Extração do DNA de Arabidopsis das folhas

[Aristotle]

Hey guys,

posso eu começar alguma entrada em como extrair o DNA das folhas de Arabidopsis?

obrigado

[yourlabdata]

Eu tenho um protocolo bom que eu use que é... unfortunatly seu completamente rápido no uni assim que eu terei que afixá-lo em segunda-feira para você.

[danfive]

Está aqui um procedimento que eu me usei no passado:

1. Pese 0.1-0.2 grama de tecido (completamente folhas ~4 trifoliate) no tubo do microfuge 1.5ml. Freeze rápido e grind a pulverizar com pilão azul - não deixe o thaw
amortecedor de 2.Add 0.75ml EB
Amortecedor do EB: 100mM Tris pH8.0
EDTA pH8.0 de 50mM
NaCl de 500mM
10mM beta-Merc-Merc (adicione o everytime fresco beta-merc-merc)
3. Continue misturando até bom misturado e thawed.
4. Adicione 0.05ml 20% SDS, agite-o bem e incubate os tubos em 65C 10min
5. Adicione o acetato do potassium de 0.25ml 5M, agite-o bem e incubate os tubos no gelo (0C) 20min. (o sustento no gelo até todas as amostras lysed).
tubos de 6.Spin em 21,000g para 20min
7.remove w/pipetman supernatant (~1ml) e pano completamente posto do mira no tubo 1.5ml novo.
8. adicione o isopropanol 500ul, inverta-o ao poço da mistura e incubate em -20C para 30min-1hr.
9. DNA da pelota em 21,000g para 15min -- derrame fora das pelotas supernatant e secas invertendo o tubo na toalha de papel para 5min.
10. Redissolve pelotas com 0.7ml TE (50mM Tris, EDTA pH8 de 10mM) agitando; a pelota certificando-se resuspended.
11. Gire o tubo na velocidade máxima para que 10min removam os restos insoluble.
12. Transfira o supernatant ao tubo novo e adicione o acetato do sodium de 75ul 3M e o isopropanol 500ul.
13. Misture bem invertendo e gire para pellet o DNA para 30sec.
14. Lave a pelota com 700ul 80% EtOH -- gire e remova EtOH, ~5min seco invertido na toalha de papel.
15. redissolve em 100ul 10mM Tris, EDTA pH 8.0 de 0.5mM.
16. Deixe para sentar-se SOBRE em 4C.
17. Verifique OD260 e dilua-o para PCR (~1/100 ou 5ng/ul).

Soluções.
750ul/sample -- Amortecedor Do EB: 100mM Tris pH 8.0, EDTA pH 8.0 de 50mM, NaCl de 500mM, beta-beta-mercaptoethanol de 10mM
50ul/sample -- 20%SDS
acetato do potassium de 250ul/sample---5M
700ul/sample---50mM Tris, EDTA pH 8.0 de 10mM
1mL/sample -- isopropanol
75ul/sample -- 3M NaAcetate
700ul/sample -- 80% EtOH
100ul/sample -- 10mM Tris, EDTA pH 8.0 de 0.5mM

Materiais e incubators.
Pilões plásticos azuis.
freezer de -20C
banho da água 65C
refrigerador 4C
Gelo 0C
spectrophotometer
Pano De Mira

[yourlabdata]

A preparação dos edwards parece-me ser muito mais simples... Usa 2 tubos 1.7ml mas o doesnt requer todas as soluções frescas.

Outra vez afixá-lo-á em segunda-feira para você.

[yourlabdata]

Hi!

Para aqueles de você que me perguntou afixaram o protocolo aqui:
Preparações de Edwards (método simples e rápido de A para a preparação do DNA genomic da planta para a análise de PCR)

A versão do pdf dela está disponível aqui:
Edwards Prepara o Pdf

Esperança ajuda a alguém!