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A imunofluorescência é a rotulagem dos anticorpos ou dos antígenos com tinturas fluorescentes. Esta técnica é usada frequentemente visualizar a distribuição subcellular das biomoléculas do interesse. as seções ou as culturas Immunofluorescent-etiquetadas do tecido são estudadas usando um microscópio de fluorescência ou pela microscopia confocal.
O mais geralmente, a imunofluorescência emprega dois jogos dos anticorpos: um anticorpo preliminar é usado de encontro ao antígeno do interesse; um anticorpo subseqüente, secundário, tingir-acoplado é introduzido que reconheça o anticorpo preliminar. Deste modo o investigador pode criar diversos anticorpos preliminares que reconhecem vários antígenos, mas, porque todos compartilham de uma região constante comum, pode ser reconhecido por um único anticorpo tingir-acoplado. Isto é feito tipicamente usando os anticorpos feitos na espécie diferente. Por exemplo, um investigador pôde criar os anticorpos em uma cabra que reconhecem diversos antígenos, e emprega então os anticorpos tingir-acoplados do coelho que reconhecem a região constante do anticorpo da cabra (anti-cabra denotada do coelho). Isto permite reusar dos anticorpos tingir-acoplados difícil-à-factura em experiências múltiplas.
Em alguns casos, é vantajoso usar os anticorpos preliminares etiquetados diretamente com um fluoróforo. Esta rotulagem direta diminui o número de etapas no procedimento de mancha e, mais importante, evita frequentemente problemas da reactividade cruzada e de fundo elevado. A rotulagem fluorescente pode ser executada em menos de uma hora com prontamente - os jogos de etiquetas disponíveis.
Muitos usos da imunofluorescência foram desusados pelo desenvolvimento das proteínas de recombinação que contêm domínios fluorescentes da proteína, por exemplo proteína fluorescente do verde (GFP). O uso de tais proteínas “etiquetadas” permite a localização muito melhor e o menos rompimento da função da proteína.
As aplicações da imunofluorescência incluem:
Como com a maioria de técnicas da fluorescência, um problema significativo com imunofluorescência photobleaching. A perda de atividade causada photobleaching pode ser controlada reduzindo a intensidade ou o período de exposição à luz, aumentando a concentração de fluorophores, ou empregando uns fluorophores mais robustos que sejam menos descoramento inclinado (por exemplo Alexa Fluors ou DyLight Fluors).
Porque contêm os ingredientes que actuam em cima de se, muitas misturas forem as mais eficientes quando fresco compo.
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Vídeo da imunofluorescência
Imunofluorescência. Este vídeo explica como usar a imunofluorescência para manchar partes diferentes da pilha em junho Cheng.
Adicionado perto: oBWhat
Tag: pilhas da mancha da imunofluorescência
Data: 2008-05-04
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