Patrocine/Anuncie & Ligue-nos & Contate-nos & Sobre nós & Ajude-nos

Biologia Molecular Blog

Bornes Recentes Do Forum

 

Cultura Bacteriana Das Placas De Ágar

Informação no crescimento de culturas bacterianas usando placas da cultura do ágar

Índice:

Placa de ágar e media do ágar que pesquisam defeitos e tópicos do forum

Artigos Relacionados Do Microbiology

Junte o boletim de notícias do microbiology!

 

Que é ágar - definição?

O ágar ou o ágar-ágar (de um meaning malay "vegetal" da palavra), a substância que é usada em preparar um tipo do media de cultura contínuo para o trabalho bacteriological, são um duto pro preparado dos vários seaweeds encontrados perto do Oceano Índico e em águas chinesas e japonesas. Este tipo de seaweed tem diversos nomes comuns, como o musgo de Ceilão ou de Jaffna, o isinglass de Bengal, etc.. As várias espécies são usadas para o alimento e o comércio é considerável.

Fundo e history no microbiology usando o caldo de carne e placas nutrientes do ágar

Payen, um -(about francês do químico 1859), obteve a geléia do ágar do seaweed, corneum de Gelidium, na seguinte maneira: Foi permitido ao seaweed estar por alguma hora em uma solução diluída fria do ácido hydrochloric; o ácido foi removido enxaguando diversas vezes com água, a seguir o seaweed foi colocado em uma solução diluída fria da amônia; a amônia foi removida em seguida enxaguar repetido com água fria. Durante este processo, o seaweed perdeu 53% de seu peso em sais minerais, na matéria colorindo, e em constituents orgânicos. A parcela restante foi fervida na água, durante que o processo a geléia vegetal foi extraída. A solução assim que obtido foi derramada fora, saindo do sedimento inútil atrás. Esta geléia está a mesma na composição que que existindo nos tecidos vegetais; não foi mudada quimicamente, como é collagen na preparação do gelatin. O ágar comercial é preparado o mais provavelmente evaporando esta solução ao dryness por meios diferentes.

O ágar vem geralmente nas mãos do bacteriologist como por muito tempo, tiras delgadas, cinzento-brancas, ou como blocos, ou mais especial em anos recentes, no formulário de um der cinzento-branco do prisioneiro de guerra da manufatura européia.

O ágar, no contraste com gelatin, é um hidrato de carbono, isto é, consiste em uma combinação do carbono, do hidrogênio e do oxigênio somente. Os traços do nitrogênio estão atuais como impurezas. As determinações qualitative acima de seus uents elementares do constit foram feitas por Payen, por Parumbaru e por Hueppe, que fêz suas determinações no ágar das fontes diferentes. Tanto quanto pode ser verificado, sua fórmula empírica não foi investigada ainda a nenhuma extensão.

Como o gelatin, entretanto, o ágar é um colóide reversível. Embebe acima na água fria, dissolve-se na água quente após ferver longo a uma solução desobstruída tasteless e inodora, e em ifies contínuos em cima de refrigerar ao mais ou a menos geléia opaca. Sua solução aquosa é neutra ou quase ponto morto ao phthalein do phenol; ainda, uma gota ou dois do vigésimo hydrate normal do sodium são suficiente fazer a cor cor-de-rosa perceptível.

As propriedades colloidal do ágar não são destruídas por um heating longo-continuado em uma alta temperatura, nem pela ação de microorganisms ordinários como são aqueles do gelatin. As propriedades acima, entretanto, são influenciadas e podem completamente ser danificadas pela reação do líquido em que o ágar é dissolvido.

A reação do líquido, isto é, se é ácida ou alcalina, influencia o ágar a respeito de seus solubility, solidity, cor, transparência, filterability e quantidade de água do tion do condensa. Se o ágar for dissolvido em um líquido de um acidity equivalente a 0.1% HC1, o ágar dissolve-se muito prontamente, filtra rapidamente, o filtrate resultante que é uma solução amarela, transparente, slippery, aquosa clara que não solidify em cima de refrigerar. Se uma porcentagem menor do ácido chloric hydro for usada, o solidification ocorre (abaixo de 40 C.) mas a geléia "não estará acima" e é conseqüentemente inútil para culturas da inclinação ou da placa de ágar. Uma quantidade grande de água con do densation está atual também.

