Immunoprecipitation Protocollen	Immunoprecipitation de Folder van het Protocol (externe links)	Los Immunoprecipitation problemen op	Leer over Immunoprecipitation

Eiwit Reiniging

De Moleculaire Post van het auteursrecht 2006

De eiwit reiniging is essentieel in de karakterisering van uw proteïne van belang. De reiniging van uw proteïne staat men toe om de functie van de proteïne, en zijn enzymatische activiteit te bestuderen. De informatie van Stuctural van de proteïne kan ook uit gezuiverde proteïnen met inbegrip van NMR, 3-D informatie zoals eiwitkristallisatie worden verkregen.

Zo hoe gaat één over het zuiveren van een proteïne?

De proteïnen kunnen volgens grootte, oplosbaarheid, Last en Bindende affiniteit worden gezuiverd

De proteïnen kunnen gemakkelijk door elektroforesemethodes worden gevisualiseerd en worden onderscheiden.  De het geltechnieken van theses kunnen ook worden gebruikt om kleine hoeveelheden (microgrammen) gezuiverde polypeptiden te verkrijgen.  Nochtans, verstrekken zij geen grote hoeveelheden gezuiverde proteïnen in hun inheemse staat.  De wezenlijke hoeveelheden gezuiverde proteïnen, van de orde van vele milligrammen, zijn nodig om hun driedimensionele structuur en hun mechanisme van actie volledig nader toe te lichten.  Verscheidene duizend proteïnen zijn gezuiverd in actieve vorm op basis van dergelijke kenmerken zoals grootte, oplosbaarheid, last en specifieke bindende affiniteit.  Bij elke stap in reiniging, wordt de voorbereiding geanalyseerd voor een distinctief bezit van de proteïne van belang (b.v. enzymatische activiteit) om de doeltreffendheid van de procedure te beoordelen.

De proteïnen kunnen van kleine molecules door dialyse door een semipermeabel membraan, zoals cellulosemembraan met poriën worden gescheiden.  De molecules die afmetingen beduidend groter hebben worden dan de poriediameter behouden binnen de dialysezak, steken de de wwhereas kleinere molecules en ionen de poriën van zulk een membraan over en komen in de dialyse buiten de zak te voorschijn.

Meer onderscheidende scheiding op basis van grootte kan door de techniek van gel-filtratie chromatografie worden bereikt.  De steekproef wordt toegepast op de bovenkant van de kolom die uit poreuze parels bestaat die van een onoplosbaar maar hoogst gehydrateerd polymeer zoals dextran of agarose worden gemaakt (die koolhydraten) zijn of polyacrylamide.  Sephadex, Sepharose, en de Biogel zijn algemeen gebruikte commerciële voorbereidingen van deze parels, die typisch 100 micrometers in diameter zijn.  De kleine molecules kunnen deze parels ingaan maar grote degenen kunnen niet.  Het resultaat is dat de kleine molecules zowel in de oplossing in water binnen de parels als tussen hen worden verdeeld, terwijl de grote molecules slechts in de oplossing tussen de parels worden gevestigd.  De grote molecules vloeien sneller door deze kolom en komen eerst te voorschijn, omdat een kleiner volume voor hen toegankelijk is.  Men zou moeten opmerken dat de orde van totstandkoming van molecules van een kolom van poreuze parels het omgekeerde van de orde in gelelektroforese is, waarin een ononderbroken polymeerkader de beweging van grote molecules belemmert.  De veel grotere hoeveelheden proteïne kunnen door de chromatografie van de gelfiltratie dan door gelelektroforese maar aan de prijs van lagere resolutie worden gescheiden.

De oplosbaarheid van de meeste proteïnen wordt verminderd bij hoge zoute concentraties.  Dit effect, genoemd zouten, is zeer nuttig, hoewel niet goed begrepen.  De afhankelijkheid van oplosbaarheid van zoute concentratie verschilt van één proteïne aan een andere.  Vandaar kan het zouten worden gebruikt om proteïnen op te delen.  Het zouten is ook nuttig om verdunde oplossingen van proteïnen te concentreren.

De Moleculaire Post van het auteursrecht 2006