세포가 합칠 60%의 때 첫번째 siRNA 처리를 적용하십시오 (전압계를 가진 측정 confluency); 금요일 의 수요일에 transfect에 1.5x10^6 세포를 도금하십시오. 각각을 위해 우물:
2.5 ug siRNA 묽게 하십시오 (20uM는 대략 0.26ug/ul이다. 100 ul의 마지막 양에 배양기를 가진 6-well 격판덮개의 잘 당 9.62 ul). 사용 방벽 피펫은 기울인다. 모든 우물이 동일한 siRNA로 transfected 경우에 주된 혼합을 만들 수 있다. 메마른 압력가마로 소독한 플라스틱 관에서 이것을 하십시오.
siRNA mastermix 관 당 12 ul RNAiFect를 (Qiagen는 - 또는 다른 어떤 RNA transfection 시약, 제조자의 프로토콜을 본다) 추가하고 온화하게 섞으십시오.
siRNA와 지질 사이 복잡한 대형을 허용하기 위하여 실내 온도에 15 분 동안 알을 품으십시오.
세포에서 매체를 발음하고 각각에 900ul 신선한 매체를 잘 추가하십시오.
siRNA 혼합물을 (우물 당 112 ul) 동안 온화하게 소용돌이치는 격판덮개 drop-wise 추가한.
두번째 siRNA 처리를 상기 설명된 단계 뒤에 나오, 나중에 2 일 적용하십시오. 두번째 transfection는 관심사의 유전자의 감소 표정에 추가할 것이다.
