Welcome to Molecular Station! Velkommen til Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du må registrere deg før du kan poste på vårt forum eller bruke vår avanserte funksjoner. Register Now! Registrer deg nå! Its Free and Fast! Its Gratis og rask!

Already registered? Allerede registrert? Login now below. Logg inn nå nedenfor.

User Name: User Name:

Password: Passord:

Remember Me? Husk meg?

Already registered and Forgot your password? Allerede registrert og Glemt passord? Click below to recover it. Klikk nedenfor for å gjenopprette den.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Bli medlem nå - det er raskt og gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station er den største nettverk av forskere, vitenskapsmenn og vitenskap elskere overalt!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

DNA Protocols DNA Protokoller

DNA Encyclopedia DNA Encyclopedia

DNA Bioinformatics DNA Bioinformatikk

DNA Forum DNA Forum

DNA Blog DNA-blogg

DNA News DNA Nyheter

DNA Books DNA Bøker

SAP Shrimp Alkaline Phosphatase Protocol SAP Shrimp Alkaline Phosphatase Protocol

Shrimp alkaline phosphatase or SAP, is an enzyme which catalyzes the dephosphorylation of 5’ phosphates from nucleic acid dephosphorylating RNA or DNA ends. Shrimp alkaliske phosphatase eller SAP, er et enzym som catalyzes the dephosphorylation av 5 "fosfater fra nucleic acid dephosphorylating RNA eller DNA slutter.

Note that PCR products and also primers do not have phosphatases on their free ends, and therefore need to be phosphorylated prior to cloning if you are going to use a de-phosphorylated vector! Vær oppmerksom på at PCR-produkter og også første ikke har phosphatases på deres gratis slutter, og derfor må phosphorylated før kloning hvis du skal bruke en de-phosphorylated vektorgrafikk!

SAP is temperature unstable are therefore you can easily deactivate this enzyme (compared to CIP!). SAP er ustabil temperatur er derfor kan du enkelt deaktivere dette enzymet (i forhold til CIP). SAP is deactivated with 65°C water bath incubation for 15 minutes. SAP er deaktivert med 65 ° C vannbad incubation for 15 minutter.

You get virtually no reaction. Du får praktisk talt ingen reaksjon. SAP requires at least 10mM MgCl2 (but optimal enzyme activity of shrimp alkaline phosphatase is at 20-25mM MgCl2) and it works well at pH 8.0. SAP krever minst 10mm MgCl2 (men optimal enzym aktivitet av reke alkaliske phosphatase er at 20-25mm MgCl2) og det fungerer bra på pH 8,0.

To dephosphorylate 1 pmol of DNA ends Slik dephosphorylate 1 pmol av DNA slutter

To dephosphorylate 1 pmol of DNA ends (2.5 ug of 3 Kb plasmid), for 1hr at 37°C you need: Slik dephosphorylate 1 pmol av DNA-ender (2,5 ug av 3 Kb plasmid), 1t ved 37 ° C trenger du:

0.1 units of SAP for 5' overhangs, 0.2 units for blunt and 0.5 units for 3' over hangs. 0,1 enheter av SAP for 5 'overhangs, 0,2 enheter for sløv og 0,5 enheter for 3 "over henger.
Enzyme comes 1 unit per ul, Thus to be safe you can use approx.0.5 units for 2 ug. Enzym kommer 1 unit per ul, og dermed å være sikker kan du bruke approx.0.5 enheter for 2 ug.

TIPS: SAP Enzyme can be added directly to restriction digest! TIPS: SAP Enzym kan legges direkte til begrensning fordøye! Thus the whole proceeding including restriction enzyme digestion, dephosphorylation, enzyme inactivation, ligation or 5’ end-labeling can be performed in one single tube by just adding the appropriate reagents. Således hele rettssaken inkludert begrensning enzymet fordøyelse, dephosphorylation, enzym inaktivering, ligation eller 5 'ende-merking kan utføres på en enkelt rør ved bare å legge den aktuelle reagenser. This will allow you to save time and be efficient! Dette vil tillate deg å spare tid og være effektiv!

Troubleshooting SAP Shrimp Alkaline Phosphatase? Feilsøking SAP Shrimp Alkaline Phosphatase?

Discuss and post questions about it in the Shrimp Alkaline Phosphatase and DNA Cloning Forum ! Diskuter og legge inn spørsmål om det i det Shrimp Alkaline Phosphatase og DNA Cloning Forum!

Other DNA Protocols and Methods Andre DNA-protokoller og metode

DNA Cloning Guide DNA Cloning Guide

DNA Gel Electrophoresis DNA-Gel Electrophoresis

Restriction Enzyme Digestion - all you need to know ! Restriction Enzym fordøyelse - alt du trenger å vite!

Genomic DNA Isolation Protocol Genomiske DNA Isolation Protocol

Baceteria DNA Isolation Baceteria DNA Isolation

DNA Transformation - Contains History of DNA DNA Transformasjon - Inneholder historie DNA

Find other protocols at our DNA Protocols external resource directory or see our DNA protocols . Finn andre protokoller på vårt DNA Protokoller ekstern ressurs katalog eller se vår DNA-protokoller.

Related: Relatert:

DNA Microarray Protocols DNA microarray Protokoller

PCR Protocols PCR-protokoller

DNA Bioinformatics DNA Bioinformatikk

Visit DNA Bioinformatics . Besøk DNA Bioinformatikk.

DNA-Related News DNA-relaterte nyheter

DNA News DNA Nyheter