De stabiele Protocollen van de Transfectie

AfCS gebruikt antisense technologie om signalerende eiwituitdrukking in RUWE macrophage-als cellenvariëteit te manipuleren 264.7. Dit kan door de transfectie van gen-specifieke antisense oligonucleotides (ASOs) worden bereikt. De volgende procedure impliceert de transfectie van ASOs in RUWE 264.7 cellen gebruikend FuGENE 6 transfectiereagens. Later, transfected geïsoleerdev totale RNA of de proteïne van deze cellen kan worden gebruikt om het niveau van mRNA of eiwitneerhalen te beoordelen, respectievelijk. - [Gelezen Antisense Oligonucleotide Transfectie van RUWE 264.7 Cellen met FuGENE 6 in een 24-put Schotel]

De gepulseerde elektrogebieden kunnen worden gebruikt om DNA in een grote verscheidenheid van dierlijke cellen te introduceren. Electroporation werkt goed met cellenvariëteiten die aan andere technieken, zoals coprecipitation van calcium fosfaat-DNA brekings zijn. Maar zoals met andere transfectiemethodes, moeten de optimale voorwaarden om DNA in onbeproefde cellenvariëteiten electroporating experimenteel worden bepaald. - [Gelezen de Transfectie van DNA door Electroporation]

De cellen van CHO Lec 3.2.8.1 hebben 4 onafhankelijke veranderingen in de glycosylationwegen van N en van O. Wanneer gecultiveerd met alpha--glucosidase I inhibitor n-butyl-Deoxynojirimycin, glycoproteïnen die in de cellen van CHO worden geproduceerd Lec 3.2.8.1 is volledig vatbaar voor de spijsvertering van Endo H. Endo H splijt chitobiose, verlatend één enkele n-Verbonden n-Acetylglucosamine per plaats die voor behoud van eiwitoplosbaarheid en speciale carburator-eiwitinteractie, zoals tussen het eerste n-Acetyl glucosamineresidu en tryp ideaal is. - [Gelezen Onderneming van Stabiele Transfectant van het Protocol van Cellen CHO Lec]

Transfected cellen, die in de eerste twee stadia van de procedure stabiel worden geproduceerd, worden veroorzaakt voor uitdrukking van het doelgen. Na het oogsten en lysis, worden lysates geanalyseerd door SDS-PAGE en immunoblotting. - [Gelezen Tetracycline als Regelgever van Afleidbare Uitdrukking III van het Gen]

Het protocol gebruikt een autoregulatory systeem waarin het transcriptional trans-activator tTA zijn eigen uitdrukking en dat van een doelgen drijft. Het eerste stadium van de procedure beschrijft hoe te om stabiele lijnen van nih-3T3 cellen te produceren die uitdrukkelijk of tTA alleen of tTA en het tetracycline-geregelde doelgen. - [Gelezen Tetracycline als Regelgever van het Afleidbare Protocol van de Uitdrukking van het Gen]

Dit stadium van de procedure beschrijft de transfectie met doelgenen van cellenvariëteiten reeds uitdrukkend afleidbare tTA. In dit voorbeeld, zijn de doelgenen transfected op een plasmide die puromycinweerstand als verkiesbare teller draagt. - [Gelezen Tetracycline als Regelgever van Afleidbaar Protocol II van de Uitdrukking van het Gen]