Separating the two Strands of a DNA double Helix Deler de to Strands av en DNA double Helix

While the ratios of G to C and A to T in an organism's DNA are fixed, the GC content (percentage of G +C) can vary considerably from one DNA to another.When a DNA solution is heated enough, the non-covalent forces that hold the two strands together weaken and finally break.When this happens, the two strands come apart in a process known as DNA denaturation, or DNA melting.The temperature at which the DNA strands are half denatured is called the melting temperature, or Tm. Mens Nøkkeltall av G til C og A til T i en organisme er DNA er løst, GC-innhold (i prosent av G + C) kan variere betydelig fra ett DNA til another.When en DNA-løsning er varm nok, ikke-Kovalent styrker som holder de to tilnærmingene sammen svekkes og til slutt break.When dette skjer, de to tilnærmingene kommer hverandre i en prosess som kalles DNA denaturation eller DNA melting.The temperatur der DNA tilnærmingene er halv denatured kalles Smeltetemperatur eller TM . The amount of strand separation, or melting, is measured by the absorbance of the DNA solution at 260nm.Nucleic acids absorb light at this wavelength because of the electronic structure in their bases, but when two strands of DNA come together, the close proximity of the bases in the two strands quenches some of this absorbance.When the two strands separate, this quenching disappears and the absorbance rises 30%-40%.This is called hyperchromic shift. Mengden av strand separasjon, eller smelter, er målt ved absorbance av DNA-løsningen på 260nm.Nucleic syrer absorbere lys på bølgelengde på grunn av den elektroniske strukturen i sine baser, men når to tilnærmingene av DNA komme sammen, nærhet av av baser i de to tilnærmingene quenches noe av denne absorbance.When de to tilnærmingene separat, dette quenching forsvinner og absorbance stiger 30% -40%. Dette kalles hyperchromic skift.
The GC content of DNA has a significant effect on its Tm.The higher a DNA's GC content, the higher its Tm.Why should this be?One of the forces holding the two strands of DNA together is hydrogen bonding.Also GC pairs form three hydrogen bonds, whereas AT pairs have only two.It stands to reason, then that two strands of DNA rich in G and C will hold to each other more tightly than those of AT-rich DNA. GC innhold av DNA har en betydelig effekt på Tm.The høyere en DNA's GC innhold, jo høyere dens Tm.Why bør dette være? En av styrkene holder de to tilnærmingene av DNA sammen er hydrogen bonding.Also GC parene form tre hydrogen obligasjoner, mens AT parene har bare two.It står til grunn, og at to tilnærmingene av DNA rik på G og C vil holde til hverandre mer snevert enn AT-rik DNA.
Heating is not the only way to denature DNA.Organic solvents such as dimethyl sulfoxide and formamide, or high pH, disrupt the hydrogen bonding between DNA strands and promote denaturation.Lowering the salt concentration of the DNA solution also aids denaturation by removing the ions that shield the negative charges on the two strands from one another.At low ionic strength, the mutually repulsive forces of the negative charges are strong enough to denature the DNA ar a relatively low temperature. Varme er ikke den eneste måten å denature DNA.Organic løsemidler som dimethyl sulfoxide og Formamid, eller høy pH, avbryte hydrogen bonding mellom DNA tilnærmingene og fremme denaturation.Lowering av salt konsentrasjonen av DNA-løsningen også hjelpemidler denaturation ved å fjerne ionet som skjerme de negative kostnadene på de to tilnærmingene fra en another.At low ionic styrke, gjensidig frastøtende krefter på negative beløp er sterk nok til å denature i DNA over en relativt lav temperatur.