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세포 Transfection

이 Transfection 사이트는 DNA 플라스미드 선그림을 가진 세포, RNA siRNA 또는 RNAi, 또는 재조합형 단백질의 transfection와 관련있는 모든 것을 위한 문이다. 우리는 세포 transfection를 모든 백그라운드 정보를 궁극적인 전문가가 되기 위하여, 프로토콜, 최적화와 분석 단계 및 세포 transfection 문제해결 정보 제공한다!

Transfection 목차

Transfection는 무엇인가?

Transfection는 바이러스 선그림을 사용하여 진핵 세포로 외국 물자의 소개 또는 이동의 다른 수단을 기술한다.

transfection

 

비 바이러스성 방법을 위한 기간 transfection는 균류 조류 및 플랜트와 같은 박테리아 그리고 non-animal 진핵 세포에 있는 비 바이러스성 DNA 이동을 기술하는 위하여 기간 전이는 선호되는 그러나, 포유류 세포와 관련하여 자주 사용한다.

동물성 세포의 Transfection는 전형적으로, 세포 원형질막에서 일시적인 숨구멍 또는 "물자의 통풍관을 허용하기 위하여 구멍"를 여는 포함한다. 유전 물질 (supercoiled 플라스미드 DNA 또는 siRNA 구조물과 같은) 또는 항체와 같은 단백질은 transfected 수 있다. electroporation 이외에, transfection는 물자에 양이온 세포 원형질막으로 융합하고 그들의 화물을 안쪽으로 예금하는 리포솜을 생성하기 위하여 지질을 섞어서 실행될 수 있다.

transfection의 원래의 뜻은 감염의 결과로 세포로 "전이에 의하여 감염", 진핵생물 바이러스 살균소에서 DNA (RNA)의 i.e 소개, 이었다. 기간 전이에는 동물성 세포 생물학 (문화에 있는 유전 변경 장기 번식, 또는 암세포의 전형 속성의 취득에 있는 다른 감이 허용) 있었기 때문에, 기간 transfection는, 동물성 세포를 위해, DNA의 소개에 기인한 세포 속성에 있는 변경의 그것의 존재하는 의미를 취득했다.

Transfection는 실험적인 DNA가 경작한 포유류 세포로 끼워넣을 수 있는 방법이다. 그 같은 실험은 일반적으로 DNA가 표현될 것이라는 점을 시험하기 위하여 코딩 순서와 통제 지구 (발기인, etc.)를 포함하는 복제된 DNA를 사용하여 실행된다. 복제하기 DNA가 (예를 들면, 발기인에 단백질 의무 사이트는 바꾸이거나 제거될 수 있다) 광대하게 변경되기 수 있기 때문에, transfection는 특정한 수정이 유전자의 기능에 영향을 미친ㄴ다는 것을 시험하기 위하여 자주 사용한다.

Transfection 도표:

Transfection 응용

실험실에 있는 RNA를 종합하는 기능은 많은 기술에 중대하다. 방사선과 비 방사선 RNA 조사는 많은 프로토콜을 위해 요구되고, 소규모 생체외 녹음방송 반응에서 쉽게 종합될 수 있어 오점 교잡과 nuclease 보호 분석실험에 있는 그들의 사용을 허용한.

 

Transfection를 위한 필요조건?

  • 선그림 또는 DNA
  • 세포
  • Transfection 시약

낙관 Transfection

생체외 녹음방송은 발기인, ribonucleotide 3인산염, DTT와 마그네슘을 포함하는 버퍼 시스템을 포함하는 순화한 선형 DNA 템플렛을 요구한다

사용할 것일 어느 Transfection 시약?

생체외 녹음방송은 발기인, ribonucleotide 3인산염, DTT와 마그네슘을 포함하는 버퍼 시스템을 포함하는 순화한 선형 DNA 템플렛을 요구한다

Transfection 방법

진핵 세포로 외국 DNA 소개의 각종 방법이 있다. 많은 물자는 3개의 종류로 분할될 수 있는 transfection를 위해 운반대로 이용되었다: (양이온) 중합체, 리포솜 및 nanoparticles.

가장 싼 (와 가장 작은 믿을 수 있는 원래 1973년에 F.L. Graham와 A.J. van der Eb에 의해 발견된 칼슘 인산염 옆에) 방법의 한개 transfection, 이다 [필요로 하는 표창장] ([1] 또한 보십시오). 인산염 이온을 포함하는 HEPES 부드럽게 된 염분 해결책 (HeBS)는 transfected DNA를 포함하는 칼슘 염화물 해결책과 결합된다. 2개가 결합될 경우, 플러스로 충전된 칼슘 및 마이너스로 충전된 인산염의 정밀한 침전물은 형성해, 그것의 표면에 transfected DNA를 묶는. 침전물의 현탁액은 transfected 세포에 그 때 추가된다 (일반적으로 단층에서 증가되는 세포 배양). 완전히 이해된 프로세스에 의하여, 세포는 침전물의, 그리고 그것에 몇몇을, DNA 채택한다.

