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Subculturing Pilhas - Cultura De Pilha

Cultura De Pilha

Protocolo Do Subculture Da Pilha

SUBCULTURING PILHAS

 

Comece os media 4C de DMEM; Trypsin-20C; BSA-20C;

Ponha em 36mL de DMEM no plástico cónico do tubo

Adicione 4mL de media de BSA a 36mL DMEM;

Comece o syringe e o filtro;

Sugue acima dos media com syringe.  Adicione o filtro. 

Elimine media através do filtro no syringe.

Repita duas vezes para começar todo o volume. 

Ponha no tubo plástico novo cónico. 

Remova os media velhos despejando na taça; NÃO USE O ASPIRADOR (comece a contaminação!!)

Adicione o typsin 3mL à cultura.  Trypsin com pilhas da tração fora do recipiente da cultura.

Ponha o recipiente no incubator.  Espere 2 minutos; Remova;  olhe no microscópio. 

Tente começar menos clumps.  Pilhas mais individuais.

Remova a maioria do trypsin despejando na taça.

Ponha  para trás no incubator. Verifique freqüentemente.

Golpeie o recipiente em lados para verificar o fundo para ver se há menos clumps; olhe no microscópio.

Quando veja muitas pilhas individuais flutuar longitudinalmente; Grande!

Adicione media ao recipiente maior; diluição 1:5/ de 1:3 (3-5 recipientes maiores).

Adicione 10mL a (recipiente de T75)large, 5mL a (recipiente de T25)small.

Sugue para fora de a maioria (5mL das pilhas de T25). Adicione a T75.

Deixe algumas pilhas no recipiente pequeno.  Adicione media ao recipiente pequeno.  Verifique dentro o microscópio para ver se há únicas pilhas;  Incubate no incubator 37C. 

 

Veja outros Pilha-protocolos em nosso diretório da biologia da pilha e do protocolo da cultura de pilha.