Bioinformatics, Protocols, DNA RNA Protein Proteomics Bioinformatyka, protokoły, DNA, RNA Białko Proteomika

Biology Home Protocols Bioinformatic Tools Biology Forums Molecular Biology Encyclopaedia Molecular Biology Images Bookmark Us! Strona główna Biologia protokoły bioinformatycznych narzędzi Biologia Forum Biologii Molekularnej Encyklopedia Biologii Molekularnej Obrazy Bookmark Us!

home > protein > protein-purification > index.php Strona główna> białka> białka oczyszczania> index.php

Molecular Biology Home Science News Science Videos DNA RNA Protein Proteomics Research BETA! Bioinformatics Lab Equipment Molecular Biology Techniques Molecular Biology Products and Services Related Biology Links Biologii Molekularnej Strona główna Wiadomości Nauka Nauka filmy DNA, RNA Białko Proteomika Badania BETA! Bioinformatics Lab Equipment Techniki Biologii Molekularnej Biologii Molekularnej produkty i usługi związane Biologia Linki

Molecular Biology Blog Biologii Molekularnej Blog

Send this page to a friend Wyślij tę stronę znajomemu

Intracellular Stations Stacje wewnątrzkomórkowa

Antibody Botany Common Buffers Buffers Alphabetic Bookstore Cell Biology and Culture Gel Electrophoresis Histology Microarrays Immunology Mass Spectrometry Microbiology Molecular Imaging Peptide Proteomics Protein Microarray Chips PCR Real-Time PCR RNAi and SiRNA Stem Cell Biology Transfection Western Blot Przeciwciało Botanika Wspólnej Zderzaki Zderzaki Alfabetyczna Księgarnia Biologii Komórki i Kultury elektroforeza Histologii Microarrays Immunologia Spektrometrii Mas Mikrobiologii obrazowanie molekularne Peptide Proteomika Protein Microarray Chips PCR, Real-Time PCR RNAi i SiRNA Stem Cell Biology Transfekcja Western Blot

Immunoprecipitation Protocols Immunoprecipitation Protokoły	Immunoprecipitation Protocol Directory (external links) Immunoprecipitation Protokół Directory (linki zewnętrzne)	Troubleshoot Immunoprecipitation Rozwiązywanie problemów Immunoprecipitation	Learn about Immunoprecipitation Dowiedz się więcej na temat Immunoprecipitation

Protein Purification Oczyszczanie białka

Copyright 2006 Molecular Station Copyright 2006 Molekularnej Station

Protein purification is vital in the characterisation of your protein of interest. Białko oczyszczania jest niezbędna w swojej charakterystyki białka zainteresowania. Purification of your protein allows one to study the function of the protein, and its enzymatic activity. Oczyszczanie swoje białka pozwala na badanie funkcji białka, a jej aktywność enzymatyczną. Stuctural information from the protein can also be obtained from purified proteins including NMR, 3-D information such as protein crystallization. Stuctural informacje z białek można również uzyskać od oczyszczonego białka w tym NMR, 3-D informacje, takie jak białka krystalizacji.

So how does one go about purifying a protein? Więc w jaki sposób można przejść na temat oczyszczania białka?

Proteins can be purified according to size, solubility, Charge and Binding affinity Białka mogą być oczyszczane według wielkości, rozpuszczalność, opłat i wiążącą powinowactwo

Proteins can readily be visualized and differentiated by electrophoresis methods.  Theses gel techniques can also be used to obtain small quantities (micrograms) of purified polypeptides.  However, they do not provide large amounts of purified proteins in their native state.  Substantial quantities of purified proteins, of the order of many milligrams, are needed to elucidate fully their three-dimensional structure and their mechanism of action.  Several thousand proteins have been purified in active form on the basis of such characteristics as size, solubility, charge and specific binding affinity.  At each step in purification, the preparation is assayed for a distinctive property of the protein of interest (eg enzymatic activity) to assess the efficacy of the procedure. Białka mogą być łatwo widoczne i zróżnicowana w zależności od metody elektroforezy. Teza żel techniki mogą być także wykorzystywane w celu uzyskania niewielkich ilościach (mikrogramów) oczyszczonego polipeptydów. Jednakże, nie zapewniają one duże ilości oczyszczonego białka w ich ojczystym kraju. Znaczne ilości oczyszczonego białka Z rzędu wielu miligramów, potrzebne są do ich wyjaśnienia w pełni trójwymiarowej struktury i mechanizmu ich działania. Kilka tysięcy białek zostały oczyszczone w formie aktywnych na podstawie takich cech jak rozmiar, rozpuszczalność, opłat i szczególne powinowactwo wiążące. Na każdym kroku w oczyszczenia, przygotowania się do zbadanego wyróżniające właściwości białka zainteresowania (np. aktywność enzymatyczną) do oceny skuteczności tej procedury.

