De ontdoende van Westelijke Membranen van de Vlek

Het ontdoen van van het membraan is de verwijdering van antilichamen (met inbegrip van primair en secundair) van een westelijk vlekkenmembraan, om de incubatie van nieuwe primaire en secundaire antilichamen voor de analyse van een nieuwe proteïne toe te staan door westelijke te bevlekken.

Agarose de gelelektroforese hoofdzakelijk gebruikt=wordt= in analyse of scheiding van de molecules van DNA en van RNA (hoewel de proteïnen ook op agarose gelen) kunnen worden gescheiden, nochtans staat de scheiding ook de reiniging van specifieke grootte van DNAs na de spijsvertering van het beperkingsenzym toe. Dit wordt gewoonlijk gebruikt in het klonen om besnoeiingsplasmiden te verkrijgen, waarin agarose de gelelektroforese besnoeiingsvectoren van ongesneden degenen scheidt.

Aldus staat het ontdoen van toe:

1. Het hergebruik van westelijke vlekkenmembranen aan analyse voor de uitdrukking van een andere proteïne
2. Aan analyse voor totale proteïne
3. Aan analyse voor de nietphosphorylated proteïne (na het analyseren voor phosphorylated proteïne).

Het ontdoen van vereist speciale buffers en incubatie in een oven.

Gebruikte buffers:

Ontdoende van Buffer

• 62.5 mm tris-HCl (pH 6.8)
• 2% SDS. (voeg ul 280 van bètamerceptoethanol 2 of een definitieve concentratie van 0.1 M 2-Mecaptoethanol) toe.

• voeg 280 μl van bèta-mercaptoethanol 2 per 40 ml het ontdoen van van buffer (aan een definitieve concentratie van 100 mm) toe
• 1. Was membraan in TBST (1 X 5 min)
  2. Broed membraan in het ontdoen van van buffer voor 30 min bij 50-60°C (gebruik een het verwarmen oven voor dit - en houd de gesloten ovendeur wegens geur) uit
  3. Was in TBST (2 X 5 min)
  4. Het membraan van het blok voor 1 h in 5% blokkerende melk
  5. Volg normaal protocol voor het ontwikkelen van westelijke vlekken.