Welcome to Molecular Station! Zapraszamy do Molekularnej Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musisz się zarejestrować zanim będziesz mógł umieścić na naszym forum lub skorzystać z zaawansowanych funkcji. Register Now! Zarejestruj się teraz! Its Free and Fast! Jego Darmowy i Fast!

Already registered? Już zarejestrowany? Login now below. Zaloguj się poniżej.

User Name: Nazwa użytkownika:

Password: Hasło:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Już zarejestrowany i Zapomniałeś hasła? Click below to recover it. Kliknij poniżej, aby ją odzyskać.

Recover Lost Password Odzyskaj Nie pamiętam hasła

Join now - it's fast and free! Dołącz teraz - szybko i za darmo!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekularnej Station to największa sieć badaczy, naukowców i miłośników nauki w dowolnym miejscu!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Protein Protocols Protein Protocols

Protein Encyclopedia Białko Encyklopedia

Protein Bioinformatics Protein Bioinformatics

Protein Science Forum Protein Science Forum

Protein Blog Białko Blog

DNA News DNA Aktualności

Lowry Protein Assay Protocol Lowry białka Oznaczenie Protokół

Protein Concentration Determination by the Lowry Prtoein Assay Protocol Stężenie białka Określenie przez Lowry Prtoein Oznaczenie Protokół

Materials Materiały

1. Complex-forming reagent: Prepare immediately before use by mixing the following stock solutions in the proportion 100:1:1 (by vol), respectively: Kompleks tworzących odczynnika: Przygotować bezpośrednio przed użyciem przez zmieszanie z następujących rozwiązań w stanie proporcjonalnie 100:1:1 (obj), odpowiednio:
Solution A: 2% (w/v) Na2CO3 in distilled water. Roztwór A: 2% (w / v) w wodzie destylowanej Na2CO3.
Solution B: 1% (w/v) CuSO4·5H2O in distilled water. Roztwór B: 1% (w / v) CuSO4 5H2O w wodzie destylowanej.
Solution C: 2% (w/v) sodium potassium tartrate in distilled water. Roztwór C: 2% (w / v) winianu potasu sodu w wodzie destylowanej.

2. Prepare 2 N NaOH. Przygotować 2 N NaOH.

3. Folin reagent (commercially available): Use at 1 N concentration. Folin odczynnika (dostępny komercyjnie): Wykorzystanie w 1 N koncentracji.

4. Standards: Use a stock solution of standard protein (eg, bovine serum albumin fraction V) containing 2 mg/mL protein in distilled water, stored frozen at –20°C. Standardy: Użycie standardowego roztworu białka (np. albuminy surowicy bydlęcej frakcja V) zawierające 2 mg / ml białka w wodzie destylowanej, zamrożone w temperaturze -20 ° C. Prepare standards by diluting the stock solution with distilled water as follows: Przygotowanie standardów przez rozcieńczenie roztworu w wodzie destylowanej w następujący sposób:

Stock solution   (µL)     0         2.5      5          12.5     25        50        125      250      500 Roztwór (μ l) 0 2,5 5 12,5 25 50 125 250 500

Water                (µL)     500      498     495      488      475      450      375      250      0 Woda (μ l) 500 498 495 488 475 450 375 250 0
Protein conc. Protein Conc.    (µg/mL) 0          10       20        50        100      200      500      1000    2000 (μ g / ml) 0 10 20 50 100 200 500 1000 2000

Method Metoda

1. To 0.1 mL of sample or standard, add 0.1 mL of 2 N NaOH. Do 0,1 ml próbki lub standardowe, dodać 0,1 ml 2 N NaOH. Hydrolyze at 100°C for 10 min in a heating block or boiling water bath. Hydrolyze w temperaturze 100 ° C przez 10 minut w bloku grzejnym lub wrzącej łaźni wodnej.

2. Cool the hydrolysate to room temperature and add 1 mL of freshly mixed complex-forming reagent. Cool hydrolizat do temperatury pokojowej i dodać 1 ml świeżo mieszane złożone tworzące odczynnika. Let the solution stand at room temperature for 10 min. Niech roztworu w temperaturze pokojowej przez 10 min.

3. Add 0.1 mL of Folin reagent, using a vortex mixer, and let the mixture stand at room temperature for 30–60 min (do not exceed 60 min). Dodać 0,1 ml odczynnika folin, za pomocą miksera wirowych, i niech mieszaniny w temperaturze pokojowej na 30-60 minut (nie przekraczać 60 min).

4. Read the absorbance at 750 nm if the protein concentration was below 500 µg/mL or at 550 nm if the protein concentration was between 100 and 2000 µg/mL. Przeczytaj absorbancję przy 750 nm, jeżeli stężenie białka było poniżej 500 μ g / ml lub 550 nm, jeżeli stężenie białka było między 100 a 2000 μ g / ml.

5. Plot a standard curve of absorbance as a function of initial protein concentration and use it to determine the unknown protein concentrations. Działka standardowej krzywej absorbancji w funkcji początkowej koncentracji białka i użyć go w celu określenia stężenia białka nieznane.

Lowry Method References Metoda Lowry Referencje

Based on protocol by Jakob H. Waterborg. Na podstawie protokołu przez H. Jakob Waterborg.

Lowry et al. J. Lowry et al. J. Biol. Biol. Chem . Chem. 193: 265-275 (1951) 193: 265-275 (1951)

Related Protein Concentration Articles Podobne stężenie białka Artykuły

Lowry Method Protocol Protokół Metoda Lowry

Protein Concentration Stężenie białka

Protein Concentration Protocol Stężenie białka Protokół

Lowry Protein Assay Oznaczenie białka Lowry

Bradford Assay Bradford Oznaczenie

Bradford Assay Protocol Bradford Oznaczenie Protokół

Protein Articles: Białko:

Western Blot Home Western Blot Strona główna

Immunoprecipitation Home Immunoprecipitation Strona główna