다른 방법은 높게 분기한 DNA를 묶고 세포로 얻기 위하여 유기화합물, 소위 dendrimers를, 이용한다. 아주 능률 방법은 리포솜, i.e 여러가지로 세포의 구조와 유사하 세포막으로 실제로 융합할 수 있는 세포로 DNA를 풀어 놓는 작은, 막 도약한 바디에서 transfected DNA의 포함 이다. 진핵 세포를 위해, 지질 양이온은 근거한 transfection 전형적으로 세포가 더 과민하기 때문에, 이용된다.

또 다른 방법은 DEAE 덱스트런 polyethylenimine와 같은 양이온 중합체의 사용이다. 마이너스로 충전된 DNA는 polycation에 묶고 복합물은 endocytosis를 통해 세포에 의해 채택된다.

transfection에 직접 접근은 DNA가 표적 세포의 핵으로 그 때 직접 "쏘이는" 비활성 고체 (일반적으로 금)의 nanoparticle에 결합되는 유전자 전자총이다. DNA는 또한 운반대로 바이러스를 사용하여 세포로 소개될 수 있다. 그러한 경우에, 기술은 바이러스성 변환에게 불리고, 세포는 변환시켜 흔히 말한다.

transfection의 다른 방법은 Lipofectamine와 같은 nucleofection, electroporation, 열 충격, magnetofection 및 소유 transfection 시약 Dojindo Hilymax, Fugene, jetPEI, Effectene 또는 DreamFect 포함한다.

 

안정 대 일시적인 Transfection 방법

transfection의 대부분의 응용을 위해, transfected 유전자가 단지 일시적으로 표현되는 경우에 충분하다. transfection 프로세스에서 소개되기 DNA가 일반적으로 핵 게놈으로 삽입되지 않기 때문에, 외국 DNA는 후기에서 세포가 유사분열을 겪을 때 분실된다. transfected 유전자는 세포 및 그것의 딸 세포의 게놈에서 실제로 다는 것을 요구되는 경우에, 안정되어 있는 transfection는 생겨야 한다.

이것을 달성하기 위하여, 또 다른 유전자는 세포에게 약간 선택 이점을 주는 특정 독소로 저항과 같은 CO transfected이다. 몇몇은 (아주 몇몇)의 transfected 세포 그들의 게놈으로, 우연히, 외국 유전 물질을 삽입할 것이다. CO transfected 유전자가 저항을 제안하는, 독소가 세포 배양에 그 때 추가되는 경우에, 그들의 게놈으로 삽입된 외국 유전자를 가진 그 몇몇 세포만 증식할 수 있을 것이다, 다른 세포는 정지하는 그러나. 이 선택 압력을 얼마 동안 가하기 후에, 안정되어 있는 transfection를서만 가진 세포는 남아 있고 더 경작될 수 있다.

안정되어 있는 transfection를 위한 일반적인 에이전트는 Geneticin, 네오마이신 저항하는 유전자의 제품에 의해 중화될 수 있는 독소인 일컬어 G418이다.

 

 

사용할 것일 어느 Transfection 시약 또는 방법?

생체외 녹음방송은 발기인, ribonucleotide 3인산염, DTT와 마그네슘을 포함하는 버퍼 시스템을 포함하는 순화한 선형 DNA 템플렛을 요구한다

 

Transfection를 위한 팁

  • 사용 RNAse 억제물 항상!
  • T7 RNA 살균소 폴리메라이제를 가진 저축 돈: N 맨끝을 가진 복제품은 그 6의 꼬리표 유효하다. 이 복제품을 얻는 경우에, 높은 활동 (ref를 가진 다량의 T7 폴리메라이제를 순화할 수 있다: 그 B, Rong M, Lyakhov D, Gartenstein H, Diaz G, Castagna R 의 McAllister 무게, Durbin RK. 단백질 Expr Purif. 1997년, 9, 142-151).
  • DNA 템플렛을 제거하기 위하여는, RNAse 자유로운 DNAse를 이용하십시오. 우리는 15 분 동안 추가된 RQ1 DNase (Promega)를 이용하고 잘 작동한다. 

Trasfection 시약 저장

  • RNA는 EDTA를 가진 중립 PH에 잘 저장된다.
  • TE 버퍼는 이것이 자유롭게 순화된 RNAse로 준비되어야 한다 그러나, (10 mM Tris HCl, PH 7.5, 1개 mM EDTA) 추천된다 (preferablly 소동공 물).

분쟁 해결 Transfection 문제

고장나는 Transfections

원인은 다음을 포함한다:
  • 오래된 transfection 시약
  • 부적당하게 저장된 transfection 에이전트
  • 열등 DNA 또는 선그림
  • 부족한 DNA 총계
  • 부족한 transfection 시약
  • 너무 많은 DNA
  • 너무 많은 transfection 시약
 

Transfection에 참고

Transfection에 참고

  1. Bacchetti S, Graham F (1977년). "순화된 포진 심플렉스 바이러스성 DNA에 의하여 티미딘 키니아제 불충분한 인간 세포에 티미딘 키니아제를 위한 유전자의 이동". Proc 국제적인 Acad Sci 미국 74 (4): 1590-4년. PMID 193108.

 

 

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