Welcome to Molecular Station! Zapraszamy do Molekularnej Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musisz się zarejestrować zanim będziesz mógł umieścić na naszym forum lub skorzystać z zaawansowanych funkcji. Register Now! Zarejestruj się teraz! Its Free and Fast! Jego Darmowy i Fast!

Already registered? Już zarejestrowany? Login now below. Zaloguj się poniżej.

User Name: Nazwa użytkownika:

Password: Hasło:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Już zarejestrowany i Zapomniałeś hasła? Click below to recover it. Kliknij poniżej, aby ją odzyskać.

Recover Lost Password Odzyskaj Nie pamiętam hasła

Join now - it's fast and free! Dołącz teraz - szybko i za darmo!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekularnej Station to największa sieć badaczy, naukowców i miłośników nauki w dowolnym miejscu!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Bookmark Bookmark Site Zakładka Zakładka Site

Agar Plates Bacterial Culture Agar Płyty bakteryjne Kultura

Information on the Growth of Bacterial Cultures using Agar Culture Plates Informacje na temat wzrostu kultur bakteryjnych za pomocą Agar Kultura Plates

Table of Contents: Spis treści:

Agar Plate and Agar Media Troubleshooting and Forum Topics Agar Agar Plate i Media Rozwiązywanie problemów i tematów forum

Related Microbiology Articles Powiązane artykuły Mikrobiologii

Join the Microbiology Newsletter ! Przyłącz się do Mikrobiologia Newsletter!

What is Agar - Definition? Co to jest Agar - Definicja?

Agar or agar-agar (from a Malay word meaning " vegetable"), the substance which is used in preparing one kind of solid culture medium for bacteriological work, is a pro duct prepared from various seaweeds found near the Indian Ocean and in Chinese and Japanese waters. Agar lub agar-agar (z Malajski rozumieniu słowo "roślinne"), substancję, która jest używana w przygotowaniu jednego rodzaju stałej średniej dla bakteriologiczne kultury pracy, jest przygotowany pod kątem różnych kanałów seaweeds znaleziono w pobliżu Oceanu Indyjskiego i Chiński i Japoński wody. This type of seaweed has several common names, as Ceylon or Jaffna moss, Bengal isinglass, etc. Various species are used for food and the trade is considerable. Ten rodzaj wodorostów ma kilka nazw pospolitych, jak Cejlon lub Jaffna Mech, Bengal karuk, itp. różnych gatunków są używane w odniesieniu do żywności i handlu jest znaczne.

Background and History on Microbiology using Agar Nutrient Broth and Plates Tło i historia na Mikrobiologii przy użyciu Agar odżywczy Rosół i płyty

Payen, a French chemist -(about 1859), obtained the agar jelly from the seaweed, Gelidium corneum, in the following manner : The seaweed was allowed to stand for some time in a cold dilute solution of hydrochloric acid; the acid was removed by rinsing several times with water, then the seaweed was placed in a cold dilute solution of ammonia; next the ammonia was removed by repeated rinsing with cold water. Payen, Francuski chemik - (ok. 1859), uzyskał z agarze galaretki wodorostów, Gelidium corneum, w następujący sposób: wodorosty był uprawniony do kandydowania w jakiś czas w chłodni Rozcieńczony roztwór kwasu solnego, kwasu została usunięta przez płukanie kilka razy z wodą, następnie wodorosty został umieszczony w zimnym rozcieńczonego roztworu amoniaku; obok amoniaku została usunięta przez powtarzane płukanie zimną wodą. During this process, the seaweed lost 53% of its weight in mineral salts, coloring matter, and organic constituents. Podczas tego procesu, wodorostów stracił 53% swojej wagi w sole mineralne, malowanki sprawy, i składniki organiczne. The remaining portion was boiled in water, during which process the vegetable jelly was extracted. Pozostała część została gotowane w wodzie, podczas którego proces warzyw galaretki została pozyskana. The solution so obtained was poured off, leaving the useless sediment behind. Rozwiązanie to zostało uzyskane wylał off, pozostawiając w tyle za osadu. This jelly is the same in composition as that existing in the vegetable tissues; it has not been changed chemically, as is collagen in the preparation of gelatin. Ta galaretka jest taki sam skład jak w istniejących w tkankach roślinnych, ale nie została zmieniona chemicznie, jak kolagen jest w przygotowaniu żelatyna. The commercial agar is most probably prepared by evaporating this solution to dryness by different means. Przedstawiciel handlowy agar jest najprawdopodobniej przygotowany przez parowania tego roztworu do sucha w różnych formach.

