Welcome to Molecular Station! Zapraszamy do Molekularnej Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musisz się zarejestrować zanim będziesz mógł umieścić na naszym forum lub skorzystać z zaawansowanych funkcji. Register Now! Zarejestruj się teraz! Its Free and Fast! Jego Darmowy i Fast!

Already registered? Już zarejestrowany? Login now below. Zaloguj się poniżej.

User Name: Nazwa użytkownika:

Password: Hasło:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Już zarejestrowany i Zapomniałeś hasła? Click below to recover it. Kliknij poniżej, aby ją odzyskać.

Recover Lost Password Odzyskaj Nie pamiętam hasła

Join now - it's fast and free! Dołącz teraz - szybko i za darmo!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekularnej Station to największa sieć badaczy, naukowców i miłośników nauki w dowolnym miejscu!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Bookmark Bookmark Site Zakładka Zakładka Site

Bradford Protein Assay Bradford białka Oznaczenie

Protein Concentration Determination by the Bradford Assay Stężenie białka Określenie przez Bradford Oznaczenie

A simple procedure for the determination of protein concentration in solutions is the Bradford protein assay which was described first by Bradford (Bradford et al., 1976). A prostą procedurę w celu określenia stężenia białka w roztworach jest Bradford białka teście, który został opisany po raz pierwszy przez Bradford (Bradford et al., 1976).

An estimation of protein concentration is essential to be done rapidly and accurately in many fields of protein study. Oszacowanie stężenia białka jest niezbędne do zrobienia szybko i dokładnie w wielu dziedzinach badań białka. The Bradford assay has become the preferred method for quantifying protein in many laboratories. W teście Bradford stała się preferowaną metodą ilościową białka w wielu laboratoriach. This technique is simpler, faster, and more sensitive than the Lowry method. Ta technika jest prostszy, szybszy i bardziej wrażliwe niż metodą Lowry. Furthermore, when compared with the Lowry method, it is subject to less interference by common reagents and nonprotein components of biological samples. Ponadto, w porównaniu z metodą Lowry, objęty jest mniej zakłóceń przez wspólne odczynników i nonprotein składników próbek biologicznych.

The Bradford assay relies on the binding of the dye Coomassie Blue G-250 to protein. W teście Bradford opiera się na wiązanie barwnika Coomassie Blue G-250 do białka.

Detailed studies indicate that the free dye can exist in four different ionic forms for which the pKa values are 1.15, 1.82, and 12.4. Szczegółowe badania wskazują, że wolne barwnika mogą występować w czterech różnych formach jonowych, dla których PKA wartości 1,15, 1,82 i 12,4. Of the three charged forms of the dye that predominate in the acidic assay reagent solution, the more cationic red and green forms have absorbance maxima at 470 nm and 650 nm, respectively. Spośród trzech opłata formy barwnika, które dominują w teście kwasowy roztworu odczynnika, kationowe bardziej czerwony i zielony formy absorbancji maksima przy 470 nm i 650 nm, odpowiednio. In contrast, the more anionic blue form of the dye, which binds to protein, has an absorbance maximum at 590 nm. W przeciwieństwie do tego, anionowe bardziej niebieski postaci barwnika, co wiąże się z białkami, posiada maksymalną absorbancji przy 590 nm.

Thus, the quantity of protein can be estimated by determining the amount of dye in the blue ionic form. W związku z tym ilość białka może być oszacowane poprzez ustalenie kwoty niebieskiego barwnika w postaci jonowych. This is usually achieved by measuring the absorbance of the solution at 595 nm. Jest to zwykle osiągane poprzez pomiar absorbancji roztworu przy 595 nm.

The dye appears to bind most readily to arginyl and lysyl residues of proteins. Barwnika wydaje się najbardziej wiążą się łatwo i arginyl lizylo pozostałości białek. This specificity can lead to variation in the response of the assay to different proteins, which is the main drawback of the method. Ta specyfika może doprowadzić do zmian w odpowiedzi z testu na różnych białek, która jest główną wadą tej metody. The original Bradford assay shows large variation in response between different proteins. Oryginał Bradford assay wykazuje duże zróżnicowanie w odpowiedzi między różnymi białkami. Several modifications to the method have been developed to overcome this problem. Kilka zmian do metody zostały opracowane w celu rozwiązania tego problemu.

However, these changes generally result in a less robust assay that is often more susceptible to interference by other chemicals. Jednakże, zmiany te generalnie wynik w teście mniej solidnego, który jest często bardziej podatne na zakłócenia przez inne chemikalia. Consequently, the original method devised by Bradford remains the most convenient and widely used formulation. W związku z tym oryginalnym metody opracowane przez Bradford pozostaje najbardziej wygodny i powszechnie używane sformułowania. Two types of assay are described here: the standard assay, which is suitable for measuring between 10 and 100 µg of protein, and the microassay, which detects between 1 and 10 µg of protein. Dwa rodzaje testu są opisane tutaj: standardowego testu, który jest odpowiedni dla pomiaru między 10 a 100 μ g białka, a microassay, które wykrywa się między 1 i 10 μ g białka. The latter, although more sensitive, is also more prone to interference from other compounds because of the greater amount of sample relative to dye reagent in this form of the assay. Ten ostatni, choć bardziej wrażliwe, jest także bardziej podatna na zakłócenia z innych związków ze względu na większą ilość próbek w stosunku do farbowania odczynnika w tej formie w teście.

see also: Bradford Protein Assay Protocol patrz również: Bradford białka Oznaczenie Protokół

Bradford Method References Metoda Bradford Referencje

Bradford, Anal. Bradford, Anal. Biochem. Biochem. 72 : 248, 1976. 72: 248, 1976.

Protein Protocols Protein Protocols

Protein Encyclopedia Białko Encyklopedia

Protein Bioinformatics Protein Bioinformatics

Protein Science Forum Protein Science Forum

Protein Blog Białko Blog

DNA News DNA Aktualności