Welcome to Molecular Station! Velkommen til Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du må registrere deg før du kan poste på vårt forum eller bruke vår avanserte funksjoner. Register Now! Registrer deg nå! Its Free and Fast! Its Gratis og rask!

Already registered? Allerede registrert? Login now below. Logg inn nå nedenfor.

User Name: User Name:

Password: Passord:

Remember Me? Husk meg?

Already registered and Forgot your password? Allerede registrert og Glemt passord? Click below to recover it. Klikk nedenfor for å gjenopprette den.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Bli medlem nå - det er raskt og gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station er den største nettverk av forskere, vitenskapsmenn og vitenskap elskere overalt!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Protein Protocols Protein Protokoller

Protein Encyclopedia Protein Encyclopedia

Protein Bioinformatics Protein Bioinformatikk

Protein Science Forum Protein Science Forum

Protein Blog Protein Blog

DNA News DNA Nyheter

Bradford Protein Assay Protocol Bradford Protein Assay Protocol

Protein Concentration Determinatino using the Bradford Assay Method Protein Konsentrasjon Determinatino bruke Bradford Assay Metode

Materials for Bradford Assay Materialer for Bradford Assay

1. Reagent: The assay reagent is made by dissolving 100 mg of Coomassie Blue G250 in 50 mL of 95% ethanol. Reagent: analysen reagent er gjort av oppløsnings 100 mg av Coomassie Blue G250 i 50 ml av 95% etanol. The solution is then mixed with 100 mL of 85% phosphoric acid and made up to 1 L with distilled water. Løsningen er deretter blandet med 100 ml av 85% Fosforsyre og gjøres opp til 1 L med destillert vann. The reagent should be filtered through Whatman no. Den reagent skal være filtrert gjennom Whatman ikke. 1 filter paper and then stored in an amber bottle at room temperature. 1 filter papir og deretter lagret i et gult flasken i romtemperatur. It is stable for several weeks. Det er stabilt i flere uker. However, during this time dye may precipitate from solution and so the stored reagent should be filtered before use. Men i løpet av denne tiden fargestoff mai bunnfall fra løsningen og så lagres reagent bør filtreres før bruk.

2. Protein standard . Protein standard. Bovine γ-globulin at a concentration of 1 mg/mL (100 µg/mL for the microassay) in distilled water is used as a stock solution. Bovine γ-globulin ved en konsentrasjon på 1 mg / ml (100 μ g / ml for microassay) i destillert vann er brukt som lager. This should be stored frozen at –20oC. Dette bør oppbevares frosset på-20oC. Since the moisture content of solid protein may vary during storage, the precise concentration of protein in the standard solution should be determined from its absorbance at 280 nm. Siden moisture content of solid protein kan variere i løpet av lagringsplass, den nøyaktige konsentrasjonen av protein i standard løsning bør bestemmes fra absorbance på 280 nm. The absorbance of a 1 mg/mL solution of γ-globulin, in a 1-cm light path, is 1.35. Den absorbance av en 1 mg / ml løsning av γ-globulin, i en 1 cm lys banen, er 1,35. The corresponding values for two alternative protein standards, bovine serum albumin and ovalbumin, are 0.66 and 0.75, respectively. Tilsvarende verdier for to alternative protein standarder, storfe albumin og ovalbumin, er 0,66 og 0,75, henholdsvis.

3. Plastic and glassware used in the assay should be absolutely clean and detergent free. Plast og glass brukt i analysen skal være helt rent og vaskemiddel gratis. Quartz (silica) spectrophotometer cuvettes should not be used, as the dye binds to this material. Quartz (Silica) spektrofotometer cuvettes bør ikke brukes som fargestoffet tilknytninger til dette materialet. Traces of dye bound to glassware or plastic can be removed by rinsing with methanol or detergent solution. Spor av fargestoff bundet til glass eller plast kan fjernes ved å vaske med metanol eller vaskemiddel løsning.

Standard Bradford Assay Method Standard Bradford Assay Metode

1. Pipet between 10 and 100 µg of protein in 100 µL total volume into a test tube. Pipet mellom 10 og 100 μ g av protein på 100 μ L totale volumet i reagensglasset. If the approximate sample concentration is unknown, assay a range of dilutions (1, 1:10, 1:100, 1:1000). Hvis den omtrentlige eksemplar konsentrasjon er ukjent, analysen en rekke dilutions (1, 1:10, 1:100, 1:1000). Prepare duplicates of each sample. Forbered duplikater av hvert eksemplar.

