home > dna > sap-shrimp-alkaline-phosphatase-protocol > index.php Strona główna> DNA> SAP-krewetki-fosfatazy alkalicznej-protocol-> index.php
 |
|---|
You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musisz się zarejestrować zanim będziesz mógł umieścić na naszym forum lub skorzystać z zaawansowanych funkcji. Register Now! Zarejestruj się teraz! Its Free and Fast! Jego Darmowy i Fast!
Already registered? Już zarejestrowany? Login now below. Zaloguj się poniżej.
Already registered and Forgot your password? Już zarejestrowany i Zapomniałeś hasła? Click below to recover it. Kliknij poniżej, aby ją odzyskać.
Recover Lost Password Odzyskaj Nie pamiętam hasła
Join now - it's fast and free! Dołącz teraz - szybko i za darmo!
Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekularnej Station to największa sieć badaczy, naukowców i miłośników nauki w dowolnym miejscu!
Research is the process of going up alleys to see if they are blind. Badania procesu zdążając alejek, aby sprawdzić, czy są one w ciemno. ~Marston Bates ~ Marston Bates
Shrimp alkaline phosphatase or SAP, is an enzyme which catalyzes the dephosphorylation of 5’ phosphates from nucleic acid dephosphorylating RNA or DNA ends. Krewetka fosfatazy alkalicznej lub SAP, jest enzymem, który catalyzes w dephosphorylation z dnia 5 "fosforanów z kwasu nukleinowego RNA lub DNA dephosphorylating kończy.
Note that PCR products and also primers do not have phosphatases on their free ends, and therefore need to be phosphorylated prior to cloning if you are going to use a de-phosphorylated vector! Należy pamiętać, że produkty PCR, a także pierwsze nie ma fosfatazy w ich wolnym kończy, a zatem należy fosforylacji przed klonowanie, jeśli zamierzamy użyć de-fosforylacji wektor!
SAP is temperature unstable are therefore you can easily deactivate this enzyme (compared to CIP!). SAP jest niestabilny temperatury są zatem można łatwo wyłączyć tego enzymu (w porównaniu do CIP). SAP is deactivated with 65°C water bath incubation for 15 minutes. SAP jest wyłączony z 65 ° C łaźni wodnej na 15 minut inkubacji.
You get virtually no reaction. Pojawi się praktycznie żadnych reakcji. SAP requires at least 10mM MgCl2 (but optimal enzyme activity of shrimp alkaline phosphatase is at 20-25mM MgCl2) and it works well at pH 8.0. SAP wymaga co najmniej 10mm MgCl2 (ale optymalną aktywność enzymu fosfatazy alkalicznej krewetki jest na 20-25mm MgCl2) i działa również przy pH 8,0.
To dephosphorylate 1 pmol of DNA ends (2.5 ug of 3 Kb plasmid), for 1hr at 37°C you need: Aby dephosphorylate 1 pmol DNA kończy (2,5 ug z 3 KB plazmidu), dla 1godz w temperaturze 37 ° C należy:
0.1 units of SAP for 5' overhangs, 0.2 units for blunt and 0.5 units for 3' over hangs. 0,1 jednostki dla SAP 5 'znacznego, 0,2 jednostek ostra i 0,5 jednostki dla 3' zawiesza się ponad.
Enzyme comes 1 unit per ul, Thus to be safe you can use approx.0.5 units for 2 ug. Enzym się 1 jednostkę na ul Tak być bezpieczne można użyć approx.0.5 jednostek do 2 ug.
TIPS: SAP Enzyme can be added directly to restriction digest! ATRAKCJE: SAP enzymów mogą być dodane bezpośrednio do ograniczenia digest! Thus the whole proceeding including restriction enzyme digestion, dephosphorylation, enzyme inactivation, ligation or 5’ end-labeling can be performed in one single tube by just adding the appropriate reagents. Tak więc całe postępowanie w tym ograniczenie enzymatycznego trawienia, dephosphorylation, inaktywacji enzymu, ligation lub 5 'end-labeling mogą być wykonane w jednym tylko rurki przez dodanie odpowiednich odczynników. This will allow you to save time and be efficient! Pozwoli Ci to zaoszczędzić czas i być skuteczny!
Discuss and post questions about it in the Shrimp Alkaline Phosphatase and DNA Cloning Forum ! Po dyskusji i pytań na ten temat w Krewetka fosfatazy alkalicznej i DNA Klonowanie Forum!
DNA Cloning Guide Klonowanie DNA Przewodnik
DNA Gel Electrophoresis DNA elektroforeza
Restriction Enzyme Digestion - all you need to know ! Ograniczenia Enzym Trawienie - wszystko co musisz wiedzieć!
Genomic DNA Isolation Protocol Izolacja genomowego DNA Protokół
Baceteria DNA Isolation Baceteria Izolacja DNA
DNA Transformation - Contains History of DNA Transformacja DNA - historia Zawiera DNA
Find other protocols at our DNA Protocols external resource directory or see our DNA protocols . Znajdź inne protokoły w naszym DNA protokołów zewnętrznych zasobów katalogu lub znaleźć w naszym DNA protokołów.
Related: Powiązane:
DNA Microarray Protocols Mikromacierz Protokoły
Visit DNA Bioinformatics . Odwiedź DNA bioinformatyki.
Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Zastrzeżenie / Terms of Service | Privacy Policy | © 2005-2007 Molekularnej Station.com, Wszelkie prawa zastrzeżone.
Send this page to a friend Wyślij tę stronę znajomemu
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
