Welcome to Molecular Station! Velkommen til Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du må registrere deg før du kan poste på vårt forum eller bruke vår avanserte funksjoner. Register Now! Registrer deg nå! Its Free and Fast! Its Gratis og rask!

Already registered? Allerede registrert? Login now below. Logg inn nå nedenfor.

User Name: User Name:

Password: Passord:

Remember Me? Husk meg?

Already registered and Forgot your password? Allerede registrert og Glemt passord? Click below to recover it. Klikk nedenfor for å gjenopprette den.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Bli medlem nå - det er raskt og gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station er den største nettverk av forskere, vitenskapsmenn og vitenskap elskere overalt!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

DNA Protocols DNA Protokoller

DNA Encyclopedia DNA Encyclopedia

DNA Bioinformatics DNA Bioinformatikk

DNA Forum DNA Forum

DNA Blog DNA-blogg

DNA News DNA Nyheter

DNA Books DNA Bøker

Agarose Purification DNA Fragments Agarose Purification DNA Bruddstykker

Copyright 2007 Molecular Station Copyright 2007 Molecular Station

DNA Fragment Purification from Agarose Protocol DNA Fragment Rensing fra Agarose Protocol

1. Run DNA on "Low melt" agarose gel. Kjør DNA på "Low melt" agarose gel.
2. For 600bp DNA fragments to 5kb use1%; For 300- 700bp use 2% agarose. For 600bp DNA-fragmenter til 5kb use1%, for 300 - 700bp bruke 2% agarose. If you need to run smaller fragments use 2% "Nusieve" + 1% "Low melt". Hvis du trenger å kjøre mindre fragmenter bruke 2% "Nusieve" + 1% "Low melt".
3. After bands have separated, visualize the band on a UV box (minimize exposure of DNA to UV) Etter band har separert, se bandet på en UV-boksen (minimere eksponering av DNA til UV)
4. Cut band out (DO NOT scratch the UV filter on the light box!). Cut band ut (IKKE grunnen UV-filter på lyset boksen!).
5. Add 100 ul of TE buffer (10mM Tris-HCl pH 7.6, 1mM EDTA) to band, crush, heat to 65oC for approx. Legg til 100 ul av TE buffer (10mm Tris-HCL pH 7,6, 1mM EDTA) til bandet, forelsket, varme til 65oC til ca. 5 min, add 200l of phenol, vortex, heat 65°C for 3 min., vortex. 5 min, legge til 200l av phenol, Vortex, varme 65 ° C for 3 min., Vortex.
6. Microfuge 5 mins, remove supernant Microfuge 5 minutter, fjerner supernant
7. Add 100 l of TE to phenol, vortex, heat 65°C 3 min. Legg til 100 l av TE for phenol, Vortex, varme 65 ° C 3 min. vortex
8. Microfuge, pool supernants. Microfuge, pool supernants.
9. Chloroform extract (approx. 400 ul), microfuge 3 min. Chloroform pakke (ca. 400 ul), microfuge 3 min.
10. EtOH precipitate, adding 1/10 vol. EtOH overilt, legger 1 / 10 vol. 3M Na0Ac, 2.5 vol. 3M Na0Ac, 2,5 vol. EtOH.
11. -20°C 1-2+hrs; spin 30 min., dry down, bring up in suitable vol 0.1X TE -20 ° C + 1-2 timer; spinn 30 min. Tørt ned, ta opp i egnede vol 0.1X TE

Tips for DNA Agarose Gel Purification Tips for DNA Agarose Gel Purification

• Set the trans-illuminator to long UV wavelength (or the low-power). Sett trans-illuminator for lenge UV bølgelengde (eller lav-effekt). This is a great way to minimise the amount of time and energy of UV DNA exposure. Dette er en flott måte å redusere mengden av tid og energi i UV DNA-eksponering. This will minimize the UV mutagenesis of the DNA. Dette vil minimere UV mutagenesis av DNA.
• Trim off as much of agarose from the band as possible without removing DNA. Trim så mye av agarose fra bandet som mulig uten å fjerne DNA. This helps in minimizing agarose contamination which will enhance DNA purification. Dette hjelper på å minimere agarose forurensning som vil øke DNA-rensing.
• If you are getting problems use commercial kits such as spin-columns.There are some excellent kits for extracting DNA if you can afford them. Hvis du får problemer bruke kommersielle kits som spin-columns.There er noen gode prosjektpakker for utpakking av DNA hvis du har råd til dem. These include kits from Qiagen, Sigma, and other companies. Disse inkluderer byggesett fra Qiagen, Sigma og andre selskaper.

Related Articles for DNA Purification Relaterte artikler for DNA Purification