De sponsor/adverteert & Link met ons & Contacteer ons & Ongeveer ons & Help ons

Moleculaire Biologie Blog

De recente Posten van het Forum

 

De voedende Bacteriële Cultuur van Media

Informatie over de Groei van Bacteriële Culturen die de de Voedende Bouillons van Media en Platen van de Cultuur gebruiken

Inhoudstafel:

De bacteriële Onderwerpen van het Oplossen van problemen en van het Forum van de Cultuur

De verwante Artikelen van de Microbiologie

Sluit me aan bij het Bulletin van de Microbiologie!

 

Wat is de Voedende Definitie van Media?

„Chemisch, als alle andere levende cellen, bestaan de micro-organismen uit organische en anorganische stikstof en minerale zouten; het is daarom noodzakelijk om een micro-organisme te kweken, dat deze drie klassen van substanties, samen met zuurstof ter beschikking worden gesteld, die essentieel aan het leven van alle het leven structuren is. Tot slot is een bepaalde hoeveelheid vochtigheid absoluut noodzakelijk.“ (Besson.)

Een voedsel dat op de groei van micro-organismen wordt voorbereid wordt gegeven het algemene term voedende middel. Een groot aantal micro-organismen zal gemakkelijk in of op gemakkelijk beschikbare voedende media, als melk, bouillon, enz. groeien. Sommige microorgan isms hebben sterk verschillende voedseleisen en behoefte ten aanzien van de groei voedende media die sterk in hun samenstelling verschillen.

Nochtans, zijn er een paar algemene regels die in de voorbereiding van alle voedende media voor het gebruik van micro-organismen moeten worden toegepast. Deze zijn kort, die:

Elk cultuurmiddel moet

1. Bevat substanties noodzakelijk voor de groei.
2. Ben van geschikte reactie.
3. Bevat ben in schepen die zich bescherming tegen verontreiniging van buitenbronnen veroorloven.

Classificatie van Voedende Media

De media van de cultuur kunnen worden geclassificeerd zoals:

I. natuurlijke Media zoals voorkomend in aard, b.v., melk, aardappel en ander groenten, vlees en vleesproducten, bloed en bloedserum, ei, grond, enz.

II. voorbereide media, d.w.z., die in het laboratorium worden gemaakt. Deze zijn:

(a) van onbekende chemische samenstelling; b.v., voedende agar, gelatine, enz.

(6) synthetisch; d.w.z., chemische gekende samenstelling, b.v., oplossing Giltay voor het denitrificeren van organismen.

Of zoals:

I. vloeibare Media. Deze omvatten:

A. media die van dierlijk weefsel en vloeistoffen worden gemaakt, b.v., voedende bouillon, serumbouillon, koolhydraatbouillons, melk, bloed, de oplossing van het nitraatpepton, de oplossing van Dunham.

B. media die van plantaardig weefsel worden gemaakt. Onder deze zijn: Het uittreksel van het mout (ontkiemde gerst), bierwort, gistextract, hooiinfusie, natuurlijke vruchtesappen, wijnen (vergiste vruchtesappen).

C. synthetische media.

II. stevige Media. Deze mav geclassificeerd is zoals:

A. Liquefiable, b.v., voedende agar, voedende gelatine.

B. nietliquefiable, omvattend: 1. De vloeistof van media in een natuurlijke staat maar die, zodra hard gemaakt, door fysieke middelen, b.v., media niet kan worden vloeibaar gemaakt die van eiwithoudende vloeistoffen en weefsels zoals ei, bloedserum, enz., of synthetische media worden voorbereid die met natriumsilicaat hard worden gemaakt.

2. Media die in de natuurlijke staat, b.v., plantaardige media zoals aardappel, wortel, banaan, enz. stevig zijn.

 

 

OEFENING 3. TITRATIE VAN MEDIA

De titratie van bacteriologische media die van vlees worden gemaakt is een belangrijke stap in hun voorbereiding, aangezien de micro-organismen voor de reactie van het voedende substraat gevoelig zijn.

Procedure. De volgende methode wordt gebruikt voor laboratoriummedia, met uitzondering van melk, wort, cider, azijn, vruchtesappen, enz. Zie p. 22.

1. Zet 5 c.c. van het te testen middel en 45 c.c. van gedistilleerd water in een verdampende schotel.

2. Kook levendig één minuut met het constante bewegen (om al opgelost Co2 af te slaan dat als zuurheid registreert).

$. Voeg 1 c.c. phenolphthalein oplossing voor indicator toe.

4. Titreer terwijl heet, bij voorkeur terwijl het koken, met N/20 natriumhydroxyde, of N/20 hydrochloric zuur als geval DE mands. 'Vage maar verschillende permanent nam kleur merkt het eindpunt toe. Deze kleur zou vijf minuten permanent moeten blijven.

5. Verwerk en registreer de reactie van het middel in graden van Volledigere schaal gegevens, die het aantal kubieke centimeters van kubiek normal* zuur of alkaliheden in 1000 is

* Een oplossing schijt normaal wanneer het 1 gram equiv alent van een zuur of een basis in 1 liter bevat.

Een gram gelijkwaardig van een zuur of een basis is dat hoeveelheid die is gelijkwaardig aan of 1 grammolecule van een mono-basic zuur of van een mon-zure basis zal neutraliseren.

Het voordeel van het systeem is dat 1 c.c. van om het even welke normale oplossing precies zal neutraliseren of precies gelijkwaardig aan 1 milligramequiva die van om het even welke zuur of basis wordt geleend zal zijn. (Noyes, Wm. A., Handboek van Chemie, 1913, p. 184.)

TITRATIE VAN MEDIA 21

centimeters van het middel, dat phenolphthalein gebruikt als indicator.

6. De alkalische media worden aangeduid door a minus () teken vóór het aantal graden van alkaliteit te plaatsen; aldus, zouden 15 erop wijzen dat het middel alkalische 15 was, of dat c.c. normaal zuur 15 per liter aan neutrale ize het moet worden toegevoegd.

De zure media worden aangeduid door a plus te plaatsen. (+) teken vóór het aantal graden van zuurheid; aldus, zouden +15 erop wijzen dat het middel zure 15 was of dat 15 c.c. van normaal alkali per liter aan neu moeten worden toegevoegd tralize het.

Voorbeeld.

De lezing van de buret na het titreren van 5.4 c.c.

De lezing van de buret alvorens 2.0 c.c. te titreren.

Vereist aantal van c.c. N/20 NaOH

om het zuur in 5 c.c. van te neutraliseren

middel .4 c.c.

Als 5 c.c. van het middel (dat 1/20 van 100 c.c.) is vereisen

3. 4 c.c. van 1/20 normaal NaOH om zure pres ent, zouden 100 c.c. van het middel 20X3.4 c.c. of 68 c.c. te neutraliseren van 1/20 normaal NaOH vereisen.

