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Protocolo Do Método Do Lysis Da Pilha

Informação na técnica do lysis da pilha aqui.

Índice dos métodos do lysis da pilha

• Que é lysis da pilha?
• Definição
• Fundo
• Aplicações
• Limitações
• Fatores a considerar para o lysis celular
• Protocolo
• Electrophoresis Videos Do Gel Do Agarose
• Outros Protocolos Do Lysis Da Pilha
• Lysis De Pesquisa de defeitos Da Pilha
• Tópicos da discussão para o lysis da pilha
• Comece a ajuda em seu problema do lysis da pilha

Que é lysis da pilha?

O lysis da pilha ou o rompimento celular são um método da biologia da pilha para a liberação de moléculas biológicas including os organelles, as proteínas, o DNA, o RNA e os lipids dentro de uma pilha.

Fundo no lysis da pilha?

Para a maioria de pilhas, a osmose suave é geralmente bastante ao lyze as pilhas. Isto é feito abaixando a força ionic da solução circunvizinha, fazendo com que as pilhas inchem e o estouro que libera seus índices.

Os surfactans suaves são usados frequentemente além aos métodos mecânicos do lysis.

Os métodos mecânicos ou físicos do lysis incluem:

• agitation mecânico
• pressão
• sonication
• bomba do nitrogênio ou método do lysis do estouro do nitrogênio
• ultrasound com pontas de prova pequenas

Estas etapas são conduzidas para assegurar completo dissociate da pilha e de seus componentes celulares including a avaria das membranas organellar e nucleares.

devido aos custos elevados de crescer pilhas, geralmente somente um pouco de material celular está disponível. É assim necessário ser eficiente ao lysing pilhas assegurar o máximo do material usable é obtido. Frequentemente, diversos métodos são usados na combinação assegurar o lysis quase completo.

Aplicações do lysis da pilha

O lysis da pilha é vital para a extração do DNA, do RNA e das proteínas das pilhas. Conseqüentemente, é necessitado em a maioria de técnicas da biologia da pilha e mesmo em técnicas molecular da biologia.

Limitações do lysis da pilha

O lysis da pilha está limitado em seu uso enquanto requer a membrana da pilha ser perfurado e os índices da pilha a ser liberados. Estas pilhas lysed morrem e não podem ser cultivadas ou crescido outra vez.

Fatores a considerar para o lysis da pilha

Há muitos fatores para considerar que método do lysis da pilha a se usar ou como o conduzir.

Volume das pilhas

A quantidade de pilhas a lyse é um parâmetro importante no lysis da pilha. Se você tiver somente muito

Se somente alguns microlitros da amostra estiverem disponíveis, cuidado deve ser tomado para minimizar a perda e para evitar o cross-contamination.

O rompimento das pilhas, quando as centenas ou mesmo os milhares dos litros do material estão sendo processados em um ambiente da produção, apresenta um desafio diferente. O throughput, a eficiência, e o reproducibility são fatores chaves.

Número de amostras da pilha a Lyze

Frequentemente há muitas amostras da pilha ao lyze. Há muitas edições para considerar quando fazendo isto including a contaminação transversal das amostras, a velocidade de processar, e a limpeza do equipamento após cada amostra lysed.

Dificuldade das pilhas a Lyze

Algumas pilhas são completamente difíceis de lyse. Enquanto a dificuldade do lysis aumenta, uma força mais grande do lysis ou uma força ionic mais elevada dos amortecedores estão requeridas para disrupt eficientemente as pilhas.

Para o lysis mais difícil de amostras da pilha tais como amostras do fermento, há um aumento íngreme na potência processando, no tempo e no custo requeridos.

Para as amostras as mais difíceis ao lyze, tal como os spores bacterianos, estes requerem as forças mecânicas combinadas com os esforços químicos ou enzymatic. O problema é uniforme com múltiplo e uns métodos mais ásperos, geralmente um conseguem eficiências limitadas do rompimento.

Eficiência do lysis da pilha

Dependendo de que parte da pilha, o organelle ou fraction o necessidade isolar-se, sobre-over-lysis pode afetar seu produto desejado.

Se o fractionation subcellular for usado, é mais importante ter um lysis delicado para conseguir componentes subcellular intatos de um organelle. Obviamente, você conseguirá uma eficiência mais baixa do lysis e assim requererá mais pilhas. Para escalar estes processesses do lysis da pilha, o momento de disrupt as pilhas e o reproducibility do método transformam-se uns fatores mais importantes.

Lysis da pilha contra a molécula a ser isolada

É muito importante cater o método do lysis à proteína que você necessita isolado. Se for uma proteína nuclear, importe-se está requerido para lyse primeiramente a pilha e para isolar então a membrana nuclear. Depois que a membrana nuclear é isolada, a seguir uma pode lyse a membrana nuclear e liberar a molécula do interesse. Esta metodologia diminui a contaminação das moléculas que são do outro compartments/organelles celular.

Além disso, dependendo da molécula cuidado deve ser tomado ao uso ou não soluções ou métodos do lysis do uso as determinados. Para o exemplo, se você estiver tentando isolar um phospho-protein que seja sensível aos phosphatases, não é uma idéia boa lyse e expo o phospho-protein aos milhares dos proteases e dos enzymes do phosphatase. Proteger sua molécula das circunstâncias ásperas ou enzymatic é importante. A temperatura (temperatura baixa do lysis), e o uso de moléculas inhibitory (tais como inibidores do protease e do phosphatase) são importantes nestes casos do lysis.