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Bornes Recentes Do Forum

FACS

A Técnica de FACS

Os lymphocytes descansando compreendem muitas subpopulações funcionais, que são identificadas e distinguidas de se na base da expressão diferencial do heir das proteínas da superfície da pilha, que podem ser detectadas usar antibodies específicos.

Fluxo Cytometry

Uma ferramenta poderosa para definir e quantifying lymphocytes é o cytometer do fluxo, que detecta e conta as pilhas individuais que passam em um córrego através de um feixe de laser. Um cytometer do fluxo equipado para separar as pilhas identificadas é chamado um classificador fluorescence-ativado da pilha (FACS). Estes instrumentos são usados estudar as propriedades dos subconjuntos da pilha identificados usando proteínas monoclonal da pilha-superfície dos antibodies. As pilhas individuais dentro de uma população misturada são etiquetadas primeiramente pelo tratamento com os antibodies monoclonal específicos etiquetados com as tinturas fluorescentes, ou pelos antibodies específicos seguidos por antibodies etiquetados do anti-anti-immunoglobulin. A mistura de pilhas etiquetadas é forçada então com muito volume do arger de saline através de um bocal, criando um córrego fino do líquido que contem as pilhas espaçadas única em intervalos. Porque cada pilha o passa através de um feixe de laser dispersam a luz de laser, e todas as moléculas da tintura limitadas à pilha serão excitadas e apresentarão fluorescência.

Os tubos sensíveis do photomultiplier detectam a luz dispersada, que dá a informação no tamanho e no granularity da pilha, e as emissões do florescence, que dão a informação no emperramento dos antibodies monoclonal etiquetados e conseqüentemente na expressão de proteínas da pilha-superfície por cada pilha. No classificador da pilha, os sinais passados para trás ao computador são usados gerar uma carga elétrica, que seja passada do bocal através do córrego líquido no tempo preciso que o córrego quebra acima em gotas, cada um que não contem não mais do que uma única pilha; as gotas que contêm uma carga podem então ser deflexionadas do córrego principal das gotas enquanto passam entre placas da carga oposta, de modo que as gotas positivamente carregadas estejam atraídas a uma placa negativamente carregada, e o versa vice. Nesta maneira, as subpopulações específicas das pilhas, distinguidas pelo emperramento do antibody etiquetado, podem purified de uma população misturada das pilhas. Alternativamente, para esgotar uma população das pilhas, o mesmo fluorochrome pode ser usado etiquetar antibodies diferentes dirigidos nas proteínas do marcador expressadas pelos vários tipos indesejados da pilha.

Classificação Da Pilha

O classificador da pilha pode ser usado dirigir pilhas etiquetadas a uma canaleta waste, retendo somente as pilhas unlabeled. Quando as pilhas são etiquetadas com um único antibody fluorescente, os dados do cytometer do fluxo estão indicados geralmente no formulário de um histograma da intensidade do fluorescence contra números da pilha. Se dois ou os mais antibodies forem usados, cada um acoplado à tintura fluorescente diferente, a seguir os dados são indicado mais geralmente dentro ele dão forma de um diagrama de scatter bidimensional ou como um diagrama do contorno, onde o fluorescence de um tinj-etiquetado antibody seja traçado de encontro àquele de um segundo, com o resultado que uma população das pilhas que etiquetam com um antibody pode mais mais ser subdividida seu etiquetar com o segundo antibody. Examinando um grande número pilhas, flui a lata cytometry dá dados quantitative na porcentagem das pilhas que carregam moléculas diferentes. Porque a potência da tecnologia de FACS cresceu, progressivamente mais antibodies etiquetados com as tinturas fluorescentes distintas podem ser usados ao mesmo tempo.

Três, quatro e nivelam cinco análises de cor podem agora ser segurados por máquinas muito poderosas

Protocolos de FACS