síntese do cDNA

Aprenda sobre a síntese do cDNA.

síntese do cDNA

os cDNAs são sintetizados usando o molde maduro do mRNA em uma reação catalítica usando o transcriptase do reverso da enzima (RTase).

diagrama da síntese do cDNA

retrato da síntese do cDNA

síntese do cDNA

O transcriptase reverso opera-se usando uma única costa do mRNA e gera-se o ADN complementar baseado no emparelhamento de pares da base do RNA (A, U, G e C) e os traduzem a seus complementos do ADN (T, A, C e G respectivamente).

Para obter o cDNA eukaryotic cujos os introns foram emendados:

As pilhas Eukaryotic transcrevem o ADN (dos genes) no RNA (pre-mRNA) - este são o processo de transcrição.
A costa pre-mRNA é processada então emendando para fora introns
Uma cauda de poly-A e ' um tampão da Metílico-Guanina 5 são adicionados igualmente ao mRNA.
Amixture de costas maduras do mRNA é extraído da pilha.
Uma primeira demão poli-T do oligonucleotide é cruzada na cauda de poly-A do molde maduro do mRNA, ou as primeiras demão aleatórias do hexamer podem ser adicionadas que contêm cada 6 possíveis única costa baixa do ADN e podem conseqüentemente cruzar em qualquer lugar no RNA (o transcriptase reverso exige este double-
segmento encalhado como uma primeira demão para começar sua operação.)
O transcriptase reverso é adicionado, junto com os triphosphates do deoxynucleotide (A, T, G, C).
a costa do RNA é digerida afastado usando RNAseH
O PCR é usado para fazer o único cDNA encalhado double-stranded