Proteins can be separated from small molecules by dialysis through a semi-permeable membrane, such as cellulose membrane with pores.  Molecules having dimensions significantly greater than the pore diameter are retained inside the dialysis bag, wwhereas smaller molecules and ions traverse the pores of such a membrane and emerge in the dialysis outside the bag. Białka mogą być oddzielone od małych cząsteczek przez dializowanych przez pół-przepuszczalności membrany, takie jak membrana z celulozy pory. Molecules o wymiarach znacznie większy niż średnica poru są zatrzymywane wewnątrz worka dializy, wwhereas mniejsze cząsteczki i jony traverse pory takiego membrana i emerge w dializy poza torebkę.

More discriminating separation on the basis of size can be achieved by the technique of gel-filtration chromatography.  The sample is applied to the top of the column consisting of porous beads made of an insoluble but highly hydrated polymer such as dextran or agarose (which are carbohydrates) or polyacrylamide.  Sephadex, Sepharose, and Bio-gel are commonly used commercial preparations of these beads, which are typically 100 micrometers in diameter.  Small molecules can enter these beads but large ones cannot.  The result is that small molecules are distributed both in the aqueous solution inside the beads and between them, whereas large molecules are located only in the solution between the beads.  Large molecules flow more rapidly through this column and emerge first, because a smaller volume is accessible to them.  It should be noted that the order of emergence of molecules from a column of porous beads is the reverse of the order in gel electrophoresis, in which a continuous polymer framework impedes the movement of large molecules.  Much larger quantities of protein can be separated by gel filtration chromatography than by gel electrophoresis but at the price of lower resolution. Więcej dyskryminującego separacja na podstawie wielkości mogą być osiągnięte przez techniką żel-filtracji chromatografii. Próbki stosuje się do górnej części kolumny składające się z porowatego paciorki wykonane z nierozpuszczalnych uwodnionych ale bardzo zręczny, takich jak polimer lub agarozy (które są węglowodany) lub poliakrylamidowym. Sephadex, Sepharose, Bio-żel i są powszechnie wykorzystywane w komercyjnych preparatów tych perełek, które są zazwyczaj 100 mikrometrów średnicy. drobnych cząsteczek mogą wprowadzić tych perełek duże, ale nie może. Wynikiem tego jest fakt, że małe cząsteczki są dystrybuowane zarówno w roztworze wodnym wewnątrz kulek i między nimi, podczas gdy duże cząsteczki znajdują się tylko w roztworze między kulki. dużych cząsteczek przepływu szybciej dzięki tej kolumnie i emerge pierwsze, ze względu na mniejsze wielkości jest dla nich dostępny. Należy zauważyć, że kolejności pojawiania się cząsteczek z kolumny porowatych perełek jest w odwrotnej kolejności, w elektroforeza, które w sposób ciągły polimeru ramach utrudnia przepływ dużych cząsteczek. Dużo większe ilości białka mogą być oddzielone przez żel filtracji chromatografii niż żel elektroforezy, ale za cenę niższą rozdzielczość.

The solubility of most proteins is lowered at high salt concentrations.  This effect, called salting out, is very useful, though not well understood.  The dependence of solubility on salt concentration differs from one protein to another.  Hence salting out can be used to fractionate proteins.  Salting out is also useful for concentrating dilute solutions of proteins. W rozpuszczalność większości białek jest obniżony przy wysokim stężeniu soli. Zjawisko to, zwane solenie, jest bardzo przydatne, choć nie dobrze rozumiane. Zależność rozpuszczalności soli w sprawie koncentracji białka różni się od jednego do drugiego. Solenie Stąd obecnie mogą być używane do fractionate białek. Solenie obecnie jest również użyteczne dla rozwiązań, koncentrując się rozcieńczyć białek.

Copyright 2006 Molecular Station Copyright 2006 Molekularnej Station