Agar usually comes into the hands of the bacteriologist as long, slender, grayish-white strips, or as blocks, or more especially in recent years, in the form of a gray-white pow der of European manufacture. Agar zwykle przychodzi do rąk z bacteriologist tak długo, cienkie, kolokacje-białe pasy, lub w blokach, lub więcej, zwłaszcza w ostatnich latach, w postaci szarego-białe pow der europejskiej produkcji.

Agar, in contrast with gelatin, is a carbohydrate, ie, it consists of a combination of carbon, hydrogen and oxygen only. Agar, w przeciwieństwie do żelatyny, to węglowodany, tzn. składa się z kombinacji węgla, wodoru i tlenu. Traces of nitrogen are present as impurities. Ślady azotu są obecne jako zanieczyszczenia. The above qualitative determinations of its elementary constit uents were made by Payen, by Parumbaru and by Hueppe, who made their determinations on agar from different sources. Powyższe ustalenia jego jakościowych elementarnych constit uents zostały dokonane przez Payen, Parumbaru i Hueppe, którzy przedstawili swoje ustalenia na agarze z różnych źródeł. As far as can be ascertained, its empirical formula has not yet been investigated to any extent. O ile można to stwierdzić, empiryczne formuły jeszcze nie została zbadana do każdego stopnia.

Like gelatin, however, agar is a reversible colloid. Podobnie jak żelatyna, jednak agar jest odwracalne colloid. It soaks up in cold water, dissolves in hot water after a long boiling to a tasteless and odorless clear solution, and solid ifies upon cooling to a more or less opaque jelly. To atmosfery w zimnej wodzie, rozpuszcza w gorącej wodzie, po długim wrzenia do smaku i bezwonny jasne rozwiązanie, a na stałe ifies chłodzenia do mniej lub bardziej nieprzejrzysty galaretki. Its watery solution is neutral or nearly neutral to phenol phthalein; still, a drop or two of twentieth normal sodium hydrate is sufficient to make the pink color perceptible. Jego wodniste rozwiązaniem jest neutralny lub neutralny prawie do fenolu phthalein, jednak kropla lub dwie normalnej dwudziestego sodu uwodniony jest wystarczająca, aby różowy kolor odczuwalne.

The colloidal properties of agar are not destroyed by a long-continued heating at a high temperature, nor by the action of ordinary microorganisms as are those of gelatin. W koloidalny właściwości agar nie są niszczone przez długi-nadal ogrzewanie w wysokiej temperaturze, ani w wyniku działania mikroorganizmów, jak zwykłe są z żelatyny. The above properties, however, are influenced and may be wholly impaired by the reaction of the liquid in which the agar is dissolved. Powyższe właściwości, jednak są pod wpływem i mogą być całkowicie osłabiona w wyniku reakcji cieczy, w których rozpuszczona jest agar.

The reaction of the liquid, ie, whether it is acid or alkaline, influences the agar as to its solubility, solidity, color, transparency, filterability and amount of condensa tion water. W reakcji na płynne, tzn. czy jest kwas lub alkaliczne, wpływa na agar co do jego rozpuszczalność, trwałość, kolor, przejrzystość, filterability i kwoty condensa tion wody. If agar is dissolved in a liquid of an acidity equivalent to 0.1% HC1, the agar dissolves very readily, filters quickly, the resultant filtrate being a light yellow, transparent, slippery, watery solution which does not solidify upon cooling. Jeśli agar jest rozpuszczony w cieczy o kwasowości równowartość 0,1% HC1, Agar rozpuszcza bardzo łatwo, szybko, filtry, powstałego filtrat jest jasnożółtym, przejrzyste, śliskie, wodnisty roztwór, który nie utrwalając na chłodzenie. If a smaller percentage of hydro chloric acid is used, solidification occurs (below 40 C.) but the jelly will not " stand up " and is therefore useless for agar slant or plate cultures. Jeżeli mniejszy odsetek wodne chloric acid jest używany, zestalania występuje (poniżej 40 C.), ale nie będzie galaretka "stand up" i dlatego jest bezużyteczny dla agar slant lub tablicy kultur. A large amount of con densation water is present also. A duże ilości wody con densation jest obecny również.

