biblioteca do cDNA

Aprenda sobre bibliotecas do cDNA.

bibliotecas do cDNA

as bibliotecas do cDNA ou as bibliotecas complemantary do ADN são uma coleção de fragmentos clonados do cDNA. as bibliotecas do cDNA são ferramentas poderosas e úteis porque podem conter toda a informação da codificação (o código genético que produz proteínas) de uma população dada da pilha.

geração da biblioteca do cDNA

diagrama das bibliotecas do cDNA de como gerá-los

retrato da síntese do cDNA

O RNA precisa de ser isolado primeiramente de uma população da pilha. Diversos métodos são de uso geral a fim purify o RNA, estes incluem métodos de coluna baseados jogo do polyA e outros métodos químicos tais como a extração do trizol. Um poly- (A) a cauda (que consiste em uma seqüência de repetição longa de nucleotides da adenina) é usada em pilhas eukaryotic como um local da primeira demão para a transcrição reversa. o cDNA é criado do mRNA maduro usando a enzima reversa do transcriptase que gera o ADN complementar do RNA. Isto igualmente permitem a escorva específica dos mRNAs e o não outro RNAs enquanto os mRNAs contêm uma cauda de poly-A ' a extremidade nos seus 3. Uma vez que o mRNA é isolado, oligo-descolamento ou as primeiras demão aleatórias podem ser usados com transcriptase reverso para criar moldes do cDNA. Os endonucleases da limitação e a ligase do ADN são usados então para clonar as seqüências do cDNA em plasmídeo bacterianos.

Depois que o cDNA é sintetizado, está clonado em vetores ou em plasmídeo da expressão. Estes plasmídeo cada um cDNA de contenção são transformados nas pilhas competentes bacterianas (feitas competente por uma variedade do produto químico ou os outros métodos a fim permitir que peguem o plasmídeo com o cDNA). Estes plasmídeo são amplificados então nas bactérias crescentes. Os clone das bactérias são selecionados então de modo que somente as bactérias que contêm o plasmídeo sobrevivam. Isto é feito geralmente com a seleção antibiótica da resistência.

Uma vez que as bactérias são selecionadas, os estoques das bactérias estão criados que podem mais tarde ser crescidas e arranjado em seqüência para compilar uma biblioteca do cDNA.