Se o ágar for dissolvido em um caldo de carne alcalino ou neutro fraco, um líquido grosso, reddish-brown, viscous é que filtra lentamente e solidifies rapidamente em 40 C., a uma geléia muito contínua, opaca, seca, ter obtido mas pouca água da condensação; retem sua forma bem nas inclinações e nas placas. Assim o valor do ágar como um media de cultura contínuo é levantado ou abaixado de acordo com o cjegree do alkalinity ou do acidity.

Deve-se anotar além, entretanto, que quando a propriedade solidifying do ágar é destruída uma vez pela presença de um excesso do ácido em sua solução, esta propriedade pode nunca regained pela neutralização com alcalóide; o ácido por manently destrói o reversibility do colóide.

O melting-point do ágar (de 1.5% na solução neutra) é 97 C. e embora seu ponto solidifying esteja em 40 C., quando uma vez que solidified ele estará acima no termostato em uma temperatura de 50 C. Para finalidades bacteriological, somente esse formulário do ágar pode ser usado que remanesce fluido em 38 a 40 C. Ágar que remanesce fluido somente em uma temperatura acima deste ponto estaria demasiado quente quando em um estado fluido para o uso; o vitality dos organismos introduzidos seria danificado ou destruído pela alta temperatura.

Vantagens e desvantagens como o ágar como media nutrientes

As dificuldades são encontradas na preparação de um media de cultura contínuo do ágar, devido a seus solubility lento, viscosidade e filterability lento conseqüente. Sua solução (digestão) é efetuada, como mencionado acima de, por um heating longo em um water-bath, em um sterilizer do vapor, em um autoclav, ou em um excesso uma flama livre. O comprimento de tempo requerido para a digestão completa depende em cima de três coisas: A reação do líquido em que o ágar é dissolvido, o índice dos por cento do ágar, e o método de dissolver-se. A influência da reação de soluções do ágar foi tratada acima. Para o uso geral da cultura, entretanto, o ágar ordinário é feito a uma escala +15 mais cheia (o ágar solidifies com dificuldade acima de uma escala +30 mais cheia).

O ágar de um por cento é muito mais fàcilmente soluble sob circunstâncias iguais do que um por cento mais elevado. Um e um meios por cento são a quantidade usada em media ordinários do ágar, dando uma geléia um tanto mais dura e assim mais desejável.

O ágar é digerido o mais ràpidamente sobre uma flama livre. If.not aquecido suficientemente, após o filtration e a esterilização do ágar pelo método intermitente, um itate flocculent do precip aparece freqüentemente no media previamente desobstruído. Isto pode ser feito para desaparecer em a maioria de casos sujeitando à temperatura do autoclav (120 C. 15 Ibs.).

O ágar para media de cultura dever estar inteiramente desobstruído quando líquido, e homogênea opaco-translúcido quando sólido; deve ter um translucence suficiente permitir colônias profundas nas placas ou nas culturas do stab a ser observadas prontamente; não deve conter o material, o sedimento, ou partes flocculent de papel do algodão ou de filtro, como estes hinder o desenvolvimento típico da colônia dos microorganisms e, ao inexperienced, podem certas vezes ser confundidos por colônias.

Nos primeiros métodos usados sempre fazendo media de cultura do ágar, em vez de filtrar o ágar quente através do papel de filtro, do algodão absorvente, ou do asbesto, foi permitido refrigerar, durante que o processo o sedimento estabelecido ao fundo; quando o sólido o sedimento foi cortado fora. Este método não era desejável, porque o clearness do ágar resultante dependeria em cima da taxa de refrigerar; mais lento refrigerar, mais completamente sedimentation ocorreria.

 

O ágar não é um alimento para microorganisms no general, isto é, não é afetado pelos enzymes digestivos de a maioria de bactérias, como é gelatin. Entretanto, algumas bactérias são sabidas que têm a potência do ágar liquefying, entre que são os sp. do gelaticus n. do B. (gran) e Mau Nenckii, ambos que são encontrados, como se esperariam, na água de mar. Este inertness tive do compara do ágar rende valioso para a preparação, dos media sintéticos contínuos, o valor de que pode ser en hanced sujeitando o ágar comercial ao fermentation natural durante que processo todos os traços de substâncias capazes do alimento do proveito são usados acima pelos microorganisms atuais. (Beijerinck.)