Aangezien een normale oplossing 20 keer de sterkte van normale oplossing a1/20 is, zouden 100 c.c. van het middel 1/20 van 68 c.c. of 3.4 c.c. van normaal NaOH voor neutralisatie vereisen; en één liter of 1000 c.c. van middel zou 10X3.4 vereisen

c. c. of NaOH van 34 c.c. N/l voor neutralisatie; d.w.z., is het middel zuur 34. Volledigere schaal. Dit is de liter van het middel.

Wanneer N/20 het zuur of het alkali en een 5 c.c. gedeelte van middel (in 45 c.c. van gedistilleerd water) worden gebruikt, beantwoordt elke 1/10 van 1 c.c. aan 1 Volledigere schaal.

Aanpassing van Reactie. Als het wordt gewenst het middel met a te verlaten, b.v., reactie +15, hebben wij:

22 DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

Zuurheid van het middel

(+34) 3.4 c.c. per 100 c.c. van het middel

Gewenste zuurheid (+15). 1.5 c.c. per 100 c.c. van de middelgrote Hoeveelheid normaal alkali

om 1.9 c.c. per 100 c.c. van het middel worden toegevoegd

of 10X1.9 c.c. NaOH van = 19 c.c. N/l per 1000 c.c. van middel

Aangezien de normale oplossingen van gelijke sterkte door volume zijn, namelijk zal 1 c.c. van zuur N/l enkel 1 c.c. van alkali N/l neutraliseren, zal men gemakkelijk zien dat als NaOH van 15 c.c. N/l wordt vereist om het zuur te neutraliseren huidig in 1 liter van middel, dan er in die liter precies 15 c.c. van zuur aanwezig moeten zijn N/l, of wij zouden moeten zeggen de reactie (+ 15) vijftien graden zuur is. Voor een andere graad van zuurheid voeg genoeg normaal alkali toe om de zuurheid tot het gewenste punt te verminderen.

De reactie van een middel verandert enigszins na zijn neutralisatie, vooral tijdens sterilisatie, maar ook op status daarna bij gewone temperatuur. Deze verandering is naar een verhoogde zuurheid, en is duidelijkst in media rijken in druivesuiker. Bijgevolg is het noodzakelijk om de titer van een middel te bepalen tegelijkertijd het eerder dan wordt gebruikt om cijfers te citeren die vóór sterilisatie worden verkregen.

MELK, CIDER, AZIJN, WORT, EN VRUCHTESAPPEN

Procedure. 1. In een het verdampen schotelmaatregel 5 c.c. van het middel dat, met behulp van geschikte pipet moet worden getest. Maak tot 50 c.c. met gedistilleerd water.

Verwarm niet. De bovengenoemde media zouden niet vóór titratie moeten worden verwarmd, aangezien zij vluchtige zuren of andere organische substanties bevatten die als zuur kunnen registreren en die kunnen worden afgeslagen door te koken,

2. Voeg 1 c.c. phenolphthalein oplossing toe.

3. Voeg, geleidelijk aan, van een nauwkeurige buret, NaOH IN/20 toe tot het eerste permanente roze verschijnt.

4. Neem nota van de hoeveelheid NaOH die voor de titratie wordt vereist.

5. Stel altijd duplicaten in werking.

MELK 23

6. Verslag als graden van zuurheid het aantal van c.c. van NaOH N/l die worden vereist om één liter van middel te neutraliseren.

MELK

De melk is waardevol als voedend middel voor micro-organismen omdat: Het is natuurlijke nutriment en bijna ideaal voor een groot aantal micro-organismen. Zijn samenstelling, averag ing vet 3.40%, caseïne 3.50% en albumen, 4.50% melksuiker, 0.75% verbrandt, water 87.75%, is een bewijsmateriaal dat het voedsel in een uitstekende vorm voor de meeste micro-organismen levert.

De biochemische activiteiten van vele bacteriën openbaren hen absoluut selves in de veranderingen die melken, vooral lakmoesmelk, ondergaat. Veel van deze veranderingen zijn scopically gezien macro. Wat hiervan zijn:

(a) zure Productie. De lactose, C^IfeOn (melksuiker), is eerst omgekeerd, vormt twee hexosemolecules, 1 mol. Druivesuiker en 1 mol. Galactose.

En elke molecule van hexose brengt twee molecules van melkzuur op:

hexose = melkzuur.

C 6 H 12 6 = 2CH 3 CH (OH) COOH.

De blauwe lakmoes is geworden rood.

(b) alkaliProductie. De lakmoes wordt donkerder blauw. Deze verandering zeer begeleidt vaak peptonization.

(c) vermindering (Verkleuring van Lakmoes). Dit is toe te schrijven aan de vermindering van de het kleuren kwestie (lakmoes). Vele micro-organismen scheiden enzymen af die waterstof produceren. De waterstof combineert met de lakmoes, die het vermindert tot zijn (kleurloze) leuco-samenstelling. (Het blauw Methylen wordt kleur minder onder zoals voorwaarden.) dat dit een vermindering is en niet een vernietiging kan worden aangetoond door de verkleurde cultuur met een paar kubieke centimeters van hydrogen te schudden peroxid. De bacteriën die de lakmoes ook verkleuren

24 DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

verminder de waterstof peroxid tot E^O en ontluikende zuurstof die de verminderde lakmoes die opnieuw oxydeert (door reac tion van de melk het type van micro-organismenheden toont). De re oxydatie vindt langzaam in de natuurlijke omstandigheden plaats. De vermindering kan plaatsvinden wanneer de melk zuur, alkalisch of neutraal is.

(d) het stremmen door Zure Productie. De caseïne, zoals de meeste proteïnen, is amfoteer, d.w.z., het is geschikt voor het reageren allebei als zwak zuur en zwakke basis. De anders onoplosbare caseïne wordt gevonden om in de melk in een gedeeltelijk opgeloste (colloïdale) te zijn staat, wegens zijn combinatie met de calciumzouten: het calcium dat vroeger met de caseïne werd gecombineerd, door de productie van zuur door bepaalde micro- organismen, combineert nu met het melkzuur; dientengevolge de caseïneprecipitaten, die het stremmen veroorzaken (coagulatie). Lit mus is gedraaid onmiskenbaar rood. De melk die een zure gestremde melk heeft zal boven +50 titreren.

(e) de Gestremde melk van het stremsel. De coagulatie kan ook plaatsvinden wanneer het middel of slechts slightly^ zuur neutraal is. Dit production van gestremde melk is toe te schrijven aan een stremsel-als enzym dat door micro-organismen wordt, en is gelijkaardig aan de actie van het stremsel dat wordt gebruikt geproduceerd om melk in kaasfabrieken te stremmen.

Vele sporevormende soorten worden gevonden onder de groep stremsel-producerende organismen. De gestremde melk van het stremsel wordt gewoonlijk gevolgd door peptonization.

