPLC na idade do borne-genomic é que suas técnicas estão usadas extensivamente na isolação e na caracterização de proteínas novas.

A característica a mais significativa da HPLC seria sua definição excelente que é conseguida facilmente sob uma escala larga das condições para moléculas muito estreitamente relacionadas, e também moléculas estrutural completamente distintas. Esta característica é do fato de que todas as modalidades interativas da cromatografia estão baseadas nas forças do reconhecimento que podem subtly ser manipuladas através das mudanças nas condições da eluição que são específicas para a modalidade particular da cromatografia. Os Peptides e as proteínas interagem com a superfície cromatográfica em uma maneira específica da orientação, em que seu tempo de retenção é determinado pela composição molecular de regiões específicas do contato. Para os polypeptides e as proteínas maiores que adotam um grau significativo de estrutura secundária e terciária, a região cromatográfica do contato compreende uma proporção pequena da superfície molecular total. Todos os processos biológicos dependem das interações específicas entre moléculas e a cromatografia de afinidade explora estas interações específicas para permitir a purificação de uma biomolécula com base em sua função biológica ou estrutura química individual.

Relacionamentos da retenção e da largura de faixa da HPLC

O tempo de retenção ou o tr na HPLC são o momento tomado para que um solute passe através de uma coluna cromatográfica. Este tempo de retenção é medido como o tempo tomado pelo solute, depois da injeção, para emerger da coluna e para ser detectado. A fim permitir que os tempos de retenção sejam comparados às colunas diferentes ou sob circunstâncias diferentes, a época de retenção de um solute é comparada normalmente com a época de retenção de uma molécula que não seja retida na coluna específica do interesse. Isto permite que o k unitless do fator de capacidade de um solute seja expressado nos termos do tempo de retenção tr, com o relacionamento