If agar is dissolved in a weak alkaline or neutral broth, a thick, reddish-brown, viscous liquid is obtained which filters slowly and solidifies quickly at 40 C., to a very solid, opaque, dry jelly, having but little condensation water; it retains its shape well in slants and in plates. Jeśli agar jest rozpuszczony w słabym zasadowe lub neutralne rosołowej, gruba, czerwonawo-brązowy, lepki płyn, który otrzymywany jest filtry powoli i szybko zestaleniu na 40 C., bardzo solidne, nieprzezroczysty, suche galaretki, ale posiadające niewielkie kondensacji wody; zachowuje swój kształt oraz w slants i tablice. Thus the value of the agar as a solid culture medium is raised or lowered according to the cjegree of alkalinity or acidity. Tak więc wartość z agar jako stałe kultury średnio jest podniesiona lub obniżona zgodnie z cjegree z zasadowości lub kwasowości.

It must be noted in addition, however, that when once the solidifying property of agar is destroyed by the presence of an excess of acid in its solution, this property can never be regained by neutralization with alkali; the acid per manently destroys the reversibility of the colloid. Należy ponadto zauważyć, że gdy po solidifying własność jest niszczona przez agar obecności nadmiaru kwasu w roztworze, w tym własności nie może być w odzyskaniu przez neutralizacji alkalicznych, kwasu na manently niszczy odwracalności w colloid.

The melting-point of agar (of 1.5% in neutral solution) is 97 C. and although its solidifying point is at 40 C., when once it has solidified it will stand up in the thermostat at a temperature of 50 C. For bacteriological purposes, only that form of agar can be used which remains fluid at from 38 to 40 C. Agar which remains fluid only at a temperature above this point would be too hot when in a fluid state for use; the vitality of organisms introduced would be impaired or destroyed by the high temperature. Do punktu topnienia-agar (z 1,5% w obojętnym roztworze) wynosi 97 C. i choć jego solidifying punkt jest na 40 C., gdy po stałej będzie wstać z termostatem o temperaturze do 50 C. Dla bakteriologicznych celów, tylko że forma agar, które mogą być wykorzystane na płyn pozostaje od 38 do 40 C. Agar płyn, który pozostaje tylko w temperaturze powyżej tego punktu będzie zbyt gorąco, gdy płyn w stanie do użycia; żywotność organizmów wprowadzone byłyby naruszone lub zniszczone przez wysoką temperaturę.

Advantages and Disadvantages as Agar as a Nutrient Media Zalety i wady jako Agar jako składnik odżywczy Media

Difficulties are encountered in the preparation of a solid culture medium from agar, due to its slow solubility, viscosity and consequent slow filterability. Trudności napotkanych w trakcie przygotowywania solidne kultury średnich z agaru, z powodu ich powolnego rozpuszczalność, lepkość i stąd powolne filterability. Its solution (digestion) is effected, as mentioned above, by a long heating in a water-bath, steam sterilizer, autoclav, or over a free flame. Jego rozwiązanie (trawienia) są realizowane, jak wspomniano powyżej, przez ogrzewanie w łaźni wodnej, parowej sterilizer, autoclav, lub na wolnym płomień. The length of time required for complete digestion depends upon three things: The reaction of the liquid in which the agar is dissolved, the per cent content of agar, and the method of dissolving. Długość czasu potrzebnego na pełny trawienia zależy od trzech rzeczy: reakcji na płyn, w którym jest rozpuszczona agar, procent zawartości agar i metody rozwiązywania. The influence of the reaction of agar solutions has been treated above. Wpływ reakcji agar rozwiązania zostały poddane obróbce powyżej. For general culture use, however, ordinary agar is made +15 Fuller's scale (agar solidifies with difficulty above +30 Fuller's scale). Do ogólnego użycia kultury, jednak jest zwykłym agar +15 Fuller's skali (agar zestaleniu z trudem powyżej +30 Fuller's skali).

