Onthaal aan Moleculaire Post!

U moet registreren alvorens u op onze forums kunt posten of onze geavanceerde eigenschappen gebruiken. Register nu! Zijn Vrij en Snel!

Reeds geregistreerd? Login nu hieronder.

De Naam van de gebruiker:

Wachtwoord:

Herinner me?

Vergat reeds geregistreerd en uw wachtwoord? Klik hieronder om het terug te krijgen.

Krijg Verloren Wachtwoord terug

Treed nu toe - het is snel en vrij!

De moleculaire Post is overal het grootste netwerk van onderzoekers, wetenschappers en wetenschapsminnaars!

De recente Posten van het Forum

Het Huis van Proteomics	De Moleculaire Post van de Protocollen van Proteomic	De Protocollen van Proteomic (externe links)	De Bio-informatica van Proteomic	Proteomic FAQ	De Uitrustingen en de Producten van Proteomic	Het Forum van Proteomic	Proteomics Blog	Boeken op Proteomics	Het Nieuws van Proteomic

De eiwit Technieken van de Identificatie

De proteïnen kunnen door de 2-D Elektroforese van het Gel worden gescheiden en met de Spectrometrie van de Massa worden geïdentificeerdr

Het eiwitgehalte van een cel wordt geschat om uit duizenden verschillende types van proteïnen te bestaan
met een dynamische waaier van uitdrukking. De technologie die momenteel wordt gebruikt impliceert de herwinning van de eiwitcomponenten, opdeling van dit zeer complexe mengsel,
de enzymatische proteolyse van elk scheidde en isoleerde soorten, uitgebreide massa spectrometrische analyse en definitief de aanpassing van de structurele gegevens die tegen een gegevensbestand van bekende proteïnen worden geproduceerd of voorzag de producten van de genoomuitdrukking.
Deze procedure impliceert een eerste stap gebruikend 1 - of dimensionale elektroforese 2 (DE). Gebruikend 1-DE, zijn de proteïnen gescheiden op basis van moleculaire massa; de techniek is reproduceerbaar en kan voor proteïnen in de massawaaier van kDa worden gebruikt 10-300, maar resolutie beperkt.
Voor scheiding van complexere eiwitmengsels, is 2-DE de aangewezen methode. Dit impliceert het scheiden van de proteïnen fi rst volgens hun netto last door een isoelectric concentrerende stap en toen, in de tweede afmeting, volgens hun moleculaire massa aanwendend natrium dodecyl sulfaat-polyacrylamide gelelektroforese (sds-PAGINA) die een hoge scheidingse ffi ciency geeft.
 De spectrometrie van de massa (lidstaten) is de methode van keus voor het identifi kation
van de gescheiden proteïnen, en 2-DE en massaspectrometrie
vertegenwoordig nu een technologie waardoor verscheidene duizend proteïnen kunnen worden gescheiden, ontdekt en identi fi E-D op een geautomatiseerde manier.
De methodologie van Proteomics wordt aanvankelijk door eiwitscheiding en plaats door 2-DE gedaan dat door uitsnijding van de proteïnen van belang wordt gevolgd die dan proteolytic spijsvertering ondergaan om een mengsel van peptide fragmenten op te brengen. Peptides worden geanalyseerd door massaspectrometrie, aanvankelijk gebruikend maldi-lidstaten voor moleculaire massabepaling en generatie van een peptide massa fi ngerprint. Als gegevensbestand het zoeken in dit stadium dubbelzinnige resultaten oplevert, wordt een tweede massa spectrometrische analyse, esi-MS/MS, gebruikt om opeenvolgingsinformatie te produceren die voor het stringentere gegevensbestand zoeken wordt gebruikt.
Van het massaspectrum dat bij de analyse van het eiwitsamenvattingsmengsel wordt verkregen, kan de de peptide massakaart of peptide massa fi ngerprint d.w.z. de moleculaire massa's van de peptide fragmenten, worden nagegaan. Vaak, als de aminozuuropeenvolging ciently unieke su ffi en de massa is
de ciently hoge nauwkeurigheid su ffi, de massakaart kan aan onderzoeksgegevensbestanden 12-15 worden gebruikt om de proteïne zonder de behoefte aan verdere analyses met succes te identificeren. Als, echter, gegevensbestand het zoeken tot dubbelzinnige resultaten leidt, dan worden de verdere analyses van lidstaten, die het gebruik van massaspectrometrie achter elkaar impliceren (MS/MS), uitgevoerd opeenvolgend op elke peptide in het mengsel om een opeenvolging te produceren, of gedeeltelijke opeenvolging, die als een opeenvolgingsmarkering wordt bekend, voor deze peptides. Dit wordt vaak bereikt door het gebruik van esi-MS/MS19 en gewoonlijk moet een extra stap van het purifi kation worden uitgevoerd om peptides van de zouten en de detergentia te scheiden die aanwezig kunnen zijn die vermindering van het peptide signaal veroorzaken.

Verder gegevensbestand dat met de beide moleculaire massa van peptide zoekt
en de informatie van de opeenvolgingsmarkering tot ondubbelzinnig eiwitidentifi kation moeten zou leiden.