Bioinformatics, Protocolos, Proteína Proteomics do RNA do Dna
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O aspecto o mais saddest da direita da vida é agora que a ciência recolhe o conhecimento mais rapidamente do que a sabedoria dos recolhimentos da sociedade. ~Isaac Asimov, livro de Isaac Asimov da ciência e da natureza Citação, 1988
O assay Enzyme-Ligado do immunoSorbent, ou ELISA, são uma técnica biochemical usada principalmente no immunology detectar a presença de um antibody ou de um antígeno em uma amostra. O ELISA foi usado como uma ferramenta diagnóstica na medicina e o pathology de planta, as.well.as um controle de qualidade verifica dentro várias indústrias. Em termos simples, em ELISA um uma quantidade desconhecida de antígeno affixed a uma superfície, e um antibody específico é lavado então sobre a superfície de modo que possa ligar ao antígeno. Este antibody é ligado a um enzyme, e na etapa final uma substância é adicionada que o enzyme possa converter a algum sinal detectável. Assim no exemplo do fluorescence ELISA, quando a luz é brilhada em cima da amostra, todos os complexos de antigen/antibody apresentarão fluorescência de modo que a quantidade de antígeno na amostra possa ser medida.
Executar um ELISA envolve ao menos um antibody com o specificity para um antígeno particular. A amostra com uma quantidade desconhecida de antígeno immobilized em uma sustentação contínua (geralmente uma placa do microtiter do poliestireno) non-specifically (através do adsorption à superfície) ou especificamente (através da captação por um outro específico do antibody ao mesmo antígeno, em um "sanduíche" ELISA). Depois que o antígeno immobilized o antibody da deteção está adicionado, dando forma a um complexo com o antígeno. O antibody da deteção pode covalently ser ligado a um enzyme, ou a lata própria seja detectada por um antibody secundário que seja ligado a um enzyme com o bioconjugation. Entre cada etapa a placa é lavada tipicamente com uma solução detergente suave para remover todas as proteínas ou antibodies que não forem limitados especificamente. Depois que a etapa final da lavagem a placa é desenvolvida adicionando uma carcaça enzymatic para produzir um sinal visível, que indique a quantidade do antígeno na amostra. Um ELISAs mais velho utiliza carcaças chromogenic, embora uns assays mais novos empregam carcaças fluorogenic com sensibilidade muito mais elevada.
Porque o ELISA pode ser executado para avaliar a presença do antígeno ou a presença do antibody em uma amostra, é uma ferramenta útil para determinar concentrações do antibody do serum (como com o HIV test[1 ] ou o vírus ocidental de Nile) e também para detectar a presença do antígeno. Encontrou também aplicações na indústria de alimento em detectar allergens potenciais tais como o leite, amendoins do alimento, nozes, amêndoas, e eggs.[2 ] ELISA pode também ser usado no toxicology como uma tela presuntiva rápida para determinadas classes das drogas.
O teste de ELISA, ou o enzyme immunoassay (EIA), eram o primeiro teste de seleção empregado geralmente para o HIV. Tem uma sensibilidade elevada. Em um teste de ELISA, o serum de uma pessoa é 400-fold diluído e aplicado a uma placa a que os antígenos do HIV foram unidos. Se os antibodies ao HIV estiverem atuais no serum, podem ligar a estes antígenos do HIV. A placa é lavada então para remover todos componentes restantes do serum. "um antibody secundário especialmente preparado" — um antibody que ligue aos antibodies humanos — é aplicado então à placa, seguida por uma outra lavagem. Este antibody secundário é ligado quimicamente adiantado a um enzyme. Assim a placa conterá o enzyme em proporção à quantidade de antibody secundário limitada à placa. Uma carcaça para o enzyme é aplicada, e o catalysis pelo enzyme conduz a uma mudança na cor ou no fluorescence. Os resultados de ELISA são relatados como um número; o aspecto o mais controverso deste teste está determinando o ponto da "interrupção" entre um resultado positivo e negativo.
Um método de determinar um ponto da interrupção é pela comparação com um padrão sabido. Para o exemplo, se um teste de ELISA for usado na seleção da droga do workplace, uma concentração da interrupção (por exemplo, 50 ng/mL da droga) será estabelecida e uma amostra será preparada que contenha essa concentração do analyte. Os desconhecidos que geram um sinal que seja mais positivo do que a amostra sabida são chamados "positivo" e aqueles que geram um sinal mais menos positivo do que a amostra sabida são chamados "negativo.
Antes do desenvolvimento do EIA/ELISA, a única opção para conduzir um immunoassay era radioimmunoassay, uma técnica usando antígenos ou antibodies radioativo-etiquetados. No radioimmunoassay, o radioactivity fornece o sinal que indica se um antígeno ou um antibody específico estão atual na amostra. O radioimmunoassay foi descrito primeiramente em um papel por Rosalyn Sussman Yalow e em Solomon Berson publicado em 1960[3 ].
Porque o radioactivity poses uma ameaça da saúde, uma alternativa mais segura foi procurada. Uma alternativa apropriada ao radioimmunoassay substituiria um sinal non-radioactive no lugar do sinal radioativo. Quando determinados enzymes (tais como o peroxidase) reagirem com as carcaças apropriadas (tais como ABTS ou 3.3’, 5, 5’- Tetramethylbenzidine), podem resultar nas mudanças na cor, que pode ser usada como um sinal. Entretanto, o sinal tem que ser associado com a presença do antibody ou do antígeno, que é porque o enzyme tem que ser ligado a um antibody apropriado. Este processo ligando foi desenvolvido independentemente por Stratis Avrameas e por G.B. Pierce[4 ]. Desde que é necessário remover todo o antibody ou antígeno unbound lavando, o antibody ou o antígeno têm que ser reparados à superfície do recipiente, isto é o immunosorbent tem que ser preparado. Uma técnica para realizar isto foi publicada por Largo e por Porath em 1966[5 ]
Em 1971, em Peter Perlmann e em Eva Engvall na universidade de Éstocolmo em Sweden, assim como Anton Schuurs e Bauke camionete Weemen nos Países Baixos, papéis independentemente publicados que synthesized este conhecimento em métodos para executar EIA/ELISA[6][7 ]
Vídeo Do Assay de ELISA
Vídeo do assay de ELISA. A determinação de Chlorpyriphos methyl em amostras do trigo pelo enzyme ligou o assay ELISA do immunosorbent de zuhaitz77.
Adicionado perto: oBWhat
Tag: immunosorbent ligado do assay enzyme elisay
Data: 2008-05-04
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