(/) Peptonization. De gestremde melk die door zuur wordt geproduceerd of ren netto-vormt micro-organismen kan geleidelijk aan verdwijnen, leav ing slechts een wei-als vloeistof. Dit wordt veroorzaakt door bepaalde bacteriën die proteolytic enzymen produceren die de gestremde melk verteren en het oplosbaar maken. Deze vloeibaarmaking van stevige proteins zoals gelatine, fibrin, gekookt eiwit, melkgestremde melk, enz., is toe te schrijven aan twee groepen enzymen, pepsine en trypsine.

De pepsine van het dierlijke lichaam handelt slechts in een zuur middel (heden in de maag).

De trypsine van het dierlijke lichaam handelt slechts in alkalisch middel (heden in de darm).

VOORBEREIDING VAN MELK 25 VAN DE LAKMOES

De pepsinand trypsine-als enzymen die door micro- organismen worden geproduceerd kunnen zo door hun activiteit in een middel van bepaalde reactie worden gescheiden niet; dit variÃërt met de soorten micro-organisme en met milieuvoorwaarden. Tonization van Pep van melk vindt gewoonlijk in een neutrale, lichtjes alkalische, of meer niet vaak lichtjes zure reactie plaats.

Sommige organismen peptoniseren melk zonder een stremselgestremde melk te vormen.

(G) de Productie van het gas. Dit wordt gekenmerkt door voor mation van gasbellen in de melk, en is over het algemeen accom panied door de vorming van zure gestremde melk. Zeer algemeen krimpt de gestremde melk, veroorzakend uitdrijving van wei.

OEFENING 4. VOORBEREIDING VAN DE MELK VAN DE LAKMOES

Apparaten. Verse gescheiden of afgeroomde melk; titra tion apparaten; N/20 NaOH; phenolphthalein (indicator); 5 c.c. pipet; azolitmin, 2% oplossing; vullende trechter; snuifje haan; steriele reageerbuizen; apparaten voor zation van stoomsterili.

Methode. 1. Verse gescheiden of de afgeroomde melk zou moeten worden gebruikt. De volle melk is ongewenst wegens zijn vetgehalte.

2. Titreer en registreer de reactie van de melk. Als de melk boven zuur 17 titreert, moet de reactie aan +15 worden aangepast. Zuur, gestremd of uncurdled melk, na neutralization, maakt tot geen wenselijk voedend middel voor micro-organismen, daarom, melk de waarvan titer boven zuur 20-25 zou moeten worden verworpen is.

De verse melk variÃërt in zuurheid van 12 tot 18. De melk met een zuurheid boven 18 aan phenolphthalein zal geen bevredigende blauwe kleur met azolitmin geven, aangezien bij 18 het begint de zure kleuring te tonen.

3. Voeg 2% van een standaardoplossing van azolitmin van Kahlbaum toe. De lakmoes of azolitmin worden toegevoegd slechts als indicator en zou moeten zijn van voldoende sterkte zo zo niet de melk in enige mate te verdunnen.

26 DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

4. Meng de melk en azolitmin grondig en buis, gebruikend ongeveer 8 c.c. van de lakmoesmelk in elke buis.

Nota. De zorg zou moeten worden genomen om de melk te verhinderen in contact met de bovenkant van de buizen te komen, aangezien het de katoenen vezels om de buis zal veroorzaken aan te hangen. Dit kan door het gebruik van een „het vullen trechter worden vermeden.“

5, steriliseren door in stromende stoom twintig minuten op vier opeenvolgende dagen te verwarmen. De melk is moeilijk om, ten gevolge van de bestand sporen te steriliseren die vaak aanwezig zijn. Als het wordt gewenst een grotere massa dan in buizen te steriliseren, zou de tijd van het verwarmen moeten worden verlengd.

Voorzichtigheid: Het oververhitten neigt om (caramelize) de melksuiker te veranderen. De kleur van azolitmin kan ook worden vernietigd. Deze veranderingen zijn niet wenselijk.

OEFENING 5. VOORBEREIDING VAN DE AARDAPPEL VAN DE GLYCERINE

Een aantal kleurvormende en pathogene organismen bloeien vooral goed op media die glycerine bevatten. De manier waarin de glycerine de groei van dit orgaan isms goedkeurt is niet gekend, maar in sommige gevallen schijnt het om direct voor de bouw van vet worden gebruikt (Bact. Losis van Tubercu).

Apparaten. Grote gezonde aardappels; cilindrisch aardappelmes, of cork boorder; gewoon mes; tuimelschakelaar; natrium auto bonate, 1: oplossing 1000; glycerine, 5% oplossing; grote steriele reageerbuizen, of de aardappelbuizen van Roux; absorberend katoen of korte glasstaaf; 1 c.c. pipet; gedistilleerd water; apparaten voor stoomsterilisatie.

Methode. 1. Maak zorgvuldig één of twee grote aardappels schoon.

2. Met behulp van een cilindrische aardappelmes of cork boorder, besnoeiingscilinders van aardappel, 4 tot 6 cm. Lang en 1.5 tot 1.8 cm. In diameter. Met een gewoon mes, halveer elke cilinder door een diagonale besnoeiing zodat elk stuk in vorm op een agar helling lijkt. Verwijder om het even welke gedeelten van de huid op deze stukken.

3. De plaats in een tuimelschakelaar en doorweekt in verdund (1: 1000) oplossing van natrium carbonate* vierentwintig slechts uren.

* Het carbonaat van het natrium wordt gebruikt om de natuurlijke zuren van de aardappel te neutraliseren.

VOORBEREIDING VAN DE AARDAPPEL VAN DE GLYCERINE

27

4. Breng de stukken naar een 5% oplossing van glycerine in water over voor nog eens vierentwintig slechts uren.

5. Plaats in steriele als volgt voorbereide buizen: Selecteer buitengewoon brede reageerbuizen 1.5 tot 2 cm. In diameter en schoon en droog hen. Plaats een klein stuk van absorberende katoenen of glasstaaf 0.5 cm. X2.5 cm. Op de bodem van elk. De stop met katoen en steriliseert zoals gewoonlijk. (De buizen van Roux moeten slechts worden schoongemaakt en worden gesteriliseerd.)

Alvorens vlak de stukken van aardappel te introduceren, voeg ongeveer 1 c.c. van gedistilleerd water aan elke buis toe, gebruikend pi pette. De aardappel zou niet het water moeten raken.

6. Steriliseer door te verwarmen bij 100 G. op opeenvolgende vier

dagen twintig minuten elke dag.

FIG. 8. De Buizen van de aardappel. (Orig. Northrup.)

Voorzichtigheid: De tijd die in 3 en 4 wordt verklaard moet strikt worden aangehangen, anders zullen de aardappels wegens contamina tion met bestand sporevormende organismen moeten worden verworpen.

VERWIJZING

SMIRNOW, M.R.: De waarde van glycerinated aardappel als cultuurmiddel. Cent. F. Bakt., II Abt., BD. 41, p. 303.

28 DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

OEFENING 6. VOORBEREIDING VAN DE INFUSIE VAN HET VLEES

De infusie van het vlees is de stichting van de gewone voedende media, als bouillon, gelatine en agar, en ook van een groot aantal speciale voedende media, als suikerbouillons, enz.

