Onthaal aan Moleculaire Post!

U moet registreren alvorens u op onze forums kunt posten of onze geavanceerde eigenschappen gebruiken. Register nu! Zijn Vrij en Snel!

Reeds geregistreerd? Login nu hieronder.

De Naam van de gebruiker:

Wachtwoord:

Herinner me?

Vergat reeds geregistreerd en uw wachtwoord? Klik hieronder om het terug te krijgen.

Krijg Verloren Wachtwoord terug

Treed nu toe - het is snel en vrij!

De moleculaire Post is overal het grootste netwerk van onderzoekers, wetenschappers en wetenschapsminnaars!

De recente Posten van het Forum

FACS

De techniek FACS

De rustende lymfocyten bestaan uit vele functionele sub-bevolkingen, die worden geïdentificeerdo en van elkaar op basis van erfgenaam differentiële uitdrukking van de proteïnen van de celoppervlakte geïdentificeerd, die kan worden ontdekt gebruikend specifieke antilichamen.

Stroom Cytometry

Een krachtig hulpmiddel om lymfocyten te bepalen en te kwantificeren is stroomcytometer, die en individuele cellen telt ontdekt die in een stroom door een laserstraal overgaan. Een stroomcytometer die wordt uitgerust wordt om de geïdentificeerdew cellen te scheiden genoemd een fluorescentie-geactiveerde celsorteerder (FACS). Deze instrumenten worden gebruikt om de eigenschappen van geïdentificeerdet celondergroepen te bestuderen gebruikend monoclonal antilichamen aan cel-oppervlakte proteïnen. De individuele cellen binnen een gemengde bevolking worden eerst door behandeling met specifieke monoclonal antilichamen geëtiketteerde die met fluorescente kleurstoffen worden geëtiketteerde, of door specifieke antilichamen die door geëtiketteerdec anti-immunoglobulinantilichamen worden gevolgd. Het mengsel van geëtiketteerdeh cellen wordt dan gedwongen met een veel argervolume van zout door een pijp, creërend een fijne stroom van vloeistof die cellen bevat die afzonderlijk met intervallen uit elkaar worden geplaatst. Aangezien elke cel door een laserstraal overgaat verspreidt het het laserlicht, en om het even welke kleurstofmolecules verbindend aan de cel zullen worden opgewekt en fluoresceren.

De gevoelige photomultiplier buizen ontdekken zowel het verspreide licht, dat informatie over de grootte als granularity van de cel geven, en de florescenceemissies, die informatie over de band van de geëtiketteerdeo monoclonal antilichamen en daarom op de uitdrukking van cel-oppervlakte proteïnen door elke cel geven. In de celsorteerder, worden de signalen die aan de computer worden teruggegeven gebruikt om een elektrische last te produceren, die van de pijp door de vloeibare stroom in de nauwkeurige tijd wordt overgegaan die de stroom in druppeltjes verdeelt, elk die niet meer dan single cell bevat; de druppeltjes die een last bevatten kunnen dan van de belangrijkste stroom van druppeltjes worden doen afwijken aangezien zij tussen platen van tegenovergestelde last overgaan, zodat de positief geladen druppeltjes worden aangetrokken naar een negatief geladen plaat, en vice versa. Op deze wijze, kunnen de specifieke sub-bevolkingen van cellen, voornaam door de band van het geëtiketteerdee antilichaam, van een gemengde bevolking van cellen worden gezuiverd. Alternatief, om een bevolking van cellen uit te putten, zelfde kan fluorochrome worden gebruikt om verschillende antilichamen te etiketteren die bij tellersproteïnen worden geleid die door de diverse ongewenste celtypes worden uitgedrukt.

Het Sorteren van de cel

De celsorteerder kan aan directe geëtiketteerde cellen aan een afvalkanaal worden gebruikt, dat slechts de cellen behoudt zonder etiket. Wanneer de cellen met één enkel fluorescent antilichaam worden geëtiketteerdt, worden de gegevens van stroomcytometer gewoonlijk getoond in de vorm van een histogram van fluorescentieintensiteit versus celaantallen. Als twee of meer antilichamen worden gebruikt, wordt elk gekoppeld aan verschillende fluorescente kleurstof, dan de gegevens meer gewoonlijk getoond in hij vormt zich van een tweedimensionaal verspreidingsdiagram of als contourdiagram, waar de fluorescentie van één kleurstof-geëtiketteerd antilichaam tegen dat van een seconde, met het resultaat in kaart wordt gebracht dat een bevolking van cellen die met één antilichaam etiketteren verder kan worden onderverdeeld door zijn met het tweede antilichaam te etiketteren. Door grote aantallen cellen te onderzoeken, stroom cytometry kan kwantitatieve gegevens geven over het percentage cellen die verschillende molecules dragen. Aangezien de macht van technologie FACS is gegroeid, progressief kunnen meer antilichamen die met verschillende fluorescente kleurstoffen worden geëtiketteerd tezelfdertijd worden gebruikt.

Drie, vier en zelfs vijf kleurenanalyses kunnen nu door zeer krachtige machines worden behandeld

Protocollen FACS