Welcome to Molecular Station! Zapraszamy do Molekularnej Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musisz się zarejestrować zanim będziesz mógł umieścić na naszym forum lub skorzystać z zaawansowanych funkcji. Register Now! Zarejestruj się teraz! Its Free and Fast! Jego Darmowy i Fast!

Already registered? Już zarejestrowany? Login now below. Zaloguj się poniżej.

User Name: Nazwa użytkownika:

Password: Hasło:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Już zarejestrowany i Zapomniałeś hasła? Click below to recover it. Kliknij poniżej, aby ją odzyskać.

Recover Lost Password Odzyskaj Nie pamiętam hasła

Join now - it's fast and free! Dołącz teraz - szybko i za darmo!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekularnej Station to największa sieć badaczy, naukowców i miłośników nauki w dowolnym miejscu!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Bookmark Bookmark Site Zakładka Zakładka Site

Mycoplasma Contamination | Cell Culture Mycoplasma Zanieczyszczenie | Komórka Kultura

We include here for cell culture labs, information on mycoplasma contaminations and the latest mycoplasma forum discussions for all your contamination questions and discussions. Jesteśmy tutaj dla laboratoriów hodowli komórek, informacje na temat skażenia i Mycoplasma najnowsze Mycoplasma forum dyskusji na wszystkie Twoje pytania i dyskusje skażenia.

Mycoplasma Background Mycoplasma Kontekst

Mycoplasmas are a genus of bacteria that lack a cell wall. Mykoplazmy są bakterie z rodzaju, że brak komórki ściany. Due to a lack of a cell wall, they are resistant to many antibiotics including penicillin or other beta-lactam antibiotics that target cell wall synthesis. Ze względu na brak komórki ściany, są one odporne na wiele antybiotyków w tym penicyliny lub inne antybiotyki beta-laktamowe, że cel syntezy ściany komórkowej.

Mycoplasma are either parasitic or saprophytic. Mycoplasma są albo pasożytnicze lub saprofitycznych. Several Mycoplasma are disease-causing in humans, including M. pneumoniae, which is an important cause of atypical pneumonia and other respiratory disorders, and M. genitalium, which is believed to be involved in pelvic inflammatory diseases. Kilka Mycoplasma są przyczyną choroby u ludzi, w tym M. pneumoniae, która jest ważną przyczyną nietypowe zapalenie płuc i inne schorzenia układu oddechowego, i M. genitalium, która jest uważana za udział w miednicy zapalnych chorób. They may cause or contribute to some cancers. Mogą one spowodować lub przyczynić się do niektórych nowotworów.

Genus Mycoplasma Rodz Mycoplasma

The genus Mycoplasma is one of several genera within the class Mollicutes. W rodzaju Mycoplasma jest jednym z kilku rodzajów w obrębie klasy Mollicutes. Mollicutes are bacteria which have small genomes, lack a cell wall and have a low GC-content (18-40 %). Mollicutes są bakterie, które mają małe genomów, brak komórki ściany i ma niską zawartość GC-(18-40%).

There are over 100 recognized species of the genus Mycoplasma. Istnieje ponad 100 uznanych gatunków z rodzaju Mycoplasma. Their genome size ranges from 0.58 1.38 megabase-pairs. Ich rozmiar waha się od genomu 0,58 1,38 megabase parami. Mollicutes are parasites or commensals of humans, animals (including insects), and plants; the genus Mycoplasma is by definition restricted to vertebrate hosts. Mollicutes są pasożyty lub commensals ludzi, zwierząt (w tym owadów) i roślin; rodzaju Mycoplasma z definicji jest ograniczony do kręgowców Zastępów. Cholesterol is required for the growth of species of the genus Mycoplasma as well as certain other genera of mollicutes. Cholesterol jest wymagane dla wzrostu gatunków z rodzaju Mycoplasma, jak również niektórych innych rodzajów z mollicutes. Their optimum growth temperature is often the temperature of their host if warmbodied (eg 37 degrees Celsius in humans) or ambient temperature if the host is unable to regulate its own internal temperature. Ich optymalny wzrost temperatury jest często temperatura ich przyjmującym, jeżeli warmbodied (np. 37 stopni Celsjusza u ludzi) lub temperatury otoczenia, jeśli komputer jest w stanie regulować własne temperatury wewnętrznej. Analysis of 16S ribosomal RNA sequences as well as gene content strongly suggest that the mollicutes, including the mycoplasmas, are closely related to either the Lactobacillus or the Clostridium branch of the phylogenetic tree (Firmicutes sensu stricto). Analiza sekwencji 16S rRNA, jak również treść genu silnie sugerują, że mollicutes, w tym mykoplazmy, są ściśle związane z albo Lactobacillus lub Clostridium oddział z drzewa filogenetyczne (Firmicutes sensu stricto).

Cell Lines and Mycoplasmas Linii komórkowych i mykoplazmy

In cell cultures, mycoplasmas may induce cellular changes, including chromosome aborations, changes in metabolism and cell growth. W hodowlach komórkowych, mykoplazmy komórkowych mogą wywołać zmiany, w tym chromosomie aborations, zmiany w metabolizmie i wzrostu komórek. Severe mycoplasma infections may destroy a cell line or render expensive or precious cell lines useless. Ciężkie zakażenia Mycoplasma może zniszczyć komórki linii lub uniemożliwić drogie szlachetnych lub linii komórek bezużyteczne.

