Welcome to Molecular Station! Velkommen til Molecular Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du må registrere deg før du kan poste på vårt forum eller bruke vår avanserte funksjoner. Register Now! Registrer deg nå! Its Free and Fast! Its Gratis og rask!

Already registered? Allerede registrert? Login now below. Logg inn nå nedenfor.

User Name: User Name:

Password: Passord:

Remember Me? Husk meg?

Already registered and Forgot your password? Allerede registrert og Glemt passord? Click below to recover it. Klikk nedenfor for å gjenopprette den.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Bli medlem nå - det er raskt og gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station er den største nettverk av forskere, vitenskapsmenn og vitenskap elskere overalt!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Bookmark Bookmark Site Bookmark Bookmark Site

Mycoplasma Contamination | Cell Culture Mycoplasma forurensning | Cell Kultur

We include here for cell culture labs, information on mycoplasma contaminations and the latest mycoplasma forum discussions for all your contamination questions and discussions. Vi inkluderer her for celle kultur Labs, informasjon om mycoplasma contaminations og den nyeste mycoplasma forum diskusjoner for alle forurensning spørsmål og diskusjoner.

Mycoplasma Background Mycoplasma Bakgrunn

Mycoplasmas are a genus of bacteria that lack a cell wall. Mycoplasmas er en sortering av bakterier som mangler en celle veggen. Due to a lack of a cell wall, they are resistant to many antibiotics including penicillin or other beta-lactam antibiotics that target cell wall synthesis. Grunnet mangel på en celle veggen, de er motstandsdyktig mot mange antibiotika, inkludert penicillin eller andre beta-lactam antibiotika som er rettet mot celle veggen syntese.

Mycoplasma are either parasitic or saprophytic. Mycoplasma er enten parasitic eller saprophytic. Several Mycoplasma are disease-causing in humans, including M. pneumoniae, which is an important cause of atypical pneumonia and other respiratory disorders, and M. genitalium, which is believed to be involved in pelvic inflammatory diseases. Flere Mycoplasma er sykdom-årsak i mennesker, inkludert M. pneumoniae, som er en viktig årsak til atypical lungebetennelse og andre lungesykdommer, og M. genitalium, som antas å være involvert i bekken provoserende sykdommer. They may cause or contribute to some cancers. De kan forårsake eller bidra til noen kreften.

Genus Mycoplasma Slekt Mycoplasma

The genus Mycoplasma is one of several genera within the class Mollicutes. Den signalementet Mycoplasma er ett av flere genera innenfor klassen Mollicutes. Mollicutes are bacteria which have small genomes, lack a cell wall and have a low GC-content (18-40 %). Mollicutes er bakterier som har liten Genova, mangel en celle veggen og har en lav GC-innhold (18-40%).

There are over 100 recognized species of the genus Mycoplasma. Det er over 100 anerkjente arter av arter Mycoplasma. Their genome size ranges from 0.58 1.38 megabase-pairs. Deres genome størrelsen varierer fra 0,58 1,38 megabase-parene. Mollicutes are parasites or commensals of humans, animals (including insects), and plants; the genus Mycoplasma is by definition restricted to vertebrate hosts. Mollicutes er parasitter eller commensals av mennesker, dyr (blant annet insekter), og planter, arter Mycoplasma er per definisjon begrenses til Virveldyr vertene. Cholesterol is required for the growth of species of the genus Mycoplasma as well as certain other genera of mollicutes. Kolesterol er nødvendig for vekst av arten av arter Mycoplasma samt enkelte andre genera av mollicutes. Their optimum growth temperature is often the temperature of their host if warmbodied (eg 37 degrees Celsius in humans) or ambient temperature if the host is unable to regulate its own internal temperature. Deres optimal vekst temperatur er ofte temperaturen i sine vert hvis warmbodied (f.eks 37 grader Celsius i mennesker) eller temperatur hvis verten er ikke i stand til å regulere sin egen interne temperatur. Analysis of 16S ribosomal RNA sequences as well as gene content strongly suggest that the mollicutes, including the mycoplasmas, are closely related to either the Lactobacillus or the Clostridium branch of the phylogenetic tree (Firmicutes sensu stricto). Analyse av 16s ribosomal RNA sekvenser så vel som genetisk innhold sterkt foreslår at mollicutes, inkludert mycoplasmas, er nært knyttet til enten Lactobacillus eller Clostridium grenen av phylogenetic tree (Firmicutes sensu stricto).

Cell Lines and Mycoplasmas Cellen Linjer og Mycoplasmas

In cell cultures, mycoplasmas may induce cellular changes, including chromosome aborations, changes in metabolism and cell growth. I celle kulturer, mycoplasmas mai overtale cellular endringer, inkludert kromosom aborations, endringer i metabolisme og celle vekst. Severe mycoplasma infections may destroy a cell line or render expensive or precious cell lines useless. Alvorlig mycoplasma infeksjoner mai ødelegge en celle linje eller gjengi dyrt eller edle cellen linjer ubrukelig.