One per cent agar is much more easily soluble under equal conditions than a higher per cent. Jeden procent agar jest o wiele łatwiej rozpuszczalne na równych warunkach niż wyższy procent. One and one half per cent is the amount used in ordinary agar media, giving a somewhat stiffer and thus more desirable jelly. Jeden i pół procent to kwota wykorzystana w zwykłym agar mediów, dając nieco stiffer, a tym samym bardziej pożądana galaretki.

Agar is digested most rapidly over a free flame. Agar wytrawia najszybszy na wolne płomień. If not heated sufficiently, after the filtration and sterilization of the agar by the intermittent method, a flocculent precip itate frequently appears in the previously clear medium. Jeśli nie jest wystarczająco ogrzewany, po filtracji i sterylizacji na agar przez przerywany metody, flocculent precip itate często pojawia się w średnio wcześniej jasne. This can be made to disappear in most cases by subjecting to the temperature of the autoclav (120 C. 15 Ibs.). Może to być dokonane znikają w większości przypadków przez poddanie, aby temperatura w autoclav (120 C. 15 IBS.).

Agar for culture media should be entirely clear when liquid, and homogeneously opaque-translucent when solid; it should have a translucence sufficient to allow deep colonies on plates or stab cultures to be observed readily; it should not contain flocculent material, sediment, or pieces of cotton or filter paper, as these hinder typical colony development of microorganisms and, to the inexperienced, may some times be mistaken for colonies. Agar do kultury mediów powinny być całkowicie jasne, gdy ciecz, jednorodnie i nieprzejrzysty-przepuszczają przy stałych; powinien mieć wystarczającą przejrzystość, aby umożliwić głębokie talerze lub kolonii na stab kultur, których należy przestrzegać łatwo, ale nie powinny zawierać flocculent tworzywo, osadach, lub sztuk z bawełny lub bibuły filtracyjnej, jak te utrudniają typowych kolonii i rozwój mikroorganizmów, dla niedoświadczonych, może kilka razy zostać mylnie wzięte za kolonie.

In the first methods ever used for making agar culture media, instead of filtering the hot agar through filter paper, absorbent cotton, or asbestos, it was allowed to cool, during which process the sediment settled to the bottom; when solid the sediment was cut off. W pierwszej metody wykorzystywane do tworzenia coraz agar kultury mediów, zamiast filtrowania gorących poprzez agar bibuły filtracyjnej, pochłaniający bawełny lub azbestu, był uprawniony do ostygnięcia, w trakcie którego proces osadu osiadł na dnie, przy stałych osad zostało wycięte wyłączony. This method was not desirable, as the clearness of the resultant agar would depend upon the rate of cooling; the slower the cooling, the more completely would sedimentation take place. Ta metoda nie była pożądana, jak Jasność powstałego agar będzie uzależnione od stopy chłodzenia; wolniej chłodzenia, tym więcej będzie całkowicie sedymentacja miała miejsce.

Agar is not a food for microorganisms in general, ie, it is not affected by the digestive enzymes of most bacteria, as is gelatin. Agar nie jest dla żywności mikroorganizmów w ogóle, tzn. nie jest dotknięte enzymów trawiennych większości bakterii, jak żelatyna. However, a few bacteria are known which have the power of liquefying agar, among which are B. gelaticus n. Jednak kilka znane są bakterie, które mają moc skraplania agar, wśród których są gelaticus n. B. sp. Sp. (gran) and Bad. (Gran) i Bad. Nenckii, both of which are found, as would be expected, in sea water. Nenckii, które znajdują się, jak można było oczekiwać, w wodzie morskiej. This compara tive inertness of agar renders it valuable for the preparation, of solid synthetic media, the value of which may be en hanced by subjecting the commercial agar to natural fermentation during which process any traces of avail able food substances are used up by the microorganisms present. Tę Dziękujemy tywy bezwładności agar czyni go cennym dla przygotowania, stałych syntetycznych mediów, którego wartość może być pl hanced przez poddanie handlowych agar do naturalnej fermentacji, podczas którego proces żadnych śladów w stanie korzystać żywności substancji są wykorzystywane przez mikroorganizmy przedstawiać. (Beijerinck.)

