De sponsor/adverteert & Link met ons & Contacteer ons & Ongeveer ons & Help ons

Moleculaire Biologie Blog

De recente Posten van het Forum

 

Agar de Bacteriële Cultuur van Platen

Informatie over de Groei van Bacteriële Culturen die Agar de Platen van de Cultuur gebruiken

Inhoudstafel:

Agar de Onderwerpen van het Oplossen van problemen en van het Forum van de Media van de Plaat en Agar

De verwante Artikelen van de Microbiologie

Sluit me aan bij het Bulletin van de Microbiologie!

 

Wat is Agar - Definitie?

Agar of agar-agar (van een Malay woord dat „groente betekent“), de substantie die in het voorbereiden van één soort stevig cultuurmiddel voor het bacteriologische werk wordt gebruikt, zijn een probuis die van diverse zeewieren wordt voorbereid vond dichtbij de Indische Oceaan en in Chinese en Japanse wateren. Dit type van zeewier heeft verscheidene gemeenschappelijke namen, aangezien het mos Ceylon of Jaffna, de vislijm van Bengalen, enz. Diverse soorten voor voedsel worden gebruikt en de handel aanzienlijk is.

Achtergrond en Geschiedenis op de Microbiologie die Agar Voedende Bouillon en Platen gebruikt

Payen, een Franse chemicus - (ongeveer 1859), verkreeg de agar gelei uit het zeewier, Gelidium corneum, op de volgende manier: Het zeewier werd toegestaan om wat tijd in een koude verdunde oplossing van hydrochloric zuur te betekenen; het zuur werd verwijderd door meerdere keren met water te spoelen, dan werd het zeewier geplaatst in een koude verdunde oplossing van ammoniak; daarna werd de ammoniak verwijderd door herhaalde met koud water te spoelen. Tijdens dit proces, verloor het zeewier 53% van zijn gewicht in minerale zouten, het kleuren kwestie, en organische constituenten. Het resterende gedeelte werd gekookt in water, tijdens welk proces de plantaardige gelei werd gehaald. De zo verkregen oplossing werd weg gegoten, erachter verlatend het nutteloze sediment. Deze gelei is het zelfde in samenstelling zoals dat bestaand in de plantaardige weefsels; het is niet chemisch veranderd, zoals het collageen in de voorbereiding van gelatine is. Commerciële agar wordt het waarschijnlijkst voorbereid door deze oplossing door verschillende middelen tot ze droog zijn te verdampen.

Agar komt gewoonlijk in de handen van bacteriologist zoals lange, slanke, grayish-witte stroken, of zoals blokken, of meer vooral de laatste jaren, in de vorm van een grijs-witte pow der van Europese vervaardiging.

Agar, in tegenstelling tot gelatine, is een koolhydraat, d.w.z., het bestaat uit een combinatie van koolstof, waterstof en slechts zuurstof. De sporen van stikstof zijn aanwezig als onzuiverheden. De bovengenoemde kwalitatieve besluiten van zijn elementaire constit werden uents opgesteld door Payen, door Parumbaru en door Hueppe, die hun besluiten op agar van verschillende bronnen opstelde. Voor zover het blik wordt nagegaan, is zijn empirische formule nog niet onderzocht in om het even welke mate.

Als gelatine, echter, is agar een omkeerbaar colloïde. Het doorweekt omhoog in koud water, lost in heet water na het lange koken aan een smaakloze en geurloze duidelijke oplossing, en vast lichaam op ifies op het koelen aan een min of meer ondoorzichtige gelei. Zijn waterige oplossing is neutraal of bijna neutraal aan fenolphthalein; nog, volstaan een daling of twee van twintigste normaal natriumhydraat om de roze kleur waarneembaar te maken.

De colloïdale eigenschappen van agar worden niet vernietigd door lang-voortdurende bij op hoge temperatuur te verwarmen, noch door de actie van gewone micro-organismen zoals die van gelatine zijn. De bovengenoemde eigenschappen, echter, worden beïnvloed en kunnen geheel door de reactie van de vloeistof worden geschaad waarin agar wordt opgelost.

De reactie van de vloeistof, d.w.z., of het zuur of alkalisch is, beïnvloedt agar in verband met zijn oplosbaarheid, stevigheid, kleur, transparantie, filtreerbaarheid en hoeveelheid condensa tion water. Als agar in een vloeistof van een zuurheid gelijkwaardig aan 0.1% HC1 wordt opgelost, zeer gemakkelijk op lost agar, filters snel, het resulterende filtraat dat een lichtgele, transparante, gladde, waterige oplossing is die niet op het koelen hard maakt. Als een kleiner percentage van hydro chloorzuur wordt gebruikt, komt voor de verharding (onder 40 C.) maar de gelei zal niet „“ opstaan en is daarom nutteloos voor agar helling of plaatculturen. Een grote hoeveelheid water van condensation is ook aanwezig.

