Welcome to Molecular Station! Zapraszamy do Molekularnej Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musisz się zarejestrować zanim będziesz mógł umieścić na naszym forum lub skorzystać z zaawansowanych funkcji. Register Now! Zarejestruj się teraz! Its Free and Fast! Jego Darmowy i Fast!

Already registered? Już zarejestrowany? Login now below. Zaloguj się poniżej.

User Name: Nazwa użytkownika:

Password: Hasło:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Już zarejestrowany i Zapomniałeś hasła? Click below to recover it. Kliknij poniżej, aby ją odzyskać.

Recover Lost Password Odzyskaj Nie pamiętam hasła

Join now - it's fast and free! Dołącz teraz - szybko i za darmo!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekularnej Station to największa sieć badaczy, naukowców i miłośników nauki w dowolnym miejscu!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

FACS

The FACS Technique W FACS Technika

Resting lymphocytes comprise many functional subpopulations, which are identified and distinguished from each other on the basis of heir differential expression of cell surface proteins, which can be detected using specific antibodies. Odpoczynkowe limfocyty obejmują wiele funkcjonalnych subpopulacje, które są identyfikowane i odróżnić od siebie na podstawie różnicy spadkobiercy ekspresji białek powierzchniowych komórek, które mogą być wykryte za pomocą specyficznych przeciwciał.

Flow Cytometry Cytometrii przepływowej

A powerful tool for defining and quantifying lymphocytes is the flow cytometer, which detects and counts individual cells passing in a stream through a laser beam. Potężne narzędzie do definiowania i ilościowe limfocytów jest cytometru przepływowego, która wykrywa i liczy poszczególnych komórek przechodzi w strumieniu drodze wiązki laserowej. A flow cytometer equipped to separate the identified cells is called a fluorescence-activated cell sorter (FACS). A cytometru wyposażone w oddzielne dla określonych komórek nazywany jest aktywowany fluorescencji-sorter komórek (FACS). These instruments are used to study the properties of cell subsets identified using monoclonal antibodies to cell-surface proteins. Instrumenty te są używane do badania właściwości komórek podgrup identyfikowany za pomocą przeciwciał monoklonalnych do powierzchni komórki białek. Individual cells within a mixed population are first tagged by treatment with specific monoclonal antibodies labeled with fluorescent dyes, or by specific antibodies followed by labeled anti-immunoglobulin antibodies. Poszczególne komórki w mieszanej populacji są oznaczone przez pierwsze leczenie specyficzne przeciwciała monoklonalne oznaczone z wykorzystaniem barwników fluorescencyjnych, lub specyficznych przeciwciał po oznaczane przeciwciała anty-immunoglobuliny. The mixture of labeled cells is then forced with a much arger volume of saline through a nozzle, creating a fine stream of liquid containing cells spaced singly at intervals . Mieszanina oznaczone komórek jest następnie zmuszone ze znacznie arger objętości wód słonych poprzez dysza, tworząc grzywny strumienia cieczy zawierających komórki rozmieszczone pojedynczo w odstępach. As each cell passes through a laser beam it scatters the laser light, and any dye molecules bound to the cell will be excited and will fluoresce. W każdej komórce przechodzi przez promień lasera go rozprasza światło laserowe, oraz wszelkie związane cząsteczki barwnika w komórce będzie podekscytowany i fluoresce.

Sensitive photomultiplier tubes detect both the scattered light, which gives information on the size and granularity of the cell, and the florescence emissions, which give information on the binding of the labeled monoclonal antibodies and therefore on the expression of cell-surface proteins by each cell. Drażliwe fotopowielacza rury wykryć zarówno rozproszone światło, które daje informacje o wielkości i ziarnistości komórki, a florescence emisji, które udzielają informacji na temat wiążących się z etykietą przeciwciała monoklonalne i dlatego na ekspresję białek powierzchni komórki przez każdą komórkę . In the cell sorter, the signals passed back to the computer are used to generate an electric charge, which is passed from the nozzle through the liquid stream at the precise time that the stream breaks up into droplets, each containing no more than a single cell; droplets containing a charge can then be deflected from the main stream of droplets as they pass between plates of opposite charge, so that positively charged droplets are attracted to a negatively charged plate, and vice versa. W komórce sorter, sygnały przekazywane z powrotem do komputera są wykorzystywane do wygenerowania ładunek elektryczny, który jest przekazywany z dyszy przez strumień cieczy na dokładne określenie czasu, że strumień przerwy aż do kropelki, każdy zawierający nie więcej niż komórek ; Kropelki zawierające opłaty mogą być następnie odbite od głównego strumienia kropelek jak oni przejść między tablicami naprzeciwko opłat tak, aby pozytywnie za kropelki przyciąga do tablicy negatywnie obciążony, i vice versa. In this way, specific subpopulations of cells, distinguished by the binding of the labeled antibody, can be purified from a mixed population of cells. W ten sposób konkretne subpopulacje komórek, ze względu na wiążące się z etykietą przeciwciało, może być oczyszczony z mieszanej populacji komórek. Alternatively, to deplete a population of cells, the same fluorochrome can be used to label different antibodies directed at marker proteins expressed by the various undesired cell types. Alternatywnie, do zubożyć populacji komórek, tym samym fluorochrome mogą być używane do znakowania różnych przeciwciał skierowanych na marker protein wyrażone przez różne typy komórek niepożądanych.

Cell Sorting Komórka Sortowanie

The cell sorter can be used to direct labeled cells to a waste channel, retaining only the unlabeled cells. Komórka sorter mogą być wykorzystane do bezpośredniego oznaczone komórki do odpadów kanał, zachowując tylko bez etykiety komórek. When cells are labeled with a single fluorescent antibody, the data from flow cytometer are usually displayed in the form of a histogram of fluorescence intensity vs. cell numbers. Gdy komórki są oznaczone za pomocą jednego immunofluorescencji, dane z cytometru są zwykle wyświetlane w postaci histogram intensywności fluorescencji vs numery komórek. If two or more antibodies are used, each coupled to different fluorescent dye, then the data are more usually displayed in he form of a two-dimensional scatter diagram or as a contour diagram, where the fluorescence of one dye-labeled antibody is plotted against that of a second, with the result that a population of cells labeling with one antibody can be further subdivided by its labeling with the second antibody. Jeżeli dwóch lub więcej przeciwciał używane są, każdy podłączony do innego barwnika fluorescencyjnego, a następnie dane te są zwykle bardziej on wyświetlany w formie dwu-wymiarowej scatter diagram lub jako konturu schemat, w którym jeden fluorescencji barwnika-przeciwciało oznaczone jest naniesiona na z drugiej, w wyniku czego populacji komórek z jednym Oznaczanie przeciwciał może być dalej przez jego etykietowania z drugiego przeciwciała. By examining large numbers of cells, flow cytometry can give quantitative data on the percentage of cells bearing different molecules. Dzięki analizie dużej liczby komórek, cytometrii przepływowej może dać dane ilościowe na temat odsetka komórek noszących różne cząsteczki. As the power of FACS technology has grown, progressively more antibodies labeled with distinct fluorescent dyes can be used at the same time. Ponieważ moc FACS technologii uprawy, stopniowo więcej przeciwciał etykietą z odrębnych barwników fluorescencyjnych mogą być wykorzystane w tym samym czasie.

Three, four and even five color analyses can now be handled by very powerful machines Trzy, cztery a nawet pięć kolorów analiz mogą być teraz obsługiwane przez bardzo potężne maszyny

FACS Protocols FACS Protokoły