Agar is of special use in bacteriological work in which the cultivation of microorganisms must be conducted at a temperature above the melting-point of gelatin. Agar jest wykorzystanie specjalnych bakteriologicznych w pracy, w którym uprawy mikroorganizmów musi być prowadzone w temperaturze powyżej punktu topnienia-żelatyna. This feature has made possible the great strides that have been taken in medical bacteriology, as many pathogenic bacteria can be isolated and grown only with difficulty at tempera tures below that of the body. Ta funkcja jest możliwe, że wielkie kroki zostały podjęte w medycynie bakteriologia, jak wiele bakterii chorobotwórczych mogą być odizolowane i uprawiany tylko z trudności w tempera tures, że poniżej tego organu.

EXERCISE 9. WYKONYWANIE 9. PREPARATION OF NUTRIENT AGAR Przygotowanie składników odżywczych Agar

Apparatus. Aparatura. 3.5 liter agate-ware pail; 15 gms. 3,5 litra agat-ware pail; 15 WZA. Agar; 10 gms. Agar; 10 WZA. Peptone; 5 gms. Peptone; 5 WZA. Salt; 10 gms. Sól; 10 WZA. Egg albumen (or one egg); 500 cc sterile meat infusion; 500 cc tap water; titration apparatus; N/20 NaOH; N/l NaOH; phenol phthalein (indicator); distilled water; large funnel; plaited filter paper; filling funnel; sterile test tubes; sterile liter flask; coarse balances; large gas burner; 1 liter measuring cup; apparatus for steam sterilization. Egg albumen (lub jedno z jaj); 500 cc sterylnych mięsa infuzji; 500 cc wody z kranu; miareczkowania aparatu; N/20 NaOH; N / l NaOH; fenol phthalein (wskaźnik); wody destylowanej; duży lejek; plecione bibuły filtracyjnej; lejek do napełniania ; Sterylnej probówki, sterylne litra kolby; gruba sald; dużych palników gazowych, 1 litr pomiaru kielicha; aparatura do sterylizacji parą wodną.

Method. Metoda. 1. In a 3 liter agate ware pail place 15 gms. W 3-litrowy agat ware pail miejsce 15 WZA. Of agar in 500 cc of tap water. Spośród agaru w 500 cc wody z kranu.

2. Wash the agar well, separating the shreds and squeez ing it through the hands. Umyć agar dobrze, oddzielając shreds i squeez ing go za pomocą rąk.

3. Decant the dirty water, measuring the amount poured Zdekantować brudnej wody, pomiaru wysokości rozlana

42

GENERAL MICROBIOLOGY Mikrobiologia ogólna

off; replace with the same amount of clean tap water. off; zamienić z tą samą ilością czystej wody z kranu.

Repeat. Powtórz.

4. Dissolve over a free flame and boil for five minutes, stirring constantly. Rozpuścić na wolne płomień i gotować przez pięć minut, stale mieszając. The solu tion must be entirely free from lumps of agar. W rozwiązań tion muszą być całkowicie wolne od kostek z agaru.

5. Add 1% Witte's peptone and 0.5% salt to the boiling agar. Dodaj 1% Witte, 0,5% pepton i soli do wrzącej agar.

6. To 500 cc of meat in fusion add 10 gms. Do 500 cc mięsa w syntezy dodać 10 WZA. Of egg al bumen which has been well mixed with 100 cc of tap water. Jaj al bumen, która została dobrze wymieszana z 100 cc wody z kranu. (Put the egg albumen in a tumbler and add enough water to form a paste. Stir until smooth and then add the remain ing water. One egg; well beaten, (Wkładamy egg albumen w bębnowych i dodać wystarczającą ilość wody do postaci pasty. Mieszaj, aż gładkie, a następnie dodać wody pozostają ing. Jedno jajo; również pobity,

FIG. 9. Hot Water Funnel for may be substituted.) Mix all Filtering Agar or Gelatin. Ciepła woda dla ścieżek może być zastąpiony.) Wymieszać wszystkie Filtrowanie Agar lub Żelatyna. Thoroughly Dokładnie

7. Pour the melted agar mixture slowly into the meat infusion, stirring constantly. Wlać mieszaninę powoli topniejącego agar do infuzji mięsa, stale mieszając. Heat in the autoclav at 120 C. for forty-five minutes or for an hour in flowing steam. Ciepło w autoclav na 120 C. za czterdzieści pięć minut lub za godzinę w przepływającej pary.