Als agar in een zwakke alkalische of neutrale bouillon wordt opgelost, wordt een dikke, reddish-brown, kleverige vloeistof verkregen die de filters langzaam en bij 40 C., aan snel een zeer stevige, ondoorzichtige, droge gelei, het hebben maar weinig condensatiewater hard maakt; het behoudt goed zijn vorm in hellingen en in platen. Aldus wordt de waarde van agar als stevig cultuurmiddel opgeheven of volgens cjegree van alkaliteit of zuurheid verminderd.

Het moet worden genoteerd daarnaast, echter, dat wanneer zodra het hard makende bezit van agar door de aanwezigheid van een overmaat van zuur in zijn oplossing wordt vernietigd, dit bezit nooit door neutralisatie met alkali kan worden herwonnen; het zuur per manently vernietigt de omkeerbaarheid van het colloïde.

Het smelten-punt van agar (van 1.5% in neutrale oplossing) is 97 C. en hoewel zijn hard makend punt 40 C. bedraagt, wanneer zodra het hard heeft gemaakt het zal opstaan in de thermostaat bij een temperatuur van 50 C. Voor bacteriologische doeleinden, slechts die de vorm van agar kan worden gebruikt die bij van 38 tot 40 C. Agar vloeibaar blijft wat slechts bij een temperatuur boven dit punt vloeibaar blijft wanneer in een vloeibare staat voor gebruik te heet zou zijn; de vitaliteit van geïntroduceerde organismen door op hoge temperatuur worden geschaad of worden vernietigd.

Voordelen en Nadelen als Agar als Voedende Media

De moeilijkheden worden ondervonden in de voorbereiding van een stevig cultuurmiddel van agar, wegens zijn langzame oplosbaarheid, viscositeit en voortvloeiende langzame filtreerbaarheid. Zijn oplossing (spijsvertering) wordt uitgevoerd, zoals die hierboven wordt vermeld, door lange in een badwater, stoomsterilisator, autoclav, of over een vrije vlam te verwarmen. De tijdsduur die voor volledige spijsvertering wordt vereist hangt van drie dingen af: De reactie van de vloeistof waarin agar, de percenteninhoud van agar wordt opgelost, en de methode om op te lossen. De invloed van de reactie van agar oplossingen is hierboven behandeld. Voor algemeen cultuurgebruik, echter, gewone wordt agar gemaakt tot Volledigere schaal +15 (agar maakt met moeilijkheid boven Volledigere schaal +30 hard).

Één percentsagar is veel meer gemakkelijk oplosbaar in de gelijke omstandigheden dan een hoger percent. Één en het halve percent zijn het bedrag dat in gewone agar media wordt gebruikt, die een enigszins stijvere en zo wenselijkere gelei geven.

Agar wordt verteerd het snelst over een vrije vlam. Als voldoende verwarmd niet, na de filtratie en de sterilisatie van agar door de intermitterende methode, verschijnt een vlokkige precip itate vaak in het eerder duidelijke middel. Dit kan worden gemaakt in de meeste gevallen te verdwijnen door aan de temperatuur van autoclav (120 C. 15 Ibs.) te onderwerpen.

Agar voor cultuurmedia volledig duidelijk moeten zou zijn wanneer vloeistof, en homogeen ondoorzichtig-doorzichtig wanneer vast lichaam; het zou een doorschijnendheid moeten hebben voldoende om diepe kolonies op platen of steekculturen toe te laten om gemakkelijk worden waargenomen; het zou vlokkig materiaal, sediment, of geen stukken van katoen of filtreerpapier moeten bevatten, zoals deze typische kolonieontwikkeling van micro-organismen en, aan onervaren belemmeren, sommige tijden met kolonies kunnen worden verward.

In de eerste methodes die ooit voor het maken van agar cultuurmedia worden gebruikt, in plaats van het filtreren van hete agar door filtreerpapier, absorberend katoen, of asbest, werd het toegestaan om te koelen, tijdens welk proces het sediment aan de bodem regelde; toen werd het vaste lichaam het sediment afgesneden. Deze methode was niet wenselijk, aangezien de klaarheid van resulterende agar zou afhangen van het tarief om te koelen; het langzamer koelen, vollediger zou de sedimentatie plaatsvinden.

 

Agar is geen voedsel in het algemeen, voor micro-organismen d.w.z., wordt het niet beïnvloed door de spijsverteringsenzymen van de meeste bacteriën, zoals de gelatine is. Nochtans, zijn een paar bacteriën gekend die de macht van het vloeibaar maken van agar hebben, waaronder gelaticus n. SP van B. zijn. (gran) en Slecht. Nenckii, allebei waarvan, zoals worden verwacht, in overzees water worden gevonden. Deze compara tive traagheid van agar maakt het voor de voorbereiding, van stevige synthetische media waardevol, de waarde waarvan Engels kan zijn hanced door commerciële agar aan natuurlijke gisting te onderwerpen tijdens welk proces om het even welke sporen van substanties van het resultaat de bekwame voedsel door de aanwezige micro-organismen worden uitgeput. (Beijerinck.)

