Welcome to Molecular Station! Velkommen til Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du må registrere deg før du kan poste på vårt forum eller bruke vår avanserte funksjoner. Register Now! Registrer deg nå! Its Free and Fast! Its Gratis og rask!

Already registered? Allerede registrert? Login now below. Logg inn nå nedenfor.

User Name: User Name:

Password: Passord:

Remember Me? Husk meg?

Already registered and Forgot your password? Allerede registrert og Glemt passord? Click below to recover it. Klikk nedenfor for å gjenopprette den.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Bli medlem nå - det er raskt og gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station er den største nettverk av forskere, vitenskapsmenn og vitenskap elskere overalt!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Protein Protocols Protein Protokoller

Protein Encyclopedia Protein Encyclopedia

Protein Bioinformatics Protein Bioinformatikk

Protein Science Forum Protein Science Forum

Protein Blog Protein Blog

DNA News DNA Nyheter

Protein Determination by UV Absorption Protocol Protein Fastsettelse av UV Absorption Protocol

Protein Determination by UV Absorption Protocol, ( Modified from the protocol by Alastair Aitken and Michèle P. Learmonth) Protein Fastsettelse av UV Absorption Protocol (Modifisert fra protokollen ved Alastair Aitken og Michèle P. learmonth)

Materials for UV Protein Concentration Materialer for UV Protein Konsentrasjon

1. 0.1 M K2SO4 (pH 7.0). 0,1 M K2SO4 (pH 7,0).
2. 5 mM potassium phosphate buffer, pH 7.0. 5 mm Kaliumfosfat buffer, pH 7,0.
3. Nonionic detergent (0.01% Brij 35) Nonionic vaskemiddel (0,01% Brij 35)
4. Guanidinium-HCl. Guanidinium-listen.
5. 0.2-µm Millipore (Watford, UK) filter. 0.2-μ m Millipore (Watford, UK) filter.
6. UV-visible spectrometer: The hydrogen lamp should be selected for maximum     intensity UV-synlig spektrometer: hydrogen lampen bør være valgt for maksimal intensitet
at the particular wavelength. på bestemt bølgelengde.
7. Cuvets, quartz, for <215 nm. Cuvets, kvarts, <215 nm.

Protein Concentration UV Method Protein Konsentrasjon UV Metode

Estimation of Protein by Near UV Absorbance (280 nm): Estimering av Protein ved I nærheten av UV Absorbance (280 nm):

1. A reliable spectrophotometer is necessary. En pålitelig spektrofotometer er nødvendig. The protein solution must be diluted in the The protein løsningen må bli utvannet i
buffer to a concentration that is well within the accurate range of the instrument (see Notes 1 and 2). buffer til en konsentrasjon som er godt innenfor det nøyaktige omfanget av instrumentet (se Merknader 1 og 2).

2. The protein solution to be measured can be in a wide range of buffers, so it is usually no problem to find one that is appropriate for the protein which may already be in a particular buffer required for a purification step or assay for enzyme activity, for example (see Notes 3 and 4). The protein løsning skal måles kan være i et bredt spekter av buffere, så det er vanligvis ikke noe problem å finne en som passer for protein som kanskje allerede er i en spesiell buffer som kreves for en rensing trinn eller analysen for enzym aktivitet, for eksempel (se Merknader 3 og 4).

3. Measure the absorbance of the protein solution at 280 nm, using quartz cuvets or cuvets that are known to be transparent to this wavelength, filled with a volume of solution sufficient to cover the aperture through which the light beam passes. Mål absorbance av protein løsning på 280 nm, ved hjelp av kvarts cuvets eller cuvets som er kjent for å være gjennomsiktig for dette bølgelengdeområdet, fylt med et volum av løsningen er tilstrekkelig til å dekke hull gjennom som lysstrålen passerer.

4. The value obtained will depend on the path length of the cuvet. Verdien hentes vil avhenge av banen lengden på cuvet. If not 1 cm, it must be Hvis ikke 1 cm, den må være
adjusted by the appropriate factor. justert etter den aktuelle faktoren. The Beer-Lambert law states that: A (absorbance) = ε cl where ε = extinction coefficient, c = concentration in mol/L and l = optical path length in cm. The Beer-Lambert loven slår fast at: A (absorbance) = ε cl der ε = extinction coefficient, c = konsentrasjon i mol / L og l = optiske banen lengde i cm. Therefore, if ε is known, measurement of A gives the concentration directly, ε is Derfor, hvis ε er kjent, måling av B gir konsentrasjonen direkte, ε er
normally quoted for a 1-cm path length. normalt sitert for et 1-banen cm lengde.

5. The actual value of UV absorbance for a given protein must be determined by some absolute method, eg, calculated from the amino acid composition, which can be determined by amino acid analysis. Den faktiske verdien av UV-absorbance for et gitt protein må bestemmes av noen absolutt metode, for eksempel, beregnet fra aminosyre sammensetning, som kan bestemmes ved aminosyre analyse. The UV absorbance for a protein is then calculated according to the following formula: A280 (1 mg/mL) = (5690nw + 1280ny + 120nc)/M The UV-absorbance for et protein er deretter beregnes i henhold til følgende formel: A280 (1 mg / ml) = (5690nw + 1280ny + 120nc) / M
where nw, ny, and nc are the numbers of Trp, Tyr, and Cys residues in the polypeptide of der NW, ny, og nc er antall trp, Tyr, og Cys rester i polypeptide av
mass M and 5690, 1280 and 120 are the respective extinction coefficients for these residues (see Note 5). masse M og 5690, 1280 og 120 er de respektive extinction koeffisientene til disse rester (Se note 5).

See also Protein Concentration Protocols from other labs . Se også Protein Konsentrasjon Protokoller fra andre laboratorier.

Other Protein Articles: Andre Protein artikler:

Western Blot Home Western Blot Hjem

Immunoprecipitation Home Immunoprecipitation Hjem

SDS-PAGE Gel Electrophoresis SDS-PAGE Gel Electrophoresis

Protein Separation Protein separasjon

Protein Purification Protein Purification

Protein Identification Protein Identification

Recombinant Protein Expression Systems Rekombinante Protein Expression Systems

Protein Expression Techniques Protein Expression Teknikker