Cell Culture Contamination with Mycoplasma Komórka Kultura Zanieczyszczenie Mycoplasma

Mycoplasmas are often found in research laboratories as contaminants in cell culture. Mykoplazmy są często znaleźć w laboratoriach badawczych, jak zanieczyszczeń w hodowli komórkowej. Mycoplasmal cell culture contamination occurs due to contamination from individuals or contaminated cell culture medium ingredients. Mykoplazmy hodowli komórek występuje z powodu skażenia skażenie od osób fizycznych lub skażonych hodowli komórkowej średnio składników.

Mycoplasma Detection Methods Mycoplasma metody wykrywania

Mycoplasma cells are usually smaller than 1 µm and therefore quite difficult to detect with conventional microscopy methods. Mycoplasma komórki są zwykle mniejsze niż 1 μ m, a zatem dość trudne do wykrycia z konwencjonalnymi metodami mikroskopii. Detection techniques include: Wykrywanie techniki obejmują:

• PCR
• Real-time PCR Real-time PCR
• Plating on sensitive Agar Plating wrażliwe na Agar
• DNA stains including DAPI or or Hoescht Stain DNA plam w tym DAPI lub Hoescht lub Stain

Hoechst Stain Mycoplasma Contamination Detection Protocol Hoechst Mycoplasma Zanieczyszczenie Wykrywanie Protokół

A Hoechst (Sigma, catalog #:H6024) staining method for Mycoplasma: A Hoechst (Sigma, katalogowy: H6024) barwienie metodą Mycoplasma:

1. For Adherent cells, place a sterile cover glass in petri dish. Dla Adherent komórek, umieścić w sterylnych szklanych okładka płytkę Petriego. Add 2-3 drops of cell suspension in the middle of coverglass (depending on the growth rate of your cells). Dodać 2-3 krople zawiesiny komórek w środku coverglass (w zależności od stopy wzrostu Twojej komórki).
2. Then carefully add 2-3 ml of medium without disturbing the cells. Następnie ostrożnie dodać 2-3 ml nośniku, bez naruszania komórek. Grow the cells until they are 50 -70% confluent. Wyhodować komórki, dopóki nie zostaną 50 -70% confluent.

Fixing Cells: Ustalenie komórek:

1. Prepare cell Fixative which is a mix fo 3:1 Methanol : glacial acetic acid (M:AA). Przygotowanie komórek fixative, który jest mieszanką 3:1 dla Metanol: lodowatego kwasu octowego (K: AA). Make sure you prepare this fresh before use. Upewnij się, że przygotowanie tego świeżego przed użyciem.
2. Discard medium from growing cells. Wyrzucić z rosnącym medium komórek. Add 2 ml of the Methanol : glacial acetic acid M:AA solution dropwise onto the side of the plate (not directly onto the cells). Dodać 2 ml metanolu: lodowatego kwasu octowego M: AA kropli roztworu na stronie płytki (nie bezpośrednio na komórki). Swirl the plate and discard solution. Swirl płytkę i odrzucić rozwiązania.
3. Add 2 ml of M:AA, swirl and leave on for 2-3 minutes at room temperature. Dodać 2 ml M: AA, wirować i pozostawić na 2-3 dla minut w temperaturze pokojowej.
4. Discard M: AA solution and rinse with water Odrzucić M: roztwór AA i spłukać wodą
5. Leave to air dry (you can keep the plate until you are ready to stain) Hoecht stain (cat# 33258 from Sigma) stock concentration = 0.1 mg/ml in water You can filter sterilize at this stage using a 0.2uM filter Wrap container in aluminium foil Store at 4 oC Working solution Prepare fresh each time as necessary Make 1:1000 dilution (0.1 µg/ml) of stock in water Pozostawić do suchego powietrza (możesz zachować tablicy, dopóki nie są gotowe do barwienia) Hoecht plam (kot # 33258: Sigma) stanie koncentracji = 0,1 mg / ml w wodzie można filtrować sterilize na tym etapie za pomocą filtra 0.2uM Wrap w pojemniku Sklep folii aluminiowej w temperaturze 4 ° C roztwór roboczy należy przygotować świeży każdym razem, jak potrzeby, 1:1000 rozcieńczenia (0,1 μ g / ml) wody w stanie

Staining Cells: Barwienie komórek:

1. Add enough Hoechst stain to cover the entire cover slip (use 1-2ml for a small Petri dish). Dodaj Hoechst wystarczy na pokrycie całego okładka slip (wykorzystanie 1-2ml na małą płytkę Petriego).
2. Leave the stain on for 45 minutes - 1 hour (in the dark). Pozostaw do barwienia na 45 minut - 1 godzina (w ciemności).
3. Rinse well with water. Spłukać dobrze wodą.
4. Mount on a microscope slide (mountant mix: 22 mM Citric Acid; 55.6 mM disodium phosphate; 50% glycerol, pH mix to 5.5) place a drop or two on cover slip (cells up) and place cover slip (cells down) on slide. Mount na szkiełko mikroskopowe (mountant mix: 22 mm Kwas cytrynowy; 55,6 mM fosforan disodowy; 50% gliceryny, wymieszać do pH 5,5) miejsce spadku lub dwa na pokrycie poślizgu (do komórek) i miejsce okładka slip (komórki w dół) na szkiełku .
5. Visualise under fluorescence microscope Wizualizację pod Mikroskop fluorescencyjny

Note: store Hoechst stain at 4oC at least, or aliquot into the freezer for long-term storage. Uwaga: w magazynie Hoechst 4oC co najmniej, lub podwielokrotności do zamrażalnika do długotrwałego przechowywania.