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과학자에의해 하는 가장 현저한 발견은 과학 자체 이다. ~GerardPiel
Immunoprecipitation은 해결책에서 그 단백질을 제거하기 위하여 단백질에 명확한 항체를 이용하는 기술 이다. 항체 단백질 복합물은 항체 의무적인 단백질의 불용해성 양식의 추가에 해결책에서 침전시킨다. 보기는 해결책에 단백질A, 단백질G, 제 2 항체의Zysorbin,Immunoprecipitin, 또는 추가를 포함한다 (도표 1을 아래에 보십시요).
견본은 강수와 원심 분리다음에 그때 세척될 수 있는다. 침전물은 단백질 견본 버퍼에SDS-PAGE젤에 그때 달릴 수 있는다. 흔하게 단백질 견본은 세포 세포의 용해보다 전에 방사선 이다. 이것은 흔하게 세포에 방사선 아미노산을 추가해서 한다. 반점으로 젤에 달리는 때 단백질이 필름에 그때 쉽 방출하고는 방사능을 드러내는 필름을 검출되는 때 것이 이것에 의하여 간단한 시킨다. 너는 단백질의 크기 (기준을 치수를 재는 비교에 분자량안에), 및 양을 위해 그때 사정할 수 있는다 (에 대우된 견본을 또는 양의 기준 비교해서).
서쪽 오점을 사용하여 검출하기 더욱, 임믄옵r엊입XXXX이온 절차는 또한 아주 풍부하지 않으나 곤란하지 않는 단백질의 농도를 허용한다. 세포lysates의 큰 양을 가지고 가고는, 서쪽 오점 분석 또는 다른 방법을 위해 그때 이용할 수 있는 작은 침전물으로 관심사의 너의 단백질을 집중하는 수 있는 때IP은10,000접힌다 단백질을까지 집중할 수 있는다.
1) 분자량 그리고 양의 결심은의SDS-PAGE에의한 단백질을immunoprecipitated.
2)Immunoprecipitation은 단백질 단백질 상호 작용을 위해 사정하기 위하여 이용된다. 이것은 1개의 단백질을 위해 임믄옵r엊입XXXX이온, 그리고 다른 단백질을 위해 그때 더럽혀서 한다.
3) 소요 시간 명확한동안에 하는 양 방사선 단백질을 결정해서 세포안에 단백질의 종합의 비율의 정량화.
검출하기 4)Immunoprecipitation은 다르게 곤란한 단백질의 농도에 가능하게 한다.
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Immunoprecipitation은 의정서를 작성한다
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Immunoprecipitation프로토콜 디렉토리 (외부 링크)