Onder deze richtingen is de voldoende vleesinfusie pre geknipt om 1 liter van voedende bouillon, gelatine en agar elk te maken.

Apparaten. 1.5 kilogram (3 Ibs.) Fijn gehakt vers mager rundvlees; 1500 c.c. leidingwater; 3.5 liter agateware emmer; grote trechter; rings tribune; schone doek; 1 liter die kop meet; drie steriele flessen van 1 literErlenmeyer; ijskast; apparaten voor stoomsterilisatie (autoclav verkieslijk).

Methode. 1. Aan 1.5 kilogram fijn gehakt, vers mager rundvlees in een 3.5 liter agateware emmer, voeg grondig 1500 c.c. van leidingwater toe, * mengeling en sta om me in een koele plaats (aangewezen ijskast) zestien tot vierentwintig slechts uren te bevinden toe.

2. Zet een grote trechter in een ringstribune op en plaats een stuk van schone doek in de trechter. Plaats een metende kop onder de trechter.

3. Span de vleesinfusie door schone kaasdoek, grondig uit drukkend al sap. 1.5 liter zou moeten worden teruggekregen. Als om het even welk verlies voorkomt maak tot 1500 c.c., gebruikend leidingwater.

Deze resulterende sanguineous vloeistof bevat de oplosbare albumine van het vlees, de oplosbare zouten, de extracten en de kleurende kwestie, voornamelijk hemoglobine.

4. Plaats 500 c.c. van vleesinfusie in elk van drie steriele flessen van 1 literErlenmeyer. Vervang de stoppen, en hitte in autoclav bij 120 C. dertig minuten. Dit is een veiligere procedure dan verwarmend voor een langere tijd in stromende stoom.

Tijdens dit het verwarmen wordt de albumine stolbaar door hitte gestort.

Het is noodzakelijk en ook geschikter gevonden om vleesinfusie voor te bereiden en te steriliseren alvorens met de voorbereiding van de verschillende media te werk te gaan waarin het wordt gebruikt,

* Ongeveer 500 c.c. van water aan elk pond vlees.

VOORBEREIDING VAN VOEDENDE BOUILLON 29

wegens de bestand sporevormende organismen die universeel in het gehakte vlees bijna aanwezig zijn; de economie van tijd ook is een overweging. Tenzij gesteriliseerd immedi ately, ontbindt de vleesinfusie snel ten gevolge van de overvloed en de diversiteit van de micro-flora die tijdens de diverse processen van voorbereiding voor markt wordt verworven.

De infusie die van vers gehakt mager rundvlees wordt gemaakt zal in zuurheid tussen Volledigere schaal +15 en +25 variëren. Als de reactie duidelijk lager of hoger is, vindt de microbiële actie, wat is, plaats of kan zijn, nadelig aan de voedingswaarde van het middel waarin de vleesinfusie wordt gebruikt.

De infusie bevat zeer weinig eiwithoudende kwestie en bestaat voornamelijk uit de oplosbare zouten van de spier, bepaalde extracten, en veranderde het kleuren kwesties samen met lichte sporen van proteïne niet die door hitte zijn gecoaguleerd.

OEFENING 7. VOORBEREIDING VAN VOEDENDE BOUILLON

De voedende bouillon is de standaardvloeistof die voor cul tivating micro-organismen wordt aangewend. Het is praktisch een bouillon con taining pepton. Het pepton, een oplosbare proteïne niet stolbaar door hitte, wordt toegevoegd om de gecoaguleerde eiwithoudende substanties te vervangen die storten wanneer de vleesinfusie wordt gesteriliseerd. Het zout wordt toegevoegd om de plaats van de fosfaten en de carbonaten te nemen, wat waarvan bij het aanpassen van de zuurheid van het middel door natriumhydroxyde worden gestort.

De reactie van gewone voedende media wordt aangepast aan ongeveer +15 met phenolphthalein als indicator, aangezien men vindt dat de meeste micro-organismen het best op middelgrote neutraal of lichtjes alkalisch aan lakmoes groeien.

Wanneer men vereist dat de voedende media duidelijk zijn, ei worden albumen dat tot een vlot deeg met water (of het goed geslagen wit van een ei) wordt verminderd toegevoegd. Door coagulatie, ei verwijdert albumen mechanisch alle kleine deeltjes binnen suspen sion die anders door het filtreerpapier zouden overgaan.

30 DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

Dit proces is langzaam het meest efficiënt wanneer eialbumen coagu lates.

Aangezien eialbumen bij ongeveer 57 C. begint te coaguleren is het absoluut noodzakelijk voor goede resultaten dat het middel aan 40-50 C. vóór de toevoeging van eialbumen wordt gekoeld.

Hoewel eialbumen kleine hoeveelheden sol uble kwestie niet stolbaar door hitte, als suiker, extracten bevat en minerale kwestie, die als microbieel voedsel zal dienen, is zijn doel in voedende media hoofdzakelijk voor zijn clari fying actie.

Apparaten. 500 c.c. steriele vleesinfusie; 500 c.c. leidingwater; 10 gms. Pepton, Witte; 5 gms. Zout; 10 gms. Albumen van het ei (of één ei); 3.5 liter agaat-waren emmer; titratie apparaten; N/20 NaOH; N/l NaOH; phenolphthalein (indicator); gedistilleerd water; 5 c.c. pipet; grote het bewegen staaf; ruwe saldi; grote gasbrander; grote trechter; gevlecht filtreerpapier; vullende trechter; steriele reageerbuizen; steriele 1 literfles; apparaten voor stoomsterilisatie.

Methode. 1. Zet de inhoud van een fles van vleesinfusie (500 c.c.) in een agaatemmer en voeg 500 c.c. van leidingwater toe.

2. Voeg 1% van het pepton van Witte en 0.5% van zout toe.

3. Voeg 10 gms toe. Van eialbumen die goed met 100 c.c. van leidingwater is gemengd. (Gezet ei voegt albumen in een tuimelschakelaar en genoeg water toe om een deeg te vormen. Beweeg tot vlot. Dan voeg het resterende water toe. Één goed geslagen egg* kan grondig gesubstitueerde.) Mengeling allen zijn.

4. Hitte in stromende stoom vijfenveertig minuten of in autoclav bij 120 C. dertig minuten.

5. Titreer met N/20 NaOH.

6. Pas de reactie van het middel aan +15 met normaal NaOH of normale HC1 aan. Retitrate en past opnieuw aan indien nodig.

7. Counterpoise en neemt nota van het gewicht.

8. Kook vijftien minuten die over een vrije vlam, con stantly bewegen.

* Het is niet noodzakelijk om water aan het ei toe te voegen.

GELATINE 31

9. Counterpoise en herstelt om het even welk verlies door verdamping met gedistilleerd water.

10. Filter terwijl koken heet door gevlecht filtreerpapier enkel eerder met 1/2 liter kokend water waste.

11. Ga het filtraat door het zelfde document over tot het helder en duidelijk is.

12. Vul dertig steriele reageerbuizen, gebruikend ongeveer 8 c.c. van dit middel voor elke buis. Zet de resterende bouillon in een grote, steriele fles.