Cell Culture Contamination with Mycoplasma Cell Kultur forurensning med Mycoplasma

Mycoplasmas are often found in research laboratories as contaminants in cell culture. Mycoplasmas er ofte funnet i forskningslaboratorier som forurensninger i celle kultur. Mycoplasmal cell culture contamination occurs due to contamination from individuals or contaminated cell culture medium ingredients. Mycoplasmal celle kultur forurensning oppstår på grunn av forurensning fra enkeltpersoner eller forurensede celle kultur medium ingredienser.

Mycoplasma Detection Methods Mycoplasma Detection Metoder

Mycoplasma cells are usually smaller than 1 µm and therefore quite difficult to detect with conventional microscopy methods. Mycoplasma cellene er som regel mindre enn 1 μ m og derfor ganske vanskelig å oppdage med konvensjonelle microscopy metoder. Detection techniques include: Detection teknikker inkluderer:

• PCR
• Real-time PCR Real-time PCR
• Plating on sensitive Agar Plating på sensitiv Agar
• DNA stains including DAPI or or Hoescht Stain DNA stains inkludert DAPI ut eller Hoescht Stain

Hoechst Stain Mycoplasma Contamination Detection Protocol Hoechst Stain Mycoplasma forurensning Detection Protocol

A Hoechst (Sigma, catalog #:H6024) staining method for Mycoplasma: En Hoechst (Sigma, Catalog #: H6024) flekker metode for Mycoplasma:

1. For Adherent cells, place a sterile cover glass in petri dish. For tilhenger celler, plasserer du en steril frontglass i petri dish. Add 2-3 drops of cell suspension in the middle of coverglass (depending on the growth rate of your cells). Legg til 2-3 dråper celle suspensjon i midten av coverglass (avhengig av vekst av celler).
2. Then carefully add 2-3 ml of medium without disturbing the cells. Deretter nøye legge til 2-3 ml av medium uten å forstyrre cellene. Grow the cells until they are 50 -70% confluent. Auk cellene før de er 50 -70% confluent.

Fixing Cells: Løse Celler:

1. Prepare cell Fixative which is a mix fo 3:1 Methanol : glacial acetic acid (M:AA). Forbered celle bindemiddel som er en blanding av 3:1 Metanol: glacial Eddiksyre (M: AA). Make sure you prepare this fresh before use. Sørg for at du forberede denne friske før bruk.
2. Discard medium from growing cells. Forkast medium fra voksende celler. Add 2 ml of the Methanol : glacial acetic acid M:AA solution dropwise onto the side of the plate (not directly onto the cells). Legg til 2 ml av metanol: glacial Eddiksyre M: AA løsning dropwise på side av platen (ikke direkte på cellene). Swirl the plate and discard solution. Swirl platen og forkaste løsning.
3. Add 2 ml of M:AA, swirl and leave on for 2-3 minutes at room temperature. Legg til 2 ml av M: AA, virvel og la på til 2-3 minutter ved romtemperatur.
4. Discard M: AA solution and rinse with water Forkast M: AA løsning og skyll med vann
5. Leave to air dry (you can keep the plate until you are ready to stain) Hoecht stain (cat# 33258 from Sigma) stock concentration = 0.1 mg/ml in water You can filter sterilize at this stage using a 0.2uM filter Wrap container in aluminium foil Store at 4 oC Working solution Prepare fresh each time as necessary Make 1:1000 dilution (0.1 µg/ml) of stock in water Leave til luft tørke (du kan holde platen før du er klar til å vanære) Hoecht skam (katt # 33258 fra Sigma) lager konsentrasjon = 0,1 mg / ml i vann Du kan filtrere Sterilisér på dette stadium ved hjelp av en 0.2uM filter Bryt beholderen i aluminiumfolie Store på 4 OC Working løsning Forbered frisk hver gang når det er nødvendig Gjør 1:1000 fortynning (0,1 μ g / ml) av lagerbeholdningen i vann

Staining Cells: Flekker celler:

1. Add enough Hoechst stain to cover the entire cover slip (use 1-2ml for a small Petri dish). Legg til nok Hoechst skam å dekke hele dekselet slip (bruk 1-2ml for en liten Petri dish).
2. Leave the stain on for 45 minutes - 1 hour (in the dark). La skam for 45 minutter - 1 time (i mørket).
3. Rinse well with water. Skyll godt med vann.
4. Mount on a microscope slide (mountant mix: 22 mM Citric Acid; 55.6 mM disodium phosphate; 50% glycerol, pH mix to 5.5) place a drop or two on cover slip (cells up) and place cover slip (cells down) on slide. Mount på et mikroskop lysbilde (mountant blanding: 22 mm sitronsyre; 55,6 mm disodium fosfat; 50% glycerol, pH blanding til 5,5) plassere en dråpe eller to på dekke slip (cellene) og sted dekke slip (celler ned) på lysbilde .
5. Visualise under fluorescence microscope Visualise under fluorescens mikroskop

Note: store Hoechst stain at 4oC at least, or aliquot into the freezer for long-term storage. Merk: Store Hoechst skam at 4oC minst, eller aliquot i fryser for langvarig lagring.