Agar is van speciaal gebruik in het bacteriologische werk waarin de cultuur van micro-organismen bij een temperatuur boven het smelten-punt van gelatine moet worden geleid. Deze eigenschap heeft de grote passen mogelijk gemaakt die in medische bacteriologie zijn genomen, aangezien vele pathogene bacteriën kunnen slechts met moeilijkheid bij tempera tures onder dat van het lichaam worden geïsoleerdh en worden gekweekt.

 

 

OEFENING 9. VOORBEREIDING VAN VOEDENDE AGAR

Apparaten. 3.5 liter agaat-waren emmer; 15 gms. Agar; 10 gms. Pepton; 5 gms. Zout; 10 gms. Albumen van het ei (of één ei); 500 c.c. steriele vleesinfusie; 500 c.c. leidingwater; titratie apparaten; N/20 NaOH; N/l NaOH; fenol phthalein (indicator); gedistilleerd water; grote trechter; gevlecht filtreerpapier; vullende trechter; steriele reageerbuizen; steriele literfles; ruwe saldi; grote gasbrander; 1 liter die kop meet; apparaten voor stoomsterilisatie.

Methode. 1. In een plaats 15 van de 3 warenemmer van het literagaat gms. Van agar in 500 c.c. van leidingwater.

2. Was agar die goed, de stukjes en squeez ing het scheidt door de handen.

3. Hevel het vuile water over, dat het gegoten bedrag meet

42

DE ALGEMENE MICROBIOLOGIE

van; vervang met de zelfde hoeveelheid schoon leidingwater.

Herhaal.

4. Los over een vrije vlam op en kook vijf minuten, die constant bewegen. Solu tion moet volledig vrij van stukken van agar zijn.

5. Voeg 1% Witte pepton en 0.5% zout aan kokende agar toe.

6. Aan 500 voegt c.c. van vlees in fusie 10 gms toe. Van ei bumen al wat goed met 100 c.c. van leidingwater is gemengd. (Gezet ei voegt albumen in een tuimelschakelaar en genoeg water toe om een deeg te vormen. Beweeg tot vlot en voeg dan toe ing water blijf. Één ei; goed geslagen,

FIG. 9. De Trechter van het hete Water voor kan gesubstitueerde.) Mengeling zijn al Filtrerende Agar of de Gelatine. Grondig

7. Giet langzaam het gesmolten agar mengsel in de vleesinfusie, die constant beweegt. Hitte in autoclav bij 120 C. vijfenveertig minuten of voor een uur in stromende stoom.

Nota. De tijd voor dit het verwarmen kan aan voordeel worden verlengd, maar nooit worden verkort. Als agar niet voldoende vóór filtratie is verwarmd, zal een vlokkig precipitaat zich in de buizen op het verwarmen in stromende stoom vormen. In de meeste gevallen kan dit worden veroorzaakt om door voor een korte tijd in autoclav te verwarmen bij 15 Ibs te verdwijnen.

8. Titreer met N/20 NaOH.

9. Pas de reactie van het middel aan +15 met normaal NaOH of normale HC1 aan. Retitrate en past indien nodig de reactie weer aan.

10. Counterpoise en neemt nota van het gewicht.

11. Kook vijftien minuten die over een vrije vlam, con stantly bewegen,

OPLOSSING 43 VAN HET PEPTON VAN DUNHAM

12. Counterpoise en compenseert om het even welk verlies in gewicht met kokend gedistilleerd water.

13. Koken van de filter heet door gevlecht filtreerpapier waste enkel eerder met kokend water. Ga het filtraat door het zelfde document tot duidelijk over.

14. Vul 60 tot 70 steriele reageerbuizen, gebruikend ongeveer 8 c.c. van het middel voor elke buis.

15. Hitte in stromende stoom twintig minuten op drie suc cessive dagen.

16. Aan het eind van het definitieve verwarmen, plaats de buizen van agar in een geneigde positie hard te maken (sta niet het middel toe om de stop te raken) zodat een grote oppervlakte sented voor de cultuur van micro-organismen pre is. Deze worden genoemd agar hellingen.

Nota. Als agar de buizen slechts voor agar hellingen moeten worden gebruikt, is minder van het middel nodig in de buis dan wanneer zij voor plateren moeten worden gebruikt.

17. Om een grote fles van agar, hitte dertig minuten op vier opeenvolgende dagen te steriliseren.

 

 

 

Verwijzingen voor Agar Bacteriële Cultuur

SMITH, ERWIN F.: Bacteriën met betrekking tot de Ziekten van de Installatie. Volume. I,

blz. 31-36. Verscheidene illustraties. SCHULTZ, N.K.: Zur Frage von der Bereitung einiger Nahrsubstrate.

Cent. F. Bakt. I. Orig., BD. 10, 1891, p. 57.