Onthaal aan Moleculaire Post!

U moet registreren alvorens u op onze forums kunt posten of onze geavanceerde eigenschappen gebruiken. Register nu! Zijn Vrij en Snel!

Reeds geregistreerd? Login nu hieronder.

De Naam van de gebruiker:

Wachtwoord:

Herinner me?

Vergat reeds geregistreerd en uw wachtwoord? Klik hieronder om het terug te krijgen.

Krijg Verloren Wachtwoord terug

Treed nu toe - het is snel en vrij!

De moleculaire Post is overal het grootste netwerk van onderzoekers, wetenschappers en wetenschapsminnaars!

De recente Posten van het Forum

 

Eiwit Protocollen

Eiwit Encyclopedie

Eiwit Bio-informatica

Het eiwit Forum van de Wetenschap

Eiwit Blog

Het Nieuws van DNA

 

Eiwit Bepaling door het UVProtocol van de Absorptie

Eiwit Bepaling door het UVProtocol van de Absorptie, (dat van het protocol door Alastair Aitken en Michèle P. Learmonth wordt gewijzigd)

Materialen voor UV EiwitConcentratie

1. 0.1 M K2SO4 (pH 7.0).
het fosfaatbuffer van het 2. 5 mmkalium, pH 7.0.
3. Niet-ionisch detergens (0.01% Brij 35)
4. Guanidinium-HCl.
5. 0.2µm Millipore (Watford, het UK) filter.
6. Uv-zichtbare spectrometer: De waterstoflamp zou voor maximum moeten worden geselecteerd     intensiteit
bij de bijzondere golflengte.
7. Cuvets, kwarts, voor <215 NM.

De eiwit UVMethode van de Concentratie

 Schatting van Proteïne door dichtbij UVAbsorbering (280 NM):

1. Een betrouwbare spectrofotometer is noodzakelijk. De eiwitoplossing moet in worden verdund
buffer aan een concentratie die goed binnen de nauwkeurige waaier van het instrument (zie Nota's 1 en 2) is.

2. De eiwit te meten oplossing kan in een brede waaier van buffers zijn, zodat is het gewoonlijk geen probleem om één te vinden die voor de proteïne die reeds in een bepaalde buffer kan zijn die voor een een reinigingsstap of analyse wordt vereist voor enzymactiviteit, bijvoorbeeld (zie Nota's 3 en 4) aangewezen is.

3. Meet de absorbering van de eiwitoplossing bij 280 NM, gebruikend kwarts cuvets of cuvets die transparant gekend om aan deze golflengte zijn te zijn, die met een volume van oplossing voldoende om de opening te behandelen wordt gevuld waardoor de lichtstraal overgaat.

4. De verkregen waarde zal afhangen van de weglengte van cuvet. Als niet 1 cm, het moet zijn
aangepast door de aangewezen factor. De wet bier-Lambert geeft op dat: A (absorbering) = ε c l waar ε = uitstervencoëfficiënt, c = concentratie in mol/L en l = optische weglengte in cm. Daarom als ε gekend is, geeft de meting van A de concentratie direct, is ε
normaal geciteerd voor een lengte van de 1 cmweg.

5. De daadwerkelijke waarde van UVabsorbering voor een bepaalde proteïne moet door één of andere absolute berekende methode, b.v., van de aminozuursamenstelling worden bepaald, die door aminozuuranalyse kan worden bepaald. De UVabsorbering voor een proteïne wordt dan berekend volgens de volgende formule: A280 (1 mg/ml) = (5690nw + 1280ny + 120nc) /M
waar nw, ny, en nc de aantallen residu's Trp, Tyr, en Cys in het polypeptide van is
massa M en 5690, 1280 en 120 is de respectieve uitstervencoëfficiënten voor deze residu's (zie Nota 5).

Merk ook de EiwitProtocollen van de Concentratie aan andere laboratoria.

Andere EiwitArtikelen:

Het westelijke Huis van de Vlek

Immunoprecipitation Huis

Sds-PAGINA de Elektroforese van het Gel

Eiwit Scheiding

Eiwit Reiniging

Eiwit Identificatie

De recombinante EiwitSystemen van de Uitdrukking

De eiwit Technieken van de Uitdrukking