De Protocollen van de Transfectie van het Fosfaat van het calcium

Deze de transfectiemethode van het calciumfosfaat werkt het best in cellenvariëteiten die 1) hoogst omzetten en) aanhanger zijn 2 (Hela, U2OS, SAOS2, AdAH, npc-KT en verkrijgt uit 20% tot 100% transfectieefficiency afhankelijk van de cellenvariëteit). Werkt goed voor voorbijgaande experimenten maar de voorzorgsmaatregelen zouden in het ontwerp en de interpretatie van experimenten moeten worden gebruikt die op de hieronder bespreking worden gebaseerd. Werkt ook zeer goed voor het produceren van stabiele cellenvariëteiten. Deze methode is vrij gevoelig voor de hoeveelheid inputplasmide. - [Gelezen de Methode van de Transfectie van het Fosfaat van het Calcium]

Dit protocol, is gebaseerd op de venerable methode van Graham en van der Eb (1973). De procedure wordt gebruikt voornamelijk om stabiele lijnen van cellen te produceren die chromosomaal geïntegreerder exemplaren van dragen transfected DNA. - [Gelezen calcium-fosfaat-Bemiddelde Transfectie van Cellen met High-molecular-weight DNA Genomic]

Het fosfaat van het calcium vormt een onoplosbaar precipitaat met DNA, die aan de celoppervlakte vastmaakt en in de cellen door endocytosis genomen. Het protocol wordt gemakkelijk aangepast voor gebruik met andere types van adherent als nonadherent cellen, zowel. Dit protocol is een gewijzigde versie van een methode die door Jordanië et al wordt gepubliceerd. (1996) wie streng op calcium-fosfaat-gebaseerde transfectiemethodes voor de Chinese cellen van de hamstereierstok en lijn 293 van menselijke embryonale niercellen optimaliseerde. - [Gelezen calcium-fosfaat-Bemiddelde Transfectie van Eukaryotic Cellen met Plasmide DNAs]

Dit protocol beschrijft twee transfectiemethodes om gFP-Geëtiketteerdei actin in primaire neuronen uit te drukken. Methode de van de lipidereagens DOTAP (Diagnostiek Roche) veroorzaakt actin-GFP-uitdrukkende hippocampal neuronen die goed tijdens lange periodes in cultuur overleven. De methode van het calciumfosfaat kan aan transfectneuronen worden gebruikt die reeds op coverslips in vitro zijn gegroeid. De cellen van Transfected geschikt voor weergave kunnen in culturen in vitro worden verkregen tot 15 dagen. - [Gelezen Transfecting Gecultiveerde Neuronen Hippocampal met een Plasmide actin-GFP]

Dit protocol beschrijft transfectie van plasmideDNA in primaire hippocampal neuronen gebruikend dNA/calcium-Fosfaat (CaPO4) coprecipitation. Nauwkeurige pH van het transfectiemiddel en de incubatietijd van cellen met het coprecipitaat zijn kritiek voor reproduceerbare en efficiënte transfectie. Zodra deze parameters voor een bepaalde plasmide worden geoptimaliseerd, wordt de methode gemakkelijk aangepast voor transfectie van andere gevestigde cellenvariëteiten. - [Gelezen Transfectie van Neuronen Hippocampal met DNA die van de Plasmide het Fosfaat Coprecipitation gebruikt van het Calcium]