13. Verwarm de reageerbuizen en de inhoud in stromende stoom twintig minuten op drie opeenvolgende dagen.

14. Om een grote fles bouillon te steriliseren, verwarm twintig minuten vier dagen in successie.

GELATINE

De gelatine is één van de hulpmiddelen van de microbioloog. Als dusdanig, dient het twee doeleinden: als stevig cultuurmiddel, dient een technisch apparaat waardoor de isolatie van één enkele soort micro-organisme, en, aan die organismen mogelijk wordt gemaakt die proteolytic enzymen afscheiden, het als stikstofhoudend voedselmateriaal.

De gelatine draagt het onderscheid van het zijn de eerste substantie die voor een stevig cultuurmiddel wordt gebruikt. Dit middel was origi nated in 1882 door Robert Koch en sindsdien heeft hervormd de wetenschap van de microbiologie. Voorafgaand aan de introductie van stevige media, impliceerde de isolatie van één enkele soort micro-organisme veel moeilijkheid en bijna altijd een bepaalde maatregel van onzekerheid. Om van Jordanië te citeren: „Het kan een zuiver toeval zijn niet dat de grote ontdekkingen in bacteriologie die snel op de hielen van deze belangrijke technische verbetering wordt gevolgd, en het misschien niet teveel is om te beweren dat de stijging van bacteriologie van congeries van onvolledig hoewel de belangrijke observaties in de positie van een moderne biologische wetenschap van ongeveer deze periode (1882) zouden moeten worden gedateerd.“

Werden de eerste platen van Koch gemaakt door vloeibaar te gieten

32 DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

voedende gelatine op steriele, vlakke stukken van glas. De student bij vertrouwd het worden zal met de moeilijkheden om bevredigende platen met het gebruik van de „Petrischaal“ pre te knippen die ontmoet met in eerste de gelatineplaten van Koch waarderen.

De gelatine is een proteïne, d.w.z., een stikstofhoudend voedselmateriaal. Het bevat als zijn essentiële elementen koolstof, waterstof, zuurstof, en stikstof (andere elementen, echter, zoals zwavel, fosfor, enz., kunnen aanwezig zijn). Zijn empirische formule volgens Schiitzenberger en Bourgeois is C7eHi24N24O29, maar zulk een formule geeft slechts informatie van de belangrijkste constituenten en staat toe om één of ander idee van de enorme omvang van de molecule te vormen; geen idee van de structuur van de molecule wordt gegeven. Nochtans, door met verdund zwavelachtig zuur te verteren, splitst de gelatine op dezelfde manier als de proteïnen op, die glycin, leucin en andere vettige aminozuren opbrengen.

De gelatine is een dierlijke proteïne, maar doet heet voorkomt als gelatine in de dierlijke weefsels. Het bestaat daar als het collageen van albuminoid dat de belangrijkste stevige constituent van vezelig verbindingsweefsel dat is, maar in kleiner percentage, in kraakbeen, been en ligament ook wordt gevonden. Het collageen uit deze diverse bronnen is niet identiek in samenstelling en de gelatine variÃërt navenant, b.v., gelatine van kraakbeen verschilt van dat van andere bronnen in zoverre dat het een lager percentage van stikstof bevat.

De gelatine, het lichaam als gevolg van de hydrolyse van collageen, is ook albuminoid. (Hofmeister beschouwt deze hydrolyse zoals te werk gaand volgens de vergelijking:

collageen + water = gelatine

maar bij het behandelen van substanties van dergelijke veranderlijke samenstelling,

de empirische formules van deze soort hebben geen grote betekenis).

Commercieel, wordt het voorbereid van bepaalde soorten beenderen

en delen van huid. Deze worden geselecteerd, gewassen en gehaald

GELATINE 33

door water en met een verdund (hydrochloric) zuur, met echt tively wordt weinig blootstelling aan hitte, zodat slechts mogelijk van vloeibare desintegratie de producten van de voorraad en de het op gelei zetten macht van de resulterende oplossing worden gevormd niet vernietigd.

De term gelatine wordt afgeleid uit het Latijnse werkwoord gelare, bevriezen, en vraag om op de belangrijkste attributen van deze substantie te letten, dat van zijn verstevigend of op gelei zettend bezit.

De gelatine behoort tot die interessante klasse van substanties genoemd colloïden. Het is een typisch voorbeeld van de klasse, en stelt de kenmerkende eigenschappen van de klasse tentoon. De colloïden, in duidelijk contrast aan crystalloids, kristalliseren niet, verspreiden niet gemakkelijk en zijn ondoordringbaar aan elkaar. De uiteindelijke deeltjes colloïden zijn veel kleiner dan wat wij doorgaans een fysieke onderverdeling zouden noemen, maar eerder groter dan chemische molecules; de diameter van de kleinste deeltjes in een colloïdale oplossing, b.v., rood colloïdaal goud, die door middel van het ultra-micro- werkingsgebied zijn geteld, is 6 millimicrons of 6 thousandths van een micron. Een micron is één duizendste van een millimeter. (De Bacteriën zijn veel groter, kleinste zichtbaar door middel van de gewone microscoop die van 0.3 tot 1.0 micron in diameter is.) bijgevolg bevinden hun reacties zich halverwege tussen de fysieke en chemische veranderingen van kwestie, zoals kan worden gezien door de eigenschappen van gelatine te overwegen.

De gelatine zal een aanzienlijke hoeveelheid warm water (het is bijna onoplosbaar in koud water) absorberen en zwelt omhoog, opbrengend een gelei die, op toepassing van hitte, op een kleverige, kleverige oplossing smelt die opnieuw op het koelen gelatineert. De naam van hydrogel wordt toegepast op colloïden die dit bezit tonen. De gewone gelatinemedia voor het microbiologische werk bevatten 12% tot 15% gelatine. Wanneer droog bij middelgrote temperatures, kan de gelatine opnieuw worden opnieuw opgelost en redried absoluut in. Van dit bezit wordt het een omkeerbaar colloïde genoemd om het van andere colloïden te onderscheiden die, wanneer hun fysieke staat eens wordt veranderd, b.v., caseïne en siliciumzuur onoplosbaar zijn.

34 DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

Als bij ongeveer 130 C., superdried of oververhitte wanneer in de gelatineachtige staat of voor een korte tijd bij een temperatuur boven 100 C., of lange tijd bij 100 C., zoals in inter mittent sterilisatie, de gelatine zo wordt gewijzigd dat zijn opnieuw oplossende of resolidifying macht respectievelijk wordt verloren. Bij het superdrying, wordt het verlies van het opnieuw oplossende bezit gelegd aan het te dichte contact van de constituerende deeltjes, een verandering in de fysieke staat; in de oververhitte gelatine, is het verlies van de resolidifying macht waarschijnlijk toe te schrijven aan disintegra tion van de gelatinemolecule, een meer zuiver chemisch fenomeen. Dit verlies van het gelatinerende bezit wordt ook veroorzaakt door de enzymatische activiteiten van vele micro-organismen en is ook een desintegratieproces.

