Welcome to Molecular Station! Zapraszamy do Molekularnej Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musisz się zarejestrować zanim będziesz mógł umieścić na naszym forum lub skorzystać z zaawansowanych funkcji. Register Now! Zarejestruj się teraz! Its Free and Fast! Jego Darmowy i Fast!

Already registered? Już zarejestrowany? Login now below. Zaloguj się poniżej.

User Name: Nazwa użytkownika:

Password: Hasło:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Już zarejestrowany i Zapomniałeś hasła? Click below to recover it. Kliknij poniżej, aby ją odzyskać.

Recover Lost Password Odzyskaj Nie pamiętam hasła

Join now - it's fast and free! Dołącz teraz - szybko i za darmo!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekularnej Station to największa sieć badaczy, naukowców i miłośników nauki w dowolnym miejscu!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Automated Edman Degradation Automatyczne Edman Degradacja

Amino Acid Sequences can be determined by Automated Edman Degradation Sekwencje aminokwasów może być określona przez automatyczne Edman Degradacja

The amino acid composition of the peptide is determined.  The peptide is hydrolyzed into its constituent amino acid by heating it in 6 N HCl at 110°C for 24 hours.  Stanford Moore and William Stein showed that amino acids in hydrolysates can be separated by ionexchange chromatography on columns of sulfonated polystyrene and quantitated by reacting them with ninhydrin. Skład aminokwasowy peptydu jest ustalana na. Peptydu jest hydrolyzed do jego aminokwasu przez ogrzewanie w 6 N HCl przy 110 ° C przez 24 godzin. Stanford Moore i William Stein wykazało, że aminokwasy w hydrolizatach mogą być oddzielone przez ionexchange chromatografii na kolumnach sulfonated polistyrenu i quantitated przez ich reakcji z ninhydryna.

Amino acids treated this way give an intense blue color, except for praline, which gives a yellow color because it contains a secondary amino group.  The concentration of amino acid in a solution is proportional to the optical absorbance of the solution after heating it with ninhydrin.  This technique can detect a microgram (10nmol) of an amino acid, which is about the amount present in a thumbprint. Aminokwasy traktowane w ten sposób dać intensywnym kolorze niebieskim, za wyjątkiem praline, która daje kolor żółty, ponieważ zawiera wtórne grupą aminową. Stężenie aminokwasu w roztworze jest proporcjonalne do optycznego absorbancję roztworu po ogrzaniu go ninhydryna . Ta technika może wykryć mikrogramów (10nmol) z aminokwasu, który jest o kwotę obecne w thumbprint.

As little as a nanogram (10 pmol) of an amino acid can be detected by means of fluorescamine, which reacts with the a-amino group of a highly fluorescent product.  The identity of the amino acid is revealed by its elution volume, which in the volume of buffer used to remove the amino acid from the column. Jak mało w nanogramach (10 pmol) z aminokwasu może być wykryta za pomocą fluorescamine, która reaguje z a-amino grupy bardzo fluorescencyjny produktu. Tożsamości z aminokwasu objawia się przez jej objętością elucji, które w wielkość bufora wykorzystywane do usunięcia aminokwasu z kolumny.

The amino-terminal residue of a protein or peptide can be identified by labeling it with a compound that forms a stable covalent link. The amino-terminal pozostałości białka lub peptydu mogą być zidentyfikowane przez etykietowania go z mieszanki, która stanowi stabilne łącze kowalencyjnych.

Fluorodinitrobenzene (FDNB) was first used for this purpose by Frederick Sanger.  Dabsyl chloride is now commonly used because it forms intensely colored derivatives that can be detected with high sensitivity.  It reacts with an uncharged a-NH2 group to form a sulfonamide derivative that is stable under conditions that hydrolyze peptide bonds. Fluorodinitrobenzene (FDNB) po raz pierwszy zastosowano w tym celu przez Frederick Sanger. Dabsyl chlorku jest obecnie powszechnie stosowany, gdyż intensywnie kolorowe formy pochodne, które mogą być wykryte z dużej czułości. Reaguje z nieobciążania a-NH2 grupę stanowią pochodne sulfonamid, że jest stabilnych warunkach, które hydrolyze peptydu obligacji.

Although the dabsyl method for determining the amino-terminal residue is sensitive and powerful, it cannot be used repeatedly on the same peptide because the peptide is totally degraded in the acid-hydrolysis step.  Pehr Edman devised a method for labeling the amino-terminal residue and cleaving it from the peptide without disrupting the peptide bonds between the other amino acid residues.  The Edman degradation sequentially removes one residue at a time from the amino end of a peptide.  Phenyl isothiocyanate reacts with the uncharged terminal amino group of the peptide to form a phenylthiocarbamoyl derivative.  Then, under mildy acidic conditions, a cyclic derivative of the terminal amino acid is liberated, which leaves an intact peptide shortened by one amino acid. Chociaż dabsyl metody określania pozostałości amino-terminal jest wrażliwy i mocny, nie może być używane wielokrotnie w tym samym peptydu ponieważ peptydu jest całkowicie zniszczonych w kwasie hydrolizy kroku. Pehr Edman opracowali metodę etykietowanie amino-terminal pozostałości i cleaving go z peptydu bez zakłóceń w peptydu obligacji między innymi pozostałości aminokwasu. Edman degradacji kolejno jeden usuwa pozostałości w czasie od zakończenia amino z peptydu. fenylo izotiocyjanianu reaguje z grupą aminową nieobciążania terminalu w postaci peptydów do jeden phenylthiocarbamoyl pochodnych. Następnie, na podstawie mildy kwaśnym, cykliczne pochodne aminokwasów terminalu jest wyzwolony, który pozostawia nienaruszone peptydu jeden skrócony przez jednego aminokwasu.

Analyses of protein structures have been markedly accelerated by the development of sequenators, which are automated instruments for the determination of amino acid sequence.  In a liquid-phase sequenator, a thin film of protein in a spinning cylindrical cup is subjected to the Edman degradation.  The reagents and extracting solvents are passed over the immobilized film of protein, and the released PTH-amino acid is identified by high-pressure liquid chromatography (also called high-performance liquid chromatography, HPLC). Analizy struktur białkowych zostały znacznie przyspieszone przez rozwój sequenators, które są zautomatyzowane instrumenty do określenia sekwencji aminokwasów. Ciecz-faza sequenator, cienką warstwę białka w przędzenia cylindrycznych kielich poddawany jest Edman degradacji. Odczynniki i ekstrakcji rozpuszczalnikami są przekazywane przez immobilizowane film białka, a zwolnione PTH-aminokwasu jest identyfikowany przez wysokiego ciśnienia chromatografii cieczowej (zwany też wysokosprawnej chromatografii cieczowej, HPLC).

One cycle of the Edman degradation is carried out in less than two hours.  By repeated degradations, the amino acid sequence of some fifty residues in a protein can be determined.  Gas-phase sequenators can analyze picomole quantities of peptides and proteins.  This high sensitivity makes it feasible to analyze the sequence of a protein sample eluted from a single band of an SDS-polyacrylamide gel. Jednym z cyklu Edman degradacja jest wykonywana w czasie krótszym niż dwie godziny. Poprzez powtarzające się degradacja, sekwencji aminokwasów około pięćdziesięciu pozostałości w białko może być ustalona. Gas-fazowe sequenators można analizować picomole ilości peptydów i białek. Wysoka czułość sprawia, że możliwe do analizy sekwencji białka próbki poddawane eluacji z jednego zespołu z SDS-żelu poliakrylamidowym.