Welcome to Molecular Station! Zapraszamy do Molekularnej Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musisz się zarejestrować zanim będziesz mógł umieścić na naszym forum lub skorzystać z zaawansowanych funkcji. Register Now! Zarejestruj się teraz! Its Free and Fast! Jego Darmowy i Fast!

Already registered? Już zarejestrowany? Login now below. Zaloguj się poniżej.

User Name: Nazwa użytkownika:

Password: Hasło:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Już zarejestrowany i Zapomniałeś hasła? Click below to recover it. Kliknij poniżej, aby ją odzyskać.

Recover Lost Password Odzyskaj Nie pamiętam hasła

Join now - it's fast and free! Dołącz teraz - szybko i za darmo!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekularnej Station to największa sieć badaczy, naukowców i miłośników nauki w dowolnym miejscu!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Maxam Gilbert Sequencing Maxam Gilbert Sekwencje

How DNA is Sequenced Jak DNA jest uporządkowanego

DNA Sequencing using the Maxam-Gilbert Method Sekwencjonowanie DNA przy użyciu metody Maxam-Gilbert

Maxam-Gilbert Sequencing With this method of DNA sequencing instead of synthesizing DNA in vitro and stopping the synthesis reactions with chain terminators, this method starts with full-length, end labeled DNA and cleaves it with base specific reagents. Maxam-Gilbert Sekwencje Z tej metody sekwencjonowania DNA zamiast syntezę DNA in vitro i zatrzymywania syntezy łańcucha reakcji z terminatorów, metoda ta zaczyna się od pełnej długości, koniec oznaczone cleaves DNA i jej podstawy specyficznych odczynników. So how this method works with guanine bases, but the same principle applies to all four bases; First we end-label a DNA fragment we want to sequence. Więc jak ta metoda działa z guaniny podstaw, ale sama zasada stosuje się do wszystkich czterech podstaw; Najpierw końca etykiecie fragment DNA chcemy sekwencji.

This can be 5’- or 3’-end labeling. Może to być 5'-3'-end lub etykietowania. Next, we modify one kind of base. Dalej, modyfikowanie jednego rodzaju podstawy. Here we use dimethyl sulfate (DMS) to methylate guanines. Tutaj skorzystamy siarczan dimetylu (DMS) metylować guanines. (Actually, this reagent also methylates adenines, but not in a way that leads to DNA strand cleavage.) As in the chain termination method, we do not want to affect every guanine, or we will produce only tiny fragments that will not allow us to determine the DNA’s sequence. (W rzeczywistości, także tej odczynnika methylates adenines, ale nie w taki sposób, że prowadzi do DNA strand łupliwości.) Podobnie jak w przypadku metody zakończenie łańcucha, nie chcemy mieć wpływ na każdy guaniny, czy będziemy produkować tylko małe fragmenty, które nie pozwalają nam do określenia w sekwencji DNA. Therefore, we do the methylation under mild conditions that lead to an average of only one methylated guanine per DNA strand. Dlatego robimy w ramach metylacja łagodne warunki, które doprowadziły do średnio tylko jeden methylated guaniny na DNA strand. Next, we use a reagent (piperidine) that does two things: it causes loss of the methylated base, then it breaks the DNA backbone at the site of the lost base (the apurinic site). Następnie używamy odczynnika (piperydyno), że nie dwie rzeczy: z przyczyn utraty methylated bazowego, a następnie je łamie kręgosłup DNA w miejscu utraconych podstawy (apurinic witryny). In this case, the G in the middle of the sequence was methylated, so strand breakage occurred there, producing a labeled trimer. W tym przypadku, G w środku sekwencji został methylated, więc aspekt złamania wystąpiły tam, produkujący oznaczone trimeru.

In another DNA molecule, the first G could not be methylated, giving rise to a labeled phosphate (the base and sugar would be lost in the chemical cleavages). W innym cząsteczkę DNA, najpierw G nie może być methylated, dając podstawę do oznaczonego fosforan (podstawy i cukru, byłoby stracone w przemyśle chemicznym przepaścią). Finally, we electrophorese the products and detect them by autoradiography, just as in the chain-termination method. Wreszcie, electrophorese produktów i ich wykrycia przez autoradiography, podobnie jak w łańcuchu zakończenia metody. Of course, we need to run three other reactions that cleave at the other three bases. Oczywiście, musimy uruchomić trzy inne reakcje przylgniesz że w trzech innych podstawach. There are several ways of doing this. Istnieje kilka sposobów na zrealizowanie tego. For example, we can weaken the glycoside bonds to both adenine and guanine with acid; then piperidine will cause depurination and strand breakage after both As and Gs. Na przykład, możemy osłabić glycoside obligacji zarówno adenine i guaniny z kwasem; następnie piperydyno spowoduje depurination i aspekt zarówno po stłuczeniu i GS. If we electrophorese this A + G reaction beside the G only reaction, we can obtain the As by comparison. Jeśli my tego electrophorese A + G reakcja obok g tylko reakcji, możemy uzyskać jak porównanie. Similarly, hydrazine opens both thymine and cytosine rings, and piperidine can then remove these bases and break the DNA strand at the resulting apyrumidine sites. Podobnie, jak hydrazyna otwiera thymine cytozyna i pierścienie, a następnie piperydyno można usunąć tych baz i rozbicie DNA strand na wynikające apyrumidine witryn. In the presence of 1M NaCl, hydrazine is specific for cytosine only, so we can run this reaction next to the C+T reaction and obtain the Ts by comparison. W obecności 1M NaCl, hydrazyna jest specyficzne dla cytozyna tylko, abyśmy mogli uruchomić to reakcja obok C + T reakcji i uzyskania przez TS porównanie.

Copyright Molecular Station 2006 Copyright Molekularnej Station 2006