De gelatine bezit een vloeibaarmakingspunt dat, echter, aanzienlijk in de verschillende omstandigheden variÃërt. Doorgaans, zullen de media die 12% tot 15% gelatine bevatten vloeibaar maken of zullen bij een temperatuur in de buurt van 24 tot 26 C., ing opnieuw bij 8 tot 10 C. aan een duidelijke, transparante gelei hard maken smelten. Bijgevolg, kunnen de gelatinemedia slechts voor organismen worden aangewend die geen hogere temperatuur dan 22 tot 24 C. voor ontwikkeling vereisen. Het oververhitten tijdens voorbereiding of sterilisatie zal het aanzienlijke verminderen van het vloeibaarmakingspunt veroorzaken, misschien uiteindelijk zo laag dat het middel bij kamertemperatuur vloeibaar zal zijn (20 tot 21 C.) Het zal gemakkelijk gezien worden hoe het laatstgenoemde gelatinemiddel niet handily voor isola tion van organismen kon worden gebruikt. Een paar gegevens zullen in het bevestigen van dit in mening bijwonen.

Het hard makende bezit van gelatine variÃërt in omgekeerd aandeel met de tijd van het verwarmen tijdens het proces van sterilisatie; zijn vloeibaar makend punt wordt verminderd op een gemiddelde van 2 C. voor elk uur van het verwarmen bij 100 C. Dit maakt duidelijk waarom dergelijke zorg in de voorbereiding van een gelatinemiddel, in de verwaarloosbare sterilisatie van dit middel in stromende stoom moet worden genomen, en waarom het directe koelen noodzakelijke aftei is; elke opdeling tijdens zijn voorbereiding.

GELATINE 35

Hoewel de temperaturen boven 100 C. vernietigender zijn aan het hard makende bezit dan dat van 100 C., is het mogelijk om een middel te steriliseren dat 12% tot 15% van gelatine in autoclav bevat (7 tot 8 Ibs. Druk) bij 112 tot 113 C. twintig minuten of bij 15 Ibs. Druk (120 C. vijf minuten) zonder zijn nut als stevig cultuurmiddel te schaden.

Dit gebruik van stoom onder druk (droge stoom) is bijna noodzakelijk in het geval van een gelatinemiddel om sterilization uit te voeren, aangezien de gelatine, van zijn bron, methode van voorbereiding, en recentere aansprakelijkheden aan verontreiniging, bijna bepaald is om op zijn oppervlakte een groot aantal zeer bestand sporen te bevatten of te dragen. Het verwarmen bij 100 C. dertig minuten op drie of zelfs vier of vijf opeenvolgende dagen is niet altijd het efficiënte, aangezien deze sporen niet altijd binnen vierentwintig uren na het verwarmen en ontkiemen, hierboven verwijzen naar de gegevens, het gemakkelijk wordt gezien dat verminderen van het punt van de liquefactie niet als te verwaarlozen tijdens intermitterende sterilisatie moet worden beschouwd.

De gelatine bezit een ander bezit dat het voor het bacteriologische werk waardevol maakt: d.w.z., in de culturen van de gelatineplaat geen water van condensatie doorgaans op de dekking van de Petrischaal (zoals met agar) later op de oppervlakte van de gelatine te laten vallen en zo vormen van kolonies uit te wissen en geïsoleerdea kolonies worden vervuild te veroorzaken om te worden die met naburige degenen verzamelt. Opslaan van dit middel of in reageerbuizen of in platen, steriel of ingeënt, wordt zo gemaakt dan met agar eenvoudiger.

VERWIJZING

VAN DERHEIDE, C.C.: Gelatinose Losungen und Verflussigungspunkt der Nahrgelatine, Boog. F. Hyg., BD. 30, 1897, blz. 82-115.

36 DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

OEFENING 8. VOORBEREIDING VAN VOEDENDE GELATINE

Apparaten. 500 c.c. steriele vleesinfusie; 500 c.c. leidingwater; 150 gms. Gelatine; 10 gms. Pepton, Witte; 5 gms. Zout; 10 gms. Albumen van het ei (of één ei); water - bad; thermometer; 3.5 warenemmer van het literagaat; lange zware het bewegen staaf; titratie apparaten; N/20 NaOH; N/l NaOH; phenolphthalein (indicator); gedistilleerd water; ruwe bal ances; grote gasbrander; grote trechter; gevlecht filtreerpapier; vullende trechter; steriele reageerbuizen; de steriele 500 c.c. flessen van Erlenmeyer; apparaten voor stoomsterilisatie; in werking stellen-water - bad of ijskast.

Methode. 1. Zet de inhoud van een fles van vleesinfusie (500 c.c.) in een agaatemmer en voeg 500 c.c. van leidingwater toe.

2. Voeg 15% gelatine, 1% Witte pepton, en 0.5% zout aan het mengsel toe.

3. Verwarm dit mengsel in een water - bad om de gelatine, pepton en zout op te lossen, nu en dan het het bewegend.

4. Koel aan 40-50 C. Dit is noodzakelijk.

5. Dan voeg 10 gms toe. Van eialbumen die goed met 100 c.c. van leidingwater is gemengd. (Gezet ei voegt albumen in een tuimelschakelaar, genoeg water toe om een deeg te vormen en tot vlot te bewegen; dan voeg het resterende water toe. Één goed geslagen ei kan grondig gesubstitueerde.) Mengeling allen zijn.

6. Hitte in stromende stoom vijfenveertig minuten of in autoclav bij 105 C. dertig minuten.

7. Titreer met N/20 NaOH.

8. Pas de reactie van het middel aan +15 met normaal NaOH of normale HC1 aan. Re titreer en pas opnieuw aan indien nodig.

9. Counterpoise en neemt nota van het gewicht.

10. Kook vijftien minuten die over de vrije vlam, con stantly bewegen.

11. Counterpoise en herstelt om het even welk verlies door verdamping met gedistilleerd water.

12. Filter terwijl koken heet door gevlecht filtreerpapier

AGAR 37

eerder enkel gewassen met 1/2 liter kokend water. Ga het filtraat door het zelfde document over tot het helder en duidelijk is.

13. Vul dertig steriele reageerbuizen, gebruikend ongeveer 8 c.c. van middel voor elke buis. Verdeel de rest in twee gelijke gedeelten en plaats in de steriele flessen van 1/2 literErlenmeyer.

14. Hitte in stromende stoom twintig minuten op drie opeenvolgende dagen.

15. Koel de gelatine in een in werking stellen-water - bad, onmiddellijk na elke het verwarmen. De zorg moet worden genomen om de gelatine te verwarmen zo weinig mogelijk, aangezien een deel van de het hard maken macht van gelatine met elke toepassing van hitte wordt verloren.

