Bioinformatics, Protocols, DNA RNA Protein Proteomics Bioinformatyka, protokoły, DNA, RNA Białko Proteomika

Biology Home Protocols Bioinformatic Tools Biology Forums Molecular Biology Encyclopaedia Molecular Biology Images Bookmark Us! Strona główna Biologia protokoły bioinformatycznych narzędzi Biologia Forum Biologii Molekularnej Encyklopedia Biologii Molekularnej Obrazy Bookmark Us!

home > protein > immunoprecipitation-protocol > index.php Strona główna> białka> immunoprecipitation-protocol> index.php

Molecular Biology Home Science News Science Videos DNA RNA Protein Proteomics Research BETA! Bioinformatics Lab Equipment Molecular Biology Techniques Molecular Biology Products and Services Related Biology Links Biologii Molekularnej Strona główna Wiadomości Nauka Nauka filmy DNA, RNA Białko Proteomika Badania BETA! Bioinformatics Lab Equipment Techniki Biologii Molekularnej Biologii Molekularnej produkty i usługi związane Biologia Linki

Molecular Biology Blog Biologii Molekularnej Blog

Send this page to a friend Wyślij tę stronę znajomemu

Intracellular Stations Stacje wewnątrzkomórkowa

Antibody Botany Common Buffers Buffers Alphabetic Bookstore Cell Biology and Culture Gel Electrophoresis Histology Microarrays Immunology Mass Spectrometry Microbiology Molecular Imaging Peptide Proteomics Protein Microarray Chips PCR Real-Time PCR RNAi and SiRNA Stem Cell Biology Transfection Western Blot Przeciwciało Botanika Wspólnej Zderzaki Zderzaki Alfabetyczna Księgarnia Biologii Komórki i Kultury elektroforeza Histologii Microarrays Immunologia Spektrometrii Mas Mikrobiologii obrazowanie molekularne Peptide Proteomika Protein Microarray Chips PCR, Real-Time PCR RNAi i SiRNA Stem Cell Biology Transfekcja Western Blot

Protein Protocols Protein Protocols

Protein Encyclopedia Białko Encyklopedia

Protein Bioinformatics Protein Bioinformatics

Protein Science Forum Protein Science Forum

Protein Blog Białko Blog

DNA News DNA Aktualności

Immunoprecipitation Protocol Protokół Immunoprecipitation

Immunoprecipitation and protocols. Immunoprecipitation i protokołów.

Basic Immunoprecipitation Protocol IP: Podstawowe Immunoprecipitation protokołu IP:

1. Treat your cells Podaruj komórek

2. Harvest cells by adding 500 uL of solubilizing buffer, scrape and pass through syringe a 21-gauge needle X5 times to homogenize. Harvest komórek poprzez dodanie 500 uL z solubilizing bufor, scrape i przechodzą przez strzykawkę 21-gauge needle X5 razy do homogenizować.

3. Conduct a TCA precipitation (this will be used to normalize if you radiolabeled the cells eg with S-35) Przeprowadzenie TCA opady (ten będzie używany do normalize jeśli radiolabeled komórki np. z S-35)

4. Pre-clearing: Pre-clear by adding 2 uL of X, mouse or rabbit or goat serum ( where X is the animal species in which the primary antibody was raised ) to whole samples and incubate in a rotator for 30 minutes at room temperature. Pre-rozrachunkowe: Pre-jasne, poprzez dodanie 2 ul X, myszy, królików i kóz lub surowicy (gdzie X jest gatunków zwierząt, w których głównym przeciwciałem został podniesiony) i do całej próbki inkubować w rotor na 30 minut w temperaturze pokojowej.

5. Remove X serum by incubating with 30 uL immunoprecipitin with 30 minutes rotation at room temperature. Usuń X surowicy przez incubating z 30 uL immunoprecipitin rotacji z 30 minut w temperaturze pokojowej.

6. Centrifuge samples for 3 minutes at 13, 000 rpm. Wirować próbki do 3 minut na 13, 000 obr. / min.

7. After centrifugation, add 5 uL of primary antibody ( X anti-Y specific protein, where Y is the antibody raised in an animal for your protein of interest) to the supernatants and incubate overnight at 4 degrees C. Po odwirowaniu, dodać 5 ul pierwotnych przeciwciał (anty-X Y specyficzne białka, gdzie Y jest przeciwciało poruszonych w białka zwierzęcego dla Twojego zainteresowania) do supernatants i inkubować przez noc w temperaturze 4 ° C.

8. Add 100 uL of immunoprecipitin to samples. Dodać 100 uL z immunoprecipitin do próbki. Alternatively you can use Zysorbin (Invitrogen). Alternatywnie możesz użyć Zysorbin (Invitrogen). (Zysorbin requires some minor changes to the protocol) (Zysorbin wymaga pewnych drobnych zmian do Protokołu)

9. Centrifuge at 13, 000 rpm for 3 minutes. Wirować przy 13, 000 obr. / min do 3 minut. Remove the supernatant. Usunąć nadsącz.

10. Wash pellet 3 X with 1 mL of cold IP wash buffer (add protease inhibitors to wah buffer prior to use) with shaking for 5-10 minutes between each wash. Umyć osadu 3 x 1 ml zimnej IP buforowy (inhibitory proteazy dodać do kaczki bufor przed użyciem) wstrząsając od 5-10 minut dla każdego mycia.

11. Use this pellet to run on a SDS-PAGE gel. Użyj tego osadu do uruchomienia na żelu SDS-PAGE. You can add SDS Sample Buffer (protein loading buffer) to this and load on gel directly after boiling. Możesz dodać SDS Sample Buffer (bufor załadunku białka) do tego obciążenia i na żel bezpośrednio po gotowaniu.

©2005 Molecularstation.com © 2005 Molecularstation.com