home > dna > southern-blot > index.php Strona główna> DNA> Southern-blot> index.php
 |
|---|
You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musisz się zarejestrować zanim będziesz mógł umieścić na naszym forum lub skorzystać z zaawansowanych funkcji. Register Now! Zarejestruj się teraz! Its Free and Fast! Jego Darmowy i Fast!
Already registered? Już zarejestrowany? Login now below. Zaloguj się poniżej.
Already registered and Forgot your password? Już zarejestrowany i Zapomniałeś hasła? Click below to recover it. Kliknij poniżej, aby ją odzyskać.
Recover Lost Password Odzyskaj Nie pamiętam hasła
Join now - it's fast and free! Dołącz teraz - szybko i za darmo!
Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekularnej Station to największa sieć badaczy, naukowców i miłośników nauki w dowolnym miejscu!
The most remarkable discovery made by scientists is science itself. Najbardziej zadziwiające odkrycia dokonane przez naukowców jest sama nauka. ~Gerard Piel ~ Gerard piel
Copyright 2007 Molecular Station Copyright 2007 Molekularnej Station
Southern blotting is a technique named after its inventor and developer, the British biologist Edwin M. Southern in 1975. Southern blotting jest techniką Nazwa pochodzi od jej wynalazcy i twórcy, brytyjski biolog Edwin M. południowej w 1975 roku. Southern blotting is a technique which allows the detection of a specific DNA sequence (gene or other) in a large, complex sample of DNA (eg cellular DNA). Southern blotting jest techniką, która pozwala na wykrycie konkretnej sekwencji DNA (genu lub innych) w dużych, złożonych próbki DNA (np. komórkowego DNA).
"Before PCR and cheap fast sequencing changed our view of the universe that is genetics, the Southern Blot was a universal workhorse. There was not an experiment in molecular genetics which did not at some stage employ a Southern Blot. It is still a useful tool and you need to know about it so that you can interpret historical data." "Przed PCR i sekwencjonowaniu tanie szybko zmieniły nasz pogląd na wszechświat, który jest genetyka, Southern Blot był powszechnych zadań. Eksperymentu nie był w genetyki molekularnej, które nie zatrudniają na pewnym etapie Południa Blot. Jest to wciąż przydatne narzędzie i musisz wiedzieć na ten temat, tak aby można interpretować dane historyczne. "
Diagram of the Southern blot technique.Figure is Copyright. Schemat południowej Hybrydyzacja technique.Figure prawami autorskimi. If you would like to use it for a lecture or science project, please contact us for permission. Jeśli chcesz go użyć do wykładów lub nauki projektu, prosimy o kontakt z nami o pozwolenie.
In Step 1 , DNA is digested with restriction endonucleases. W kroku 1, DNA wytrawia z ograniczeniem endonucleases. High-molecular-weight DNA is digested into smaller fragments. High-molecular-weight wytrawia DNA na mniejsze fragmenty.
In Step 2 , The DNA is then separated out by size by electrophoresis on an agarose gel. W kroku 2, DNA jest następnie rozdzielone przez rozmiaru elektroforezy na żelu agarozowym.
In Step 3 , a sheet of nylon or nitrocellulose membrane (purple) is placed on top of the agarose gel in a buffer solution. W kroku 3, arkusz nitrocelulozy lub nylonu z membraną (fioletowy) jest umieszczony w górnej części żelu agarozowym w buforze rozwiązanie. This is considered the blotting or transferring stage. To jest uważany za blotting lub przeniesienie etapu. Pressure is applied evenly to the gel using either suction or by placing a stack of paper towels and a weight on top of the membrane and gel to ensure even contact between gel and membrane. Ciśnienie jest stosowane równomiernie na żel za pomocą jednej lub ssania przez umieszczenie stos ręczników papierowych i masy w górnej części membrany i żel do zapewnienia nawet kontaktu między żelu i membrany. Buffer transfer by capillary action from a region of high water potential to a region of low water potential (usually filter paper and paper tissues) is then used to move the DNA from the gel on to the membrane. Przekazywania przez kapilarne buforowych działania z regionem o wysokiej wody potencjał regionu niski potencjał wody (zwykle papierowej bibuły filtracyjnej i tkanek) jest następnie używane do przenoszenia DNA z żelu na membranę. Positively charged membrane (purple) is usually used which allows the DNA to bind with high affinity to the membrane through ion interactions between the negatively charged DNA and positively charged membrane. Pozytywnie opłata membrana (fioletowy) jest zwykle używany, który pozwala DNA stało się wiążące z dużym powinowactwem do jonów membrany poprzez interakcje między negatywnie i pozytywnie DNA opłata pobierana z membraną.