Note. Uwaga. The time for this heating may be lengthened to advantage, but never shortened. W czasie tego ogrzewania może być wydłużony do korzyści, ale nigdy nie skrócony. If agar has not been heated sufficiently before filtration, a flocculent precipitate will form in the tubes upon heating in flowing steam. Jeśli agar nie została wystarczająco ogrzewany przed filtracją, flocculent osad będzie w formie rury na ogrzewanie w przepływającej pary. In most cases this may be caused to disappear by heating for a short time in the autoclav at 15 Ibs. W większości przypadków może to być spowodowane zniknie przez ogrzewanie w krótkim czasie w autoclav na 15 IBS.

8. Titrate with N/20 NaOH. Miareczkować z N/20 NaOH.

9. Adjust the reaction of the medium to +15 with normal NaOH or normal HC1. Regulacja reakcji średnio do +15 o normalnej NaOH lub normalnej HC1. Retitrate and readjust the reaction if necessary. Retitrate i readjust reakcji w razie potrzeby.

10. Counterpoise and note the weight. Counterpoise i zanotować wagę.

11. Boil fifteen minutes over a free flame, stirring con stantly, Gotować przez piętnaście minut wolnego płomień, mieszając con stantly,

DUNHAM'S PEPTONE SOLUTION 43 Dunham's 43 roztworem PEPTONE

12. Counterpoise and make up any loss in weight with boiling distilled water. Counterpoise i dopełnić wszelkich strat w masie z wrzącą wodą destylowaną.

13. Filter boiling hot through plaited filter paper just previously washed with boiling water. Filtr wrzenia gorąco plecione przez bibułę filtracyjną uprzednio umyte tylko z wrzącej wody. Pass the filtrate through the same paper until clear. Pass filtrat za pomocą tego samego papieru, aż jasne.

14. Fill 60 to 70 sterile test tubes, using approximately 8 cc of the medium for each tube. Wypełnij od 60 do 70 sterylnych probówek testowych, używając około 8 cm od średniej dla każdej probówki.

15. Heat in flowing steam twenty minutes on three suc cessive days. Ciepło w przepływającej pary dwadzieścia minut cessive sukces na trzy dni.

16. At the end of the final heating, place the tubes of agar in an inclined position to solidify (do not allow the medium to touch the plug) so that a large surface is pre sented for the cultivation of microorganisms. Pod koniec ostateczny ogrzewanie, miejsce na rury z agaru w nachylonej do umocnienia pozycji (nie pozwalają na średnim dotykać wtyczki), tak że duża powierzchnia jest wstępnie na ciele uprawy mikroorganizmów. These are called agar slants. Nazywa się agar slants.

Note. Uwaga. If agar tubes are to be used only for agar slants, less of the medium is needed in the tube than when they are to be used for plating. Jeśli agar rury są wykorzystywane wyłącznie do agaru slants, mniej medium jest potrzebne w probówce, niż gdy są one wykorzystywane do galwanicznego.

17. To sterilize a large flask of agar, heat for thirty minutes on four successive days. Aby sterilize dużą kolbę z agaru, ciepło do trzydziestu minut na czterech kolejnych dni.

References for Agar Bacterial Culture Odniesienia do kultury bakteryjne Agar

SMITH, ERWIN F.: Bacteria in Relation to Plant Diseases. SMITH, Erwin F.: Bakterie w stosunku do chorób roślin. Vol. I, Ja,

pp. 31-36. Several illustrations. Kilka ilustracji. SCHULTZ, NK: Zur Frage von der Bereitung einiger Nahrsubstrate. Schultz, NK: Zur Frage von der Bereitung einiger Nahrsubstrate.

Cent. F. Bakt. F. Bakt. I. Orig., Bd. I. oryg., Bd. 10, 1891, p. 10, 1891, str. 57.