16. Om een grote fles voedende gelatine, hitte twintig minuten op vier dagen in successie te steriliseren.

AGAR

Agar of agar-agar (van een Malay woord dat „vege lijst betekent“), de substantie die in het voorbereiden van één soort stevig cultuurmiddel voor het bacteriologische werk wordt gebruikt, zijn een probuis die van diverse zeewieren wordt voorbereid vond dichtbij de Indische Oceaan en in Chinese en Japanse wateren. Dit type van zeewier heeft verscheidene gemeenschappelijke namen, als Ceylon of. Het mos van Jaffna, de vislijm van Bengalen, enz. Diverse soorten worden gebruikt voor voedsel en de handel is aanzienlijk.

Payen, een Franse chemicus - (ongeveer 1859), verkreeg de agar gelei uit het zeewier, Gelidium corneum, op de fol lowing manier: Het zeewier werd toegestaan om wat tijd in een koude verdunde oplossing van hydrochloric zuur te betekenen; het zuur werd verwijderd door meerdere keren met water te spoelen, dan werd het zeewier geplaatst in een koude verdunde oplossing van ammoniak; daarna werd de ammoniak verwijderd door herhaalde met koud water te spoelen. Tijdens dit proces, verloor het zeewier 53% van zijn gewicht in minerale zouten, het kleuren kwestie, en organische constituenten. Het resterende gedeelte werd gekookt in water,

38 DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

tijdens welk proces de plantaardige gelei werd gehaald. De zo verkregen oplossing werd weg gegoten, erachter verlatend het nutteloze sediment. Deze gelei is het zelfde in samenstelling zoals dat bestaand in de plantaardige weefsels; het is niet chemisch veranderd, zoals het collageen in de voorbereiding van gelatine is. Commerciële agar wordt het waarschijnlijkst voorbereid door deze oplossing door verschillende middelen tot ze droog zijn te verdampen.

Agar komt gewoonlijk in de handen van bacteriologist zoals lange, slanke, grayish-witte stroken, of zoals blokken, of meer vooral de laatste jaren, in de vorm van een grijs-witte pow der van Europese vervaardiging.

Agar, in tegenstelling tot gelatine, is een koolhydraat, d.w.z., het bestaat uit een combinatie van koolstof, waterstof en slechts zuurstof. De sporen van stikstof zijn aanwezig als onzuiverheden. De bovengenoemde kwalitatieve besluiten van zijn elementaire constit werden uents opgesteld door Payen, door Parumbaru en door Hueppe, die hun besluiten op agar van verschillende bronnen opstelde. Voor zover het blik wordt nagegaan, is zijn empirische formule nog niet onderzocht in om het even welke mate.

Als gelatine, echter, is agar een omkeerbaar colloïde. Het doorweekt omhoog in koud water, lost in heet water na het lange koken aan een smaakloze en geurloze duidelijke oplossing, en vast lichaam op ifies op het koelen aan een min of meer ondoorzichtige gelei. Zijn waterige oplossing is neutraal of bijna neutraal aan fenolphthalein; nog, volstaan een daling of twee van twintigste normaal natriumhydraat om de roze kleur waarneembaar te maken.

De colloïdale eigenschappen van agar worden niet vernietigd door lang-voortdurende bij op hoge temperatuur te verwarmen, noch door de actie van gewone micro-organismen zoals die van gelatine zijn. De bovengenoemde eigenschappen, echter, worden beïnvloed en kunnen geheel door de reactie van de vloeistof worden geschaad waarin agar wordt opgelost.

De reactie van de vloeistof, d.w.z., of het zuur of alkalisch is, beïnvloedt agar in verband met zijn oplosbaarheid, stevigheid, kleur, transparantie, filtreerbaarheid en hoeveelheid condensa tion water. Als agar in een vloeistof van een zuurheid wordt opgelost

AGAR 39

het equivalent aan 0.1% HC1, agar lost zeer gemakkelijk op, filters snel, het resulterende filtraat dat een lichtgele, transparante, gladde, waterige oplossing is die niet op het koelen hard maakt. Als een kleiner percentage van hydro chloorzuur wordt gebruikt, komt voor de verharding (onder 40 C.) maar de gelei zal niet „“ opstaan en is daarom nutteloos voor agar helling of plaatculturen. Een grote hoeveelheid water van condensation is ook aanwezig.

Als agar in een zwakke alkalische of neutrale bouillon wordt opgelost, wordt een dikke, reddish-brown, kleverige vloeistof verkregen die de filters langzaam en bij 40 C., aan snel een zeer stevige, ondoorzichtige, droge gelei, het hebben maar weinig condensatiewater hard maakt; het behoudt goed zijn vorm in hellingen en in platen. Aldus wordt de waarde van agar als stevig cultuurmiddel opgeheven of volgens cjegree van alkaliteit of zuurheid verminderd.

Het moet worden genoteerd daarnaast, echter, dat wanneer zodra het hard makende bezit van agar door de aanwezigheid van een overmaat van zuur in zijn oplossing wordt vernietigd, dit bezit nooit door neutralisatie met alkali kan worden herwonnen; het zuur per manently vernietigt de omkeerbaarheid van het colloïde.

Het smelten-punt van agar (van 1.5% in neutrale oplossing) is 97 C. en hoewel zijn hard makend punt 40 C. bedraagt, wanneer zodra het hard heeft gemaakt het zal opstaan in de thermostaat bij een temperatuur van 50 C. Voor bacteriologische doeleinden, slechts die de vorm van agar kan worden gebruikt die bij van 38 tot 40 C. Agar vloeibaar blijft wat slechts bij een temperatuur boven dit punt vloeibaar blijft wanneer in een vloeibare staat voor gebruik te heet zou zijn; de vitaliteit van geïntroduceerde organismen door op hoge temperatuur worden geschaad of worden vernietigd.

De moeilijkheden worden ondervonden in de voorbereiding van een stevig cultuurmiddel van agar, wegens zijn langzame oplosbaarheid, vis cosity en voortvloeiende langzame filtreerbaarheid. Zijn oplossing (spijsvertering) wordt uitgevoerd, zoals die hierboven wordt vermeld, door lange in een badwater, stoomsterilisator, autoclav, of over een vrije vlam te verwarmen. De tijdsduur die voor volledige spijsvertering wordt vereist hangt van drie dingen af: De reactie van

40 DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

vloeistof waarin agar, de percenteninhoud van agar wordt opgelost, en de methode om op te lossen. De invloed van de reactie van agar oplossingen is hierboven behandeld. Voor algemeen cultuurgebruik, echter, gewone wordt agar gemaakt tot Volledigere schaal +15 (agar maakt met moeilijkheid boven Volledigere schaal +30 hard).

Één percentsagar is veel meer gemakkelijk oplosbaar in de gelijke omstandigheden dan een hoger percent. Één en het halve percent zijn het bedrag dat in gewone agar media wordt gebruikt, die een enigszins stijvere en zo wenselijkere gelei geven.