In Step 4, nitrocellulose membranes are baked by exposure to high temperatures (from 60 to 100 °C). W kroku 4, nitroceluloza membrany są pieczone przez narażeniem na działanie wysokich temperatur (od 60 do 100 ° C). Nylon membranes are exposed to UV radiation. Nylon membrany są narażeni na promieniowanie UV. These steps are used to ensure the permanent and covalent crosslink of the DNA present in the bands to the membranes. Te kroki są wykorzystywane w celu zapewnienia stałego i crosslink kowalencyjnych z DNA obecnego w pasmach do membran.
In Step 5, the membrane is exposed to a radiolabeled probe. W kroku 5, membrana jest narażona na radiolabeled sondy. This probe is a single-stranded DNA fragment which has your sequence of interest that you want to detect. Ta sonda jest single-stranded fragment DNA, które ma swój ciąg zainteresowania, które chcesz wykryć. This probe is incubated with the membrane and allowed to hybridize with DNA on the membrane. Ta sonda jest inkubowana z membraną i dopuszczone do krzyżowały z DNA na membrany. Probes are usually radiolabeled so that they may be detected on film, however newer probes are also used which are non-radioactive such as fluorescent or chromogenic dyes. Wystawał radiolabeled są zazwyczaj tak, że mogą być one wykryte na film, jednak nowsze sond, które są również używane są nie takie jak promieniotwórcze lub chromogenic barwników fluorescencyjnych. After hybridization, excess unbound probe is washed away from the membrane, leaving specifically bound probe. Po hybrydyzacji, nadmiar niezwiązanego sondy jest myte od membrany, pozostawiając w szczególności związane sondy.
In Step 6 , the pattern of hybridization is detected by visualization on X-ray film by autoradiography in the case of a radioactive or fluorescent probes, or by development of color on the membrane if a chromogenic detection method is utilized. W kroku 6, strukturze hybrydyzacji jest wykrywane przez wizualizacji na X-ray film przez autoradiography w przypadku radioaktywnego lub sond fluorescencyjnych, lub przez rozwój kolor na membrany, jeśli chromogenic metoda wykrywania jest wykorzystywane.
(Notes for Step 3: If large DNA fragments are present greater than 15 kb in size may be depurinated by then dilute HCl acid prior to blotting which will break the DNA into smaller pieces, thus allowing more efficient transfer from the gel to membrane. If alkaline transfer methods are used, the DNA gel is placed into an alkaline solution (typically containing sodium hydroxide) to denature the double-stranded DNA. The denaturation in an alkaline environment provides for improved binding of the negatively charged DNA to a positively charged membrane, separates it into single DNA strands for later hybridization to the probe (see below), and destroys any residual RNA that may still be present in the DNA. (Uwagi do Krok 3: W przypadku dużych fragmentów DNA obecne są większe niż 15 kb może być depurinated by następnie rozcieńczonego kwasu solnego przed blotting, który podzieli się na mniejsze fragmenty DNA, umożliwiając tym samym bardziej efektywnego transferu z żelu do membrany. alkaliczne transferu stosowane są metody, DNA żelu jest umieszczony w roztworze alkalicznym (zwykle zawierających wodorotlenek sodu) denaturacji double-stranded DNA. denaturacji w środowisku alkalicznym zapewnia lepsze wiązanie z DNA negatywny opłata pobierana pozytywnie do membrany, oddziela go w jednym DNA aspekty później do hybrydyzacji z sondą (patrz poniżej), i niszczy wszelkie pozostały RNA, które mogą nadal być obecny w DNA.
AUDIO : Listen to a detailed Southern Blot Explanation ! Courtesy: National Human Genome Research Institute. AUDIO: Słuchaj szczegółowe Southern Blot Wyjaśnienie! Uprzejmość: National Human Genome Research Institute.
As mentioned, the Southern blot is a technique used to identify and locate DNA sequences which are complementary to another piece of DNA called a probe. Jak wspomniano, Southern blot to technika używana do identyfikacji i zlokalizowania sekwencje DNA, które są komplementarne do innego kawałka DNA nazywa się sondy.
The separation on an electrophoretic gel of sequences or fragments of genomic or complementary DNA, partially digested by endonucleases, The fragments are then 'blotted' onto a membrane and allowed to hybridize with a specific, labeled probe in order to detect which bands contain the fragment or gene of interest. Oddzielenie elektroforezy na żelu z sekwencji lub fragmentów genomowego DNA lub uzupełniających, częściowo wytrawić przez endonucleases, fragmenty są następnie "blotted" na membranowy i dopuszczone do krzyżowały z konkretnym, oznaczone jako sondy w celu wykrycia zespołów, które zawiera fragment genów lub odsetek. Southern blot is particularly useful in detecting large gene rearrangements/deletions and large trinucleotide repeat expansions. Hybrydyzacja Southerna jest szczególnie przydatne w wykrywaniu dużych gen rearrangements / skreśleń i dużych trinucleotide repeat rozwinięć.
A Southern blot is a method routinely used in molecular biology to check for the presence of a DNA sequence in a DNA sample. A Southern blot jest rutynowo metody biologii molekularnej stosowane w celu sprawdzenia, czy na obecność DNA sekwencji DNA w próbce. Southern blotting combines agarose gel electrophoresis for size separation of DNA with methods to transfer the size-separated DNA to a filter membrane for probe hybridization. Southern blotting łączy elektroforezy na żelu agarozowym w separacji wielkości DNA z metod, aby przenieść rozmiar oddzielone DNA na filtr membranowy do hybrydyzacji sondy. Other blotting methods (ie, western blot, northern blot, southwestern blot) that employ similar principles, but using RNA or protein, have later been named in reference to Southern's name. Inne metody blotting (tj. zachodniej Hybrydyzacja, Hybrydyzacja northern, południowo-zachodniej blot), które zatrudniają podobnych zasadach, ale za pomocą RNA lub białka, które później zostało nazwane w odniesieniu do południowej imię. As the technique was eponymously named, Southern blot should be capitalised, whereas northern and western blots should not. Ponieważ technika eponymously został nazwany, Southern blot powinny być kapitalizowane, mając na uwadze, północnej i zachodniej blots nie powinno.
It is also used to determine the molecular weight of a restriction fragment and to measure relative amounts in different samples. Jest również używana w celu określenia masie cząsteczkowej fragment i ograniczenie środka w stosunku do kwot w różnych próbek.
Blots are techniques for transferring DNA and RNA proteins onto a carrier so they can be separated, and often follows the use of a gel electrophoresis. Blots są techniki przekazywania DNA, RNA i białek na przewoźnika, dzięki czemu mogą one zostać rozdzielone, a często nawiązuje do korzystania z elektroforeza. The Southern blot is used for transferring DNA. Southern blot jest używane do przenoszenia DNA.
Hybridization of the probe to a specific DNA fragment on the filter membrane indicates that this fragment contains DNA sequence that is complementary to the probe. Hybrydyzacji z sondą do konkretnego fragmentu DNA na filtr membranowy oznacza, że ten fragment zawiera sekwencji DNA, która jest komplementarne do sondy.
Southern blots are used in several main areas including gene discovery and mapping, evolution and development studies, diagnostics and forensics. Południowa blots są wykorzystywane w kilku głównych obszarach, w tym wykrywanie i mapowanie genów, ewolucji i rozwoju badań, diagnostyka i forensics.
Under optimal conditions, Southern blotting detects ~ 0.1 pg of the DNA of interest W optymalnych warunkach, Southern blotting wykrywa ~ 0,1 pg DNA z odsetek
To make 1 liter of 20X SSC Buffer, add the following: Aby 1 litr 20X SSC bufor, należy dodać następujące:
For problems and troubleshooting Southern Blotting, post a new thread to discuss it in the Southern Blotting Forum ! W przypadku problemów i rozwiązywania problemów Southern blotting, po nowy wątek do dyskusji na forum Southern blotting!
DNA Cloning Guide Klonowanie DNA Przewodnik
DNA Gel Electrophoresis DNA elektroforeza
Restriction Enzyme Digestion - all you need to know ! Ograniczenia Enzym Trawienie - wszystko co musisz wiedzieć!
Genomic DNA Isolation Protocol Izolacja genomowego DNA Protokół
Baceteria DNA Isolation Baceteria Izolacja DNA
Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Zastrzeżenie / Terms of Service | Privacy Policy | © 2005-2007 Molekularnej Station.com, Wszelkie prawa zastrzeżone.
Send this page to a friend Wyślij tę stronę znajomemu
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