O ágar é do uso especial no trabalho bacteriological em que o cultivation dos microorganisms deve ser conduzido em uma temperatura acima do melting-point do gelatin. Esta característica fêz possível os strides grandes que foram feitos exame no bacteriology médico, tantas como bactérias pathogenic pode ser isolada e crescido somente com dificuldade em tures do tempera abaixo daquele do corpo.

 

 

EXERCÍCIO 9. PREPARAÇÃO DO ÁGAR NUTRIENTE

Instrumento. balde de 3.5 ágata-agate-ware do litro; 15 gms. Ágar; 10 gms. Peptone; 5 gms. Sal; 10 gms. Albumen do ovo (ou um ovo); infusion sterile da carne de 500 c.c.; água da torneira de 500 c.c.; instrumento do titration; NaOH N/20; NaOH De N/l; phthalein do phenol (indicador); água destilada; funil grande; papel de filtro plaited; funil de enchimento; tubos de teste sterile; flask sterile do litro; contrapesos grosseiros; queimador de gás grande; copo de medição de 1 litro; instrumento para a esterilização do vapor.

Método. 1. Em gms de um lugar 15 do balde dos ware da ágata de 3 litros. Do ágar em 500 c.c. da água da torneira.

2. Lave o ágar bem, separando os shreds e o ing do squeez ele através das mãos.

3. Decant a água suja, medindo a quantidade derramada

42

MICROBIOLOGY GERAL

fora de; substitua com a mesma quantidade de água limpa da torneira.

Repita.

4. Dissolva sobre uma flama e uma fervura livres por cinco minutos, agitando constantemente. O tion do solu deve estar inteiramente livre das protuberâncias do ágar.

5. Adicione o peptone de 1% Witte e o 0.5% sal ao ágar fervendo.

6. A 500 c.c. da carne na fusão adicione 10 gms. Do al do ovo bumen que foi misturado bem com os 100 c.c. da água da torneira. (posto o albumen do ovo em um tumbler e adicione bastante água para dar forma a uma pasta. Agite até liso e adicione então a água do ing remanescer. Um ovo; poço batido,

Fig. 9. O funil da água quente para pode ser substituído.) Misture todo o ágar ou gelatin filtrando. Completamente

7. Derrame a mistura derretida do ágar lentamente no infusion da carne, agitando constantemente. Calor no autoclav em 120 C. por minutos forty-five ou por uma hora no vapor fluindo.

Nota. O momento para este heating pode ser alongado à vantagem, mas nunca ser encurtado. Se o ágar não for aquecido suficientemente antes do filtration, um precipitate flocculent dará forma nos tubos em cima de aquecer-se no vapor fluindo. Em a maioria de casos isto pode ser causado desaparecer aquecendo-se por um tempo curto no autoclav em 15 Ibs.

8. Titrate com NaOH N/20.

9. Ajuste a reação do media a +15 com NaOH normal ou o HC1 normal. Retitrate e reajusta a reação se necessário.

10. O counterpoise e anota o peso.

11. Ferva quinze minutos sobre uma flama livre, agitando con stantly,

SOLUÇÃO 43 DO PEPTONE DE DUNHAM

12. Counterpoise e faça acima toda a perda no peso com ferver a água destilada.

13. Filtre o papel de filtro plaited direto quente fervendo apenas lavado previamente com água fervendo. Passe o filtrate através do mesmo papel até que desobstruído.

14. Tubos de teste sterile da suficiência 60 a 70, usando aproximadamente 8 c.c. do media para cada tubo.

15. Aqueça no vapor fluindo vinte minutos em três dias cessive do suc.

16. Na extremidade do heating final, coloque os tubos do ágar em uma posição inclined para solidify (não permita que o media toque no plugue) de modo que uma superfície grande seja sented pre para o cultivation dos microorganisms. Estes são chamados inclinações de ágar.

Nota. Se os tubos do ágar deverem ser usados somente para inclinações de ágar, menos do media está necessitado no tubo do que quando deve ser usado para o chapeamento.

17. Para sterilize um flask grande do ágar, calor por trinta minutos em quatro dias sucessivos.

 

 

 

Referências para a cultura bacteriana do ágar

SMITH, ERWIN F.: Bactérias com relação às doenças de planta. Vol. I,

pp. 31-36. Diversas ilustrações. SCHULTZ, N. K.: Einiger Nahrsubstrate de Zur Frage von der Bereitung.

Centavo. F. Bakt. I. Orig., Bd. 10, 1891, p. 57.