Welcome to Molecular Station! Velkommen til Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du må registrere deg før du kan poste på vårt forum eller bruke vår avanserte funksjoner. Register Now! Registrer deg nå! Its Free and Fast! Its Gratis og rask!

Already registered? Allerede registrert? Login now below. Logg inn nå nedenfor.

User Name: User Name:

Password: Passord:

Remember Me? Husk meg?

Already registered and Forgot your password? Allerede registrert og Glemt passord? Click below to recover it. Klikk nedenfor for å gjenopprette den.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Bli medlem nå - det er raskt og gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station er den største nettverk av forskere, vitenskapsmenn og vitenskap elskere overalt!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

siRNA and RNAi Protocols siRNA og RNAi Protokoller	siRNA and RNAi Bioinformatics siRNA og RNAi Bioinformatikk	siRNA and RNAi FAQ siRNA og RNAi FAQ	siRNA and RNAi Kits and Products siRNA og RNAi Kits og produkter	siRNA and RNAi Forum siRNA og RNAi Forum	siRNA and RNAi News siRNA og RNAi Nyheter

siRNA Protocols and RNAi Protocols siRNA Protokoller og RNAi Protokoller

siRNA Transfection Protocol siRNA Transfection Protocol

siRNA transfection protocol : Transfect 6 well plates siRNA transfection protokollen: Transfect 6 bra plater

1. apply first siRNA treatment when cells are 60% confluent (measure confluency with voltmeter); plate 1.5x10^6 cells on Friday, transfect on Wednesday. gjelder første siRNA behandling når cellene er 60% confluent (måle confluency med voltmeter); plate 1.5x10 ^ 6 celler på fredag, transfect på onsdag. For each well: For hver brønn:

1. Dilute 2.5 ug siRNA (20uM is approximately 0.26ug/ul. 9.62 ul per well of a 6-well plate) with culture media to a final volume of 100 ul. U se barrier pipette tips. You can make a master mix if all the wells will be transfected with the same siRNA. Fortynne 2,5 ug siRNA (20uM er ca 0.26ug/ul. 9,62 ul per brønn av en 6-brønnen plate) med kultur media til et endelig volum på 100 ul. U se barriere pipette tips. Du kan gjøre en master blanding hvis alle Brønnene vil bli transfected med samme siRNA. Do this in a sterile autoclaved plastic tube. Gjør dette i et sterilt autoclaved plast tube.
2. Add 12 ul RNAiFect (Qiagen - or any other RNA transfection reagent, see manufacturer's protocol) per siRNA mastermix tube and mix gently. Legg til 12 ul RNAiFect (Qiagen - eller noen andre RNA transfection reagent, se produsentens protokollen) per siRNA mastermix tube og bland forsiktig.
3. Incubate for 15 minutes at room temperature to allow complex formation between siRNA and lipids. Incubate for 15 minutter i romtemperatur for å tillate komplekse formasjon mellom siRNA og lipider.
4. Aspirate media from cells and add 900ul fresh media to each well. Aspirate medier fra cellene og legge 900ul fersk media for hver brønn.
5. Add siRNA mixture (112 ul per well) drop-wise while gently swirling plate. Legg til siRNA blanding (112 ul per brønn) drop-messig mens mildt swirling plate.
• Apply second siRNA treatment 2 days later, following the steps outlined above. Bruk andre siRNA behandling 2 dager senere, etter den fremgangsmåten som er beskrevet ovenfor. The second transfection will add to decrease expression of the gene of interest. Den andre transfection vil legge til for å redusere uttrykket av genet av interesse.

Other siRNA protocols Andre siRNA protokoller

Also see our siRNA and RNAi page Se også vår siRNA og RNAi side


Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | © 2005-2007 Molecular Station.com, all rights reserved.

Send this page to a friend Send denne siden til en venn