Lysis van de cel het Protocol van de Methode

Lysis van de cel of de cellulaire verstoring zijn een methode van de celbiologie voor de versie van biologische molecules met inbegrip van organellen, proteïnen, DNA, RNA en lipiden van binnenuit een cel.

Voor de meeste cellen, is de milde osmose gewoonlijk genoeg aan lyze de cellen. Dit wordt gedaan door de Ionische sterkte van de omringende oplossing te verminderen, ertoe brengend de cellen om te zwellen en uitbarsting vrijgevend hun inhoud.

Milde surfactans worden vaak gebruikt naast mechanische lysis methodes.

De mechanische of Fysieke Lysis Methodes omvatten:

• mechanische agitatie
• druk
• sonication
• stikstof bom of lysis van de stikstofuitbarsting methode
• ultrasone klank met kleine sondes

Deze stappen worden geleid om volledig te verzekeren van de cel en zijn cellulaire componenten met inbegrip van analyse van organellar en kernmembranen scheid.

wegens de hoge kosten om cellen te kweken, gewoonlijk slechts is een kleine hoeveelheid cellulair materiaal beschikbaar. Het is zo noodzakelijk efficiënt te zijn wanneer het lysing van cellen te verzekeren het maximum van bruikbaar materiaal wordt verkregen. Vaak, worden verscheidene methodes gebruikt in combinatie om bijna volledige lysis te verzekeren.

Lysis van de cel is essentieel voor de extractie van DNA, RNA en Proteïnen van cellen. Daarom is het nodig in de meeste technieken van de celbiologie en zelfs moleculaire biologietechnieken.

Lysis van de cel is beperkt in zijn gebruik aangezien het vereist het celmembraan worden doordrongen en cel dat inhoud die de moet worden vrijgegeven. Deze lysed cellen sterven en kunnen opnieuw worden gecultiveerd of niet worden gekweekt.

Er zijn vele factoren om te overwegen welke cellysis methode aan gebruik of hoe te om het te leiden.

Volume van Cellen

De hoeveelheid lyse cellen is een belangrijke parameter in cellysis. Als u slechts zeer hebt

Als slechts een paar microliters van steekproef beschikbaar zijn, moet de zorg worden genomen om verlies te minimaliseren en kruisbesmetting te vermijden.

De verstoring van cellen, wanneer honderden of zelfs duizenden liter materiaal in een productiemilieu worden verwerkt, geeft blijk van een verschillende uitdaging. De productie, de efficiency, en de reproduceerbaarheid zijn zeer belangrijke factoren.

Aantal Steekproeven van de Cel aan Lyze

Vaak er zijn vele celsteekproeven aan lyze. Er zijn vele kwesties om te overwegen wanneer het doen van deze omvattende dwarsverontreiniging van steekproeven, de snelheid van verwerking, en apparatuur het schoonmaken na elke steekproef lysed.

Moeilijkheid van Cellen aan Lyze

Sommige cellen zijn vrij moeilijk lyse. Aangezien de lysis moeilijkheid stijgt, worden een grotere lysis kracht of een hogere Ionische sterkte van buffers vereist om de cellen efficiënt te onderbreken.

Voor moeilijkere lysis van celsteekproeven zoals giststeekproeven, is er een steile verhoging van de de vereiste verwerkingscapaciteit, tijd en de kosten.

Voor de moeilijkste steekproeven aan lyze, zoals bacteriële sporen, vereisen deze mechanische krachten die met chemische of enzymatische inspanningen worden gecombineerd. Het probleem is zelfs met veelvoudige en ruwere methodes, gewoonlijk bereikt één beperkte verstoringsefficiency.

Efficiency van Lysis van de Cel

Afhankelijk van welk deel van de cel, het organel of de fractie u moet isoleren, over-lysis uw gewenst product kan beïnvloeden.

Als subcellular opdeling wordt gebruikt, is het belangrijker om gevoelige lysis te hebben om een intacte subcellular organelcomponenten te bereiken. Duidelijk, zult u een lagere efficiency van lysis bereiken en zult zo meer cellen vereisen. Om deze cellysis te schrapen processesses, worden de tijd om de cellen te onderbreken en de reproduceerbaarheid van de methode belangrijkere factoren.

Lysis van de cel versus Te isoleren Molecule

Het is zeer belangrijk om zich de lysis methode op de proteïne te richten u geïsoleerdc wenst. Als het een kernproteïne is, wordt de zorg vereist lyse eerst de cel en dan het kernmembraan isoleren. Nadat het kernmembraan wordt geïsoleerd, dan kan lyse het kernmembraan en de molecule van belang vrijgeven. Deze methodologie vermindert de verontreiniging van molecules die van andere cellulaire compartimenten/organellen zijn.

Voorts afhankelijk van de molecule moet de zorg aan gebruik worden genomen gebruikt of niet bepaalde lysis oplossingen of methodes. Bijvoorbeeld, als u probeert om een fosfoproteïne te isoleren die voor phosphatases gevoelig is, is het geen goed idee lyse en de fosfoproteïne bloot te stellen aan duizenden proteasen en phosphatase enzymen. Beschermen van uw molecule tegen ruwe of enzymatische voorwaarden is belangrijk. De temperatuur (lage temperatuur van lysis), en het gebruik van remmende molecules (zoals protease en phosphatase inhibitors) zijn belangrijk in deze lysis gevallen.