Agar wordt verteerd het snelst over een vrije vlam. Als voldoende verwarmd niet, na de filtratie en de sterilisatie van agar door de intermitterende methode, verschijnt een vlokkige precip itate vaak in het eerder duidelijke middel. Dit kan worden gemaakt in de meeste gevallen te verdwijnen door aan de temperatuur van autoclav (120 C. 15 Ibs.) te onderwerpen.

Agar voor cultuurmedia volledig duidelijk moeten zou zijn wanneer vloeistof, en homogeen ondoorzichtig-doorzichtig wanneer vast lichaam; het zou een doorschijnendheid moeten hebben voldoende om diepe kolonies op platen of steekculturen toe te laten om gemakkelijk worden waargenomen; het zou vlokkig materiaal, sediment, of geen stukken van katoen of filtreerpapier moeten bevatten, zoals deze typische kolonieontwikkeling van micro-organismen en, aan onervaren belemmeren, sommige tijden met kolonies kunnen worden verward.

In de eerste methodes die ooit voor het maken van agar cultuurmedia worden gebruikt, in plaats van het filtreren van hete agar door filtreerpapier, absorberend katoen, of asbest, werd het toegestaan om te koelen, dur ing die het sediment verwerken dat aan de bodem wordt geregeld; toen werd het vaste lichaam het sediment afgesneden. Deze methode was niet wenselijk, aangezien de klaarheid van resulterende agar zou afhangen van het tarief om te koelen; het langzamer koelen, vollediger zou de sedimentatie plaatsvinden.

Agar is geen voedsel in het algemeen, voor micro-organismen d.w.z., wordt het niet beïnvloed door de spijsverteringsenzymen van de meeste bacteriën, zoals de gelatine is. Nochtans, zijn een paar bacteriën gekend die de macht van het vloeibaar maken van agar hebben, waaronder B. zijn.

VOORBEREIDING VAN VOEDENDE AGAR 41

gelaticus n. SP. (gran) en Slecht. Nenckii, allebei waarvan, zoals worden verwacht, in overzees water worden gevonden. Deze compara tive traagheid van agar maakt het voor de voorbereiding, van stevige synthetische media waardevol, de waarde waarvan Engels kan zijn hanced door commerciële agar aan natuurlijke gisting te onderwerpen tijdens welk proces om het even welke sporen van substanties van het resultaat de bekwame voedsel door de aanwezige micro-organismen worden uitgeput. (Beijerinck.)

Agar is van speciaal gebruik in het bacteriologische werk waarin de cultuur van micro-organismen bij een temperatuur boven het smelten-punt van gelatine moet worden geleid. Deze eigenschap heeft de grote passen mogelijk gemaakt die in medische bacteriologie zijn genomen, aangezien vele pathogene bacteriën kunnen slechts met moeilijkheid bij tempera tures onder dat van het lichaam worden geïsoleerdh en worden gekweekt.

VERWIJZINGEN

SMITH, ERWIN F.: Bacteriën met betrekking tot de Ziekten van de Installatie. Volume. I,

blz. 31-36. Verscheidene illustraties. SCHULTZ, N.K.: Zur Frage von der Bereitung einiger Nahrsubstrate.

Cent. F. Bakt. I. Orig., BD. 10, 1891, p. 57.

OEFENING 9. VOORBEREIDING VAN VOEDENDE AGAR

Apparaten. 3.5 liter agaat-waren emmer; 15 gms. Agar; 10 gms. Pepton; 5 gms. Zout; 10 gms. Albumen van het ei (of één ei); 500 c.c. steriele vleesinfusie; 500 c.c. leidingwater; titratie apparaten; N/20 NaOH; N/l NaOH; fenol phthalein (indicator); gedistilleerd water; grote trechter; gevlecht filtreerpapier; vullende trechter; steriele reageerbuizen; steriele literfles; ruwe saldi; grote gasbrander; 1 liter die kop meet; apparaten voor stoomsterilisatie.

Methode. 1. In een plaats 15 van de 3 warenemmer van het literagaat gms. Van agar in 500 c.c. van leidingwater.

2. Was agar die goed, de stukjes en squeez ing het scheidt door de handen.

3. Hevel het vuile water over, dat het gegoten bedrag meet

42

DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

van; vervang met de zelfde hoeveelheid schoon leidingwater.

Herhaal.

4. Los over een vrije vlam op en kook vijf minuten, die constant bewegen. Solu tion moet volledig vrij van stukken van agar zijn.

5. Voeg 1% Witte pepton en 0.5% zout aan kokende agar toe.

6. Aan 500 voegt c.c. van vlees in fusie 10 gms toe. Van ei bumen al wat goed met 100 c.c. van leidingwater is gemengd. (Gezet ei voegt albumen in een tuimelschakelaar en genoeg water toe om een deeg te vormen. Beweeg tot vlot en voeg dan toe ing water blijf. Één ei; goed geslagen,

FIG. 9. De Trechter van het hete Water voor kan gesubstitueerde.) Mengeling zijn al Filtrerende Agar of de Gelatine. Grondig

7. Giet langzaam het gesmolten agar mengsel in de vleesinfusie, die constant beweegt. Hitte in autoclav bij 120 C. vijfenveertig minuten of voor een uur in stromende stoom.

Nota. De tijd voor dit het verwarmen kan aan voordeel worden verlengd, maar nooit worden verkort. Als agar niet voldoende vóór filtratie is verwarmd, zal een vlokkig precipitaat zich in de buizen op het verwarmen in stromende stoom vormen. In de meeste gevallen kan dit worden veroorzaakt om door voor een korte tijd in autoclav te verwarmen bij 15 Ibs te verdwijnen.

8. Titreer met N/20 NaOH.

9. Pas de reactie van het middel aan +15 met normaal NaOH of normale HC1 aan. Retitrate en past indien nodig de reactie weer aan.

10. Counterpoise en neemt nota van het gewicht.

11. Kook vijftien minuten die over een vrije vlam, con stantly bewegen,

OPLOSSING 43 VAN HET PEPTON VAN DUNHAM

12. Counterpoise en compenseert om het even welk verlies in gewicht met kokend gedistilleerd water.

13. Koken van de filter heet door gevlecht filtreerpapier waste enkel eerder met kokend water. Ga het filtraat door het zelfde document tot duidelijk over.

14. Vul 60 tot 70 steriele reageerbuizen, gebruikend ongeveer 8 c.c. van het middel voor elke buis.

15. Hitte in stromende stoom twintig minuten op drie suc cessive dagen.

16. Aan het eind van het definitieve verwarmen, plaats de buizen van agar in een geneigde positie hard te maken (sta niet het middel toe om de stop te raken) zodat een grote oppervlakte sented voor de cultuur van micro-organismen pre is. Deze worden genoemd agar hellingen.

Nota. Als agar de buizen slechts voor agar hellingen moeten worden gebruikt, is minder van het middel nodig in de buis dan wanneer zij voor plateren moeten worden gebruikt.

17. Om een grote fles van agar, hitte dertig minuten op vier opeenvolgende dagen te steriliseren.