Bio-informatica, Protocollen, RNA EiwitProteomics van DNA

huis > eiwit-microarrays-eiwit > eiwit-spaander-gehechtheid > index.php

De eiwit Protocollen van de Serie Â	De eiwit Bio-informatica van de Serie	Leer over EiwitSeries	De de eiwit Uitrustingen en Producten van de Serie	Het eiwit Forum van de Serie	Het Nieuws van Proteomic

Eiwit Gehechtheid aan Spaanders Microarray

Proteïne en Antilichaam Microarrays

Verwezenlijking en Vervaardiging van de Spaanders van Microarray van de Proteïne en van het Antilichaam

           

Gehechtheid
            Om proteïnen aan een stevige oppervlakte vast te maken, moet de oppervlakte van het substraat worden gewijzigd om maximumbandcapaciteit (8.27) te bereiken.  De proteïnen zijn in bijlage aan de spaander op een eiwitgehechtheidslaag (zie Figuur 3).  Deze laag is typisch een organische film die met de aard van de toepassing variÃërt.  Een verscheidenheid van materialen zijn bestudeerd met inbegrip van agarose (39), op dextran-gebaseerd hydrogel (40), de poreuze hydrofiele polymeren van het polyacrylamidehydrogel en polyaminozuren (41).
            Een geschikte gehechtheidsmethode gebruikte nitrocellulose-membraan of de poly-l-lysine bedekte glas met een laag dusdanig dat de proteïnen passief op de oppervlakte door niet-specifieke interactie (34.42.43) zouden kunnen worden geabsorbeerd.  De proteïnen in bijlage binden op de oppervlakte in willekeurige richtlijnen en kunnen weg in de stringente wasomstandigheden worden gewassen.  Nochtans, is het geluidsniveau gewoonlijk hoger wegens de niet-specifieke absorptie/de adsorptie. 
            Een specifiekere en sterkere gehechtheid wordt bereikt door reactieve oppervlakten op glas te creëren dat covalent kruisverbinding aan proteïnen (31.36.26) kan.  Een bifunctional silaan dwars-linker wordt gebruikt om zelf-geassembleerde monolayer (SAM) te vormen, die één functionele groep heeft die met de hydroxylgroepen op glas de glasoppervlakte reageert, en een andere groep die met primaire aminegroepen proteïnen kan reageren of verder chemisch kan worden gewijzigd om maximumspecificiteit (44.45) te bereiken.  Een andere variatie is gouden-met een laag bedekt glas (46.47).  Het voordeel van gouden-met een laag bedekte spaanders is dat de spectrometrie van SPR en van de massa als opsporingsmethodes kan worden geïntegreerde om de dynamica van de reactie te controleren, en om de gevangen molecules te identificeren.
            De bovengenoemde covalente het cross-linking benaderingen hebben nochtans een nadeel. wegens het feit dat er reactieve ligands ook in de zijketens van proteïnen bestaan is het mogelijk dat hun willekeurige gehechtheid de inheemse bevestiging van proteïnen veranderen, de activiteit van proteïnen kan verminderen, of hen aan sondes (8.27) ontoegankelijk maken.
            om proteïnen vanaf de oppervlakte van de spaander uniformily te oriënteren kunnen de proteïnen met een hoog-affiniteitmarkering bij hun amino of carboxyeindpunten worden gesmolten.  Met deze methode, zullen de geïmmobiliseerde proteïnen/de antilichamen eerder in hun inheemse bouw blijven, waarbij analytes wordt toegestaan efficiënte toegang tot de actieve plaatsen van de proteïnen.  Deze methode werd eerst met succes met de gehechtheid van 5800 fusieproteïnen aangetoond die een Zijn markering op een nikkel-met een laag bedekt glasplaatje (26) bevatten.  Andere affiniteitmethodes zoals glutathione/GST zijn ook gebruikt (48).
Zijn de Streptavidin gebaseerde immobilisatiemethodes ook wijd aangewend om om het even welk vast te maken biotinylated biologisch element aan de serieoppervlakte (49).
            Het materiaal van de spaandersteun is belangrijk omdat de proteïnen voor fysiochemische eigenschappen hoogst gevoelig zijn.  Bijvoorbeeld, worden de polaire series chemisch behandeld om aan hydrofiele proteïnen te binden nochtans zijn dergelijke oppervlakten ongeschikt voor de proteïnen van het celmembraan (b.v. g-Eiwit gekoppelde receptoren) aangezien zij hydrophobic domeinen (9) bezitten. 
            De proteïnen zich gedragen niet als nucleic zuren, en de verschillende proteïnen zullen zich op verschillende manieren wanneer blootgesteld aan de zelfde oppervlaktechemie gedragen.  De verschillende types zullen een oppervlaktechemie zo het behoud van sommige proteïnen bevorderen en zullen denaturatie of verlies van activiteit van anderen veroorzaken.  Daarom is de juiste keus van oppervlaktechemie belangrijk aangezien dit geïmmobiliseerdez proteïnen van diverse types zal toestaan om hun secundaire en tertiaire structuren, en zo hun biologische activiteit te behouden.  Dit probleem wordt overdreven wanneer het aantal verschillende vlekken op de spaander stijgt, aangezien er 100 verschillende manieren kunnen zijn om 100 verschillende proteïnen te immobiliseren om het juiste vouwen en functie van alle proteïnen te verkrijgen.  Ook is een significant probleem omdat de functies van de meeste proteïnen momenteel onbekend zijn, zodat er geen methode is eigenlijk te testen of zij op spaander (7) nog functioneel zijn.

Daarna: De eiwit Methodes van de Levering van de Spaander

Verwijzingen voor Proteïne en Antilichaam Microarrays

Terug naar:

Inleiding en Achtergrond van EiwitSpaanders en de Spaanders van het Antilichaam.

Types van Antilichaam en EiwitSpaanders