Welcome to Molecular Station! Zapraszamy do Molekularnej Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musisz się zarejestrować zanim będziesz mógł umieścić na naszym forum lub skorzystać z zaawansowanych funkcji. Register Now! Zarejestruj się teraz! Its Free and Fast! Jego Darmowy i Fast!

Already registered? Już zarejestrowany? Login now below. Zaloguj się poniżej.

User Name: Nazwa użytkownika:

Password: Hasło:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Już zarejestrowany i Zapomniałeś hasła? Click below to recover it. Kliknij poniżej, aby ją odzyskać.

Recover Lost Password Odzyskaj Nie pamiętam hasła

Join now - it's fast and free! Dołącz teraz - szybko i za darmo!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekularnej Station to największa sieć badaczy, naukowców i miłośników nauki w dowolnym miejscu!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Membrane Hybridization to Screen a Library Membrana hybrydyzacji na ekranie Biblioteka

Screening Libraries using Membrane Hybridization Pokaz Biblioteki przy użyciu membrany hybrydyzacji

Under the conditions of temperature and ion concentration found in cells, DNA is maintained in a duplex (two-stranded) structure by the hydrogen bonds that form betwen the A and T bases and G and C bases in each strand. Zgodnie z warunkami temperatury i stężenia jonów w komórkach, DNA są utrzymywane w duplex (dwóch osieroconych) strukturę przez wodór obligacji, które stanowią betwen A i T podstawy C i G oraz w podstawy każdego aspektu. DNA duplexes can be denatured into single strands by heating them, usually in a dilute salt solution (eg, 0.01 M NaCl), or by raising the pH above 11. DNA duplexes można denaturacji w jednym aspekty ogrzewania przez nich, zazwyczaj w postaci rozcieńczonego roztworu soli (np. 0,01 M NaCl), albo poprzez zwiększenie pH powyżej 11. If the temperature is lowered and the ion concentration in the solution is raised, or if the pH is lowered to neutrality, the AT and GC base pairs reform between complementary single strands. Jeśli temperatura jest obniżona i stężenia jonów w roztworze jest podniesiona, czy pH jest obniżony do neutralności, AT i GC podstawy reformy par komplementarnych między jednym aspekty.

This process goes by many names: renaturation, reassociation, hybridization, annealing. Ten proces idzie przez wiele nazw: renaturation, reassociation, hybrydyzacji, wyżarzanie. In a mixture of nucleic acids, only complementary single strands (or strands containing complementary regions) will reassociate; the extent of their reassociation is virtually unaffected by the presence of noncomplementary strands. W mieszaninie kwasów nukleinowych, jedynie pojedyncze aspekty uzupełniające (komplementarne lub wątki zawierające regiony) będą ponownie skojarzyć, w zakresie ich reassociation jest praktycznie niezmieniony przez obecność noncomplementary aspekty. Such molecular hybridization can take place between two complementary strands of either DNA or RNA, or between an RNA strand and a DNA strand. Takie molekularnej hybrydyzacji może odbywać się między dwoma komplementarnymi aspektami albo DNA lub RNA, lub pomiędzy strand RNA i DNA strand. To utilize molecular hybridization in the detection of specific DNA clones, single stranded DNA from recombinant DNA molecules is attached to a solid support, commonly a nitrocellulose filter or treated nylon membrane. Aby korzystać z hybrydyzacji molekularnej w wykrywaniu specyficznych DNA klonów, stranded DNA jednym z rekombinacji DNA cząsteczek jest załączony do silnego wsparcia, często jeden filtr nitroceluloza lub traktowane nylonu z membraną. When a solution containing single0stranded nucleic acids is dried on such a membrane, the single strands become irreversibly bound to the solid support in a manner that leaves most of the bases available for hybridization to a complementary strand. Gdy roztwór zawierający single0stranded kwasów nukleinowych są suszone w takiej membrany, pojedyncze aspekty związanie się nieodwracalnie na stałe wsparcie w taki sposób, że odchodzi od podstaw większości dostępnych na hybrydyzacji do komplementarne części. Although the chemistry if this irreversible binding is not well understood, the procedure is very useful. Chociaż chemia, czy to nie jest nieodwracalne, wiążące dobrze rozumiane, procedura jest bardzo przydatne. The membrane is then incubated in a solution containing radioactively labeled single-stranded DNA (or RNA) that is complementary to some of the nucleic acid bound to the membrane. Membrana jest następnie inkubowane w roztworze zawierającym radioaktywnie oznaczone jednym-stranded DNA (lub RNA), które jest komplementarne do niektórych kwasów nukleinowych związana z membraną.

Under hybridization conditions (near neutral pH, 40-65 C, 0.3-0.6 M NaCl), this labeled probe hybridizes to the complementary nucleic acid bound to the membrane. Zgodnie z warunkami hybrydyzacji (blisko neutralnym pH, 40-65 C, 0.3-0.6 M NaCl), oznaczone sondy hybridizes uzupełniających do kwasu nukleinowego związana z membraną. Any excess probe that does not hybridize is washed away, and the labeled hybrids are detected by autoradiography of the filter. Każdy nadmiar sondy, że nie krzyżowały się myje się i mieszańców oznaczone są wykrywane przez autoradiography z filtrem. The recombinant lamda virions present in plaques of a lawn of E. coli are transferred to a nylon membrane by placing the membrane on the surface of the petri dish. W rekombinacji Lamda wirionów w tablice z trawy E. coli są przenoszone do nylonu z membraną poprzez umieszczenie na powierzchni membrany na płytkę Petriego. Many of the viral particles in each plaque absorb to the surface of the membrane, but many virions remain in the plaques on the surface of the nutrient agar in the petri dish containing a large number of individual lamda clones is reproduced on the surface of the membrane. Wiele z tych cząstek wirusowych w każdej płytki nazębnej wchłonąć do powierzchni membrany, ale nadal wiele wirionów w tablice na powierzchni na agar odżywczy na płytce Petriego zawierających dużą liczbę pojedynczych klonów Lamda przedstawiony jest na powierzchni membrany .

The original petri dish is refrigerated to store the collection of lamda clones. Oryginał płytkę Petriego jest chłodniczych do przechowywania kolekcji Lamda klonów. The membrane is then incubated in an alkaline solution, which disrupts the virions, releasing and denaturing the encapsulated DNA. Membrana jest następnie inkubowane w roztworze alkalicznym, który zakłóca w wirionów, zwalniania i otoczonych przez denaturacji DNA. The membrane is then dried, fixing the recombinant lamda DNA to the membrane's surface. Membrana jest następnie suszone, ustalające Lamda rekombinacji DNA na powierzchni membrany. Next, the membrane is incubated with a radiolabeled probe under hybridization conditions. Następnie membrana jest inkubowane z radiolabeled sondy mocy warunków hybrydyzacji. Unhybridized probe is washed away, and the filter is subjected to autoradiography. Unhybridized sondy jest myje się i filtr poddawany jest autoradiography.

The appearence of a spot on the autoradiogram indicates the presence of a recombinant lamda clone containing DNA complementary to the probe. Pojawienie się na miejscu w autoradiogram wskazuje na obecność w Lamda klon rekombinacji DNA zawierający komplementarne do sondy. The position of the spot on the autoradiogram corresponds to the position on the original petri dish where that particular clone formed a plaque. Stanowisko miejscu na autoradiogram odpowiada na stanowiska w sprawie pierwotnego płytce Petriego, w którym szczególnie klon utworzyła płytki nazębnej. Since the original petri dish still contains many infectioua virions in each plaque, viral particles from the identified clone can be recovered for replacing by aligning the autoradiogram and the petri dish and removing viral particles from the clone corresponding to the spot. Ponieważ oryginalny płytkę Petriego nadal zawiera wiele infectioua wirionów w każdej płytki nazębnej, wirusowej cząsteczki od zidentyfikowanych klon może być odzyskane dla zastąpienia przez dostosowanie autoradiogram i płytkę Petriego i usuwania cząstek wirusowych z klonu odpowiadające miejscu. A similar technique can be applied for screening a plasmid library in E.coli cells. Podobna technika może być stosowana do badania zawierającego plazmid, biblioteki szczepami E. coli w komórkach.