2. For the calibration curve, pipet duplicate volumes of 10, 20, 40, 60, 80, and 100 µL of 1 mg/mL γ-globulin standard solution into test tubes, and make each up to 100 µL with distilled water. For kalibrering kurven, pipet dupliserte mengder 10, 20, 40, 60, 80 og 100 μ l 1 mg / ml γ-globulin standard løsning i test-rør, og gjør hvert opp til 100 μ L med destillert vann. Pipet 100 µL of distilled water into a further tube to provide the reagent blank. Pipet 100 μ L av destillert vann til en ytterligere tube å gi reagent tomt.

3. Add 5 mL of protein reagent to each tube and mix well by inversion or gentle vortexmixing. Legg til 5 ml av protein reagent for hver tube og bland godt av inversjon eller milde vortexmixing. Avoid foaming, which will lead to poor reproducibility. Unngå foaming, noe som vil føre til dårlig Reproduserbarhet.

4. Measure the A595 of the samples and standards against the reagent blank between 2 min and 1 h after mixing. Mål A595 av prøvene og standarder mot reagent tomt mellom 2 min og 1 t etter miksing. The 100 µg standard should give an A595 value of about 0.4. The 100 μ g standard bør gi en A595 verdi på om lag 0,4. The standard curve is not linear, and the precise absorbance varies depending on the age of the assay reagent. Standarden kurven ikke er lineær, og den nøyaktige absorbance varierer avhengig av alder av analysen reagent. Consequently, it is essential to construct a calibration curve for each set of assays. Derfor er det viktig å lage en kalibrering kurve for hvert sett av essay.

Microassay Method This form of the assay is more sensitive to protein. Microassay Metode Denne formen for analysen er mer følsomme for protein. Consequently, it is useful when the amount of the unknown protein is limited (see also Note 9). Derfor er det nyttig når mengden av ukjent protein er begrenset (se også Note 9). 1. Pipet duplicate samples containing between 1 and 10 µg in a total volume of 100 µL into 1.5-mL polyethylene microfuge tubes. Pipet dupliserte vareprøver som inneholder mellom 1 og 10 μ g i et totalt volum på 100 μ L til 1,5 ml polyetylen microfuge tuber. If the approximate sample concentration is unknown, assay a range of dilutions (1, 1:10, 1:100, 1:1000). Hvis den omtrentlige eksemplar konsentrasjon er ukjent, analysen en rekke dilutions (1, 1:10, 1:100, 1:1000).

2. For the calibration curve, pipet duplicate volumes of 10, 20, 40, 60, 80, and 100 µL of 100 µg/mL γ-globulin standard solution into microfuge tubes, and adjust the volume to 100 µL with water. For kalibrering kurven, pipet dupliserte mengder 10, 20, 40, 60, 80 og 100 μ L på 100 μ g / ml γ-globulin standard løsning i microfuge rør, og justere volumet til 100 μ L med vann. Pipet 100 µL of distilled water into a tube for the reagent blank. Pipet 100 μ L av destillert vann i et rør for reagent tomt.

3. Add 1 mL of protein reagent to each tube and mix gently, but thoroughly. Legg til 1 ml av protein reagent for hver tube og bland forsiktig, men grundig.

4. Measure the absorbance of each sample between 2 and 60 min after addition of the protein reagent. Mål absorbance av hvert eksemplar mellom 2 og 60 min etter tillegg av protein reagent. The A595 value of a sample containing 10 µg γ-globulin is 0.45. The A595 verdien av et eksemplar som inneholder 10 μ g γ-globulin er 0,45.

see also: Bradford Protein Assay se også: Bradford Protein Assay

References for Bradford Assay Referanser til Bradford Assay

Modified from protocol by Nicholas J. Kruger. Fornyet fra protokollen av Nicholas J. Kruger.

Related Protein Concentration Articles Norsk Protein Konsentrasjon artikler

Protein Concentration Protein Konsentrasjon

Protein Concentration Protocol Protein Konsentrasjon Protocol

Lowry Protein Assay Lowry Protein Assay

Lowry Method Protocol Lowry metode Protocol

Bradford Method Bradford Metode

Other Protein Methods: Andre Protein Methods:

Western Blot Western Blot

Immunoprecipitation Immunoprecipitation