Fóruns da ciência da vida do fórum da biologia molecular

Cultura de pilha de Granulosa

mjy — Tue, 21:09 de 27 outubro 2009: GMT 15

Hello todos, eu estou trabalhando em uma cultura de pilha do granulosa e eu quero tratá-los com os andrógenos (isto é androstenedione ou testosterona) para determinar a produção do estradiol. Eu estou em Canadá e eu estou tendo muito uma dificuldade que encontro um vendedor que poderia me fornecer os andrógenos. Qualquer um sabe de onde poderia eu começ andrógenos?
Thanks

Usando a cromatografia para executar a dobradura de proteína de proteínas de recombinação

danfive — Tue, 20:20 de 27 outubro 2009: GMT 03

Here é um artigo de revisão que cobre o uso de todos os tipos da cromatografia para a proteína de recombinação que refolding, para recuperar o estado e naturalmente a bioactividade nativos. Muito útil, ajudado me a figurar para fora porque minhas colunas da tamanho-exclusão produziram o nada; aparentemente, estes métodos podem ser uma poupança tempo real, uma cromatografia de 20 minutos pode ser equivalente a 24 horas do Protein do
de dialysis.
que dobra a cromatografia líquida e seu developments
Xindu Geng∗ ,
de Chaozhan Wang
---> o target= " _blank " do " http://www.sciencedirect.com/science?_ob=MImg&_imagekey=B6X0P-4MCWMG2-2-7&_cdi=7220&_user=5675017&_orig=search&_coverDate=04/15/2007&_sk=991509998&view=c&wchp=dGLzVzz-zSkWb&md5=7642483b40a0351065fbb2259a20eda4&ie=/sdarticle.pdf " do href= do o
Introduction
um de http://www.sciencedirect.com/science.../sdarticle.pdf
das finalidades do proteomics é identificar proteínas biologicamente activas do unknown
e usar esta informação às drogas da novela do develop
. Algumas proteínas ativas ocorrem a níveis muito baixos no corpo humano do the
e assim têm que ser produzidas por biotechnology.
Escherichia Coli são uma da pilha de anfitrião na maior parte usada em biotechnology.
mas quando as proteínas são expressadas em Escherichia Coli, proteína inativa do formulário do often
agregam corpos de inclusão chamados. Um step
necessário em recuperar proteínas ativas de Escherichia Coli é o protein
(é chamado simplesmente dobradura de proteína aqui) ou renaturation do protein
; é geralmente a etapa chave durante as proteínas terapêuticas do of
da produção pela biotecnologia, especial na escala do industrial
. Os rendimentos de refolding pelo are
dos métodos geralmente muito baixo, tipicamente 5 20%. A aplicação do chromatography
(LC) à dobradura de proteína é um da maioria de interesting
e dos métodos emocionantes a tornar-se nos últimos anos. Quando é o used
na dobradura de proteína, a recuperação da bioactividade aumenta, a proteína do folded
pode facilmente ser separada dos formulários misfolded, a concentração do protein
após refolding é relativamente elevada, e é o to
escala acima e automatiza, conseqüentemente é considerado como um eficiente, um
e perto do método refolding ideal [1.2]. Adicionalmente, o has
o potencial ser usado em uma escala industrial ou grande, it
tem-se transformado hoje uma técnica muito popular para a proteína do
da proteína folding.
que refolding pela cromatografia líquida pode ser o simply
nomeado como o da cromatografia líquida de dobradura de proteína do . Ele is
definido como o um tipo da cromatografia líquida, com vário kinds
do originally
dos processos realizado na solução, que pode conduzir a levantar a eficiência do the
, ou em encurtar a época do da dobradura de proteína [3]. o
do
Um PFLC ideal deve ter o seguinte quatro functions
descrito simultaneamente em Fig. 1 [3]. São o removal
dos desnaturalizadores, refolding de proteínas do alvo, proteínas do contaminador do from
da separação que incluem intermediários misfolded da proteína do alvo do the
, e recuperação fácil dos desnaturalizadores. Ele geralmente minuto do 40 do takes
20 para terminar um funcionamento cromatográfico com dobradura de proteína do simultaneous
. Além, continuamente pelo changing
os componentes da fase móvel, proteínas diferentes enlatam o be
separado com circunstâncias de dobramento apropriadas ao refold e o simultaneously
purify em somente um
de run.
usando o método normal da diluição para a dobradura de proteína, desnaturalizadores do
e as proteínas do contaminador não podem ser removidas. Os precipitates de Some
de proteínas do alvo dão forma durante a diluição; este not
conduz somente a uma baixa recuperação, mas igualmente exige o centrifugation
após uma incubação de noite. Conseqüentemente, o must
da proteína do alvo seja processado mais usando o fraccionamento grosseiro e o
de fractionation.
além, usando o método usual da diálise para a dobradura do protein
, toma tipicamente a 24 h ao refold uma proteína, com mudanças do numerous
do amortecedor durante a diálise. Este método pode o remove
mais dos desnaturalizadores, mas não pode completamente removê-los, o and
não pode separar a proteína do alvo do
do contaminador proteins.
nos anos, o Guo e o Geng [4], o Li passados e outros [5], do et
de Jungbauer o al. [6], o Middelberg [2] e o introduced
PFLC de dois livros [3.7] separada e não reviu seu desenvolvimento dos aspectos diferentes. A revisão detalhada de A
deste campo é apresentada nestes papel,
que incluem seus princípios, desenvolvimentos recentes e aplicações, instrumento do
, desenvolvimentos recentes para PFLC na grande escala, o and
que efetua fatores foi sumariado e discussed.

Por que os primeiros 2 ciclos do produto 0 do PCR (reacção em cadeia do Polymerase) alvejam o ADN?

Pessoa curiosa — Tue, 20:16 de 27 outubro 2009: GMT 54

Why faça os primeiros 2 ciclos do produto do PCR (reacção em cadeia do Polymerase) 0 ADN do alvo?

Coexpression dos Chaperones/Foldases faz proteínas de recombinação corretamente dobradas

danfive — Tue, 20:08 de 27 outubro 2009: GMT 05

If você quis nunca o " chaperones" para dobrá-lo corretamente as proteínas de recombinação, verific para fora este artigo: Expression do
de proteínas corretamente dobradas no coil
George Georgiou* e Pascal Valaxt
dos Escherichia --> target= " _blank " do " http://www.sciencedirect.com/science?_ob=MImg&_imagekey=B6VRV-45765VG-2M-1&_cdi=6244&_user=5675017&_orig=search&_coverDate=04/30/1996&_sk=999929997&view=c&wchp=dGLzVzz-zSkWb&md5=6b3e9fb504f0747eb2f7a115cf2650f1&ie=/sdarticle.pdf " do href= do sumário do
de http://www.sciencedirect.com/science.../sdarticle.pdf
: Falha heterologous de muitos polypeptides a dobrar-se em seu estado do native
quando expressado no co~i dos Escherichia; em lugar de, o they
é degradado pelo machinery
ou acumula no formulário insolúvel, tipicamente como corpos do inclusion
. Misfolding é um problema particular vexing na expressão do the
de proteínas mamíferas, especial aquelas que o are
compor de subunits múltiplos, tem diversas ligações de bissulfeto,
ou contem grupos protéticos. Felizmente, as bactérias exibem a plasticidade physiological notável do a
que pode ser o successfully
explorado para melhorar a dobradura de proteína. As proteínas heterologous ativas significativas do of
dos rendimentos foram as estratégias obtidas do through
que incluem a co-expressão de proteínas acessórias de dobramento heterologous homologous do or
, as condições do crescimento do of
da optimização, e o uso de proteínas da fusão. Um flood
dos relatórios recentes que documentam as proteínas eukaryotic complexas bem sucedidas do of
da produção no formulário ativo tem o demonstrated
que as bactérias podem fornecer o ambiente apropriado para a dobradura do the
da maioria vasta de polypeptides.

de recombinação

Armazene a placa de ELISA

freyes — Tue, 19:32 de 27 outubro 2009: GMT 52

Hi todos! O
se eu quero armazenar uma placa de ELISA para fazer o ensaio um outro dia, em que a etapa pode mim o faz, e durante quanto tempo cronometra poderia ser a loja??? Eu significo:
- para armazenar a placa com o antígeno. Lavagem ou não. que temperature.
- com obstrução do amortecedor. Lavagem ou não. que temperature.
eu aprecio realmente suas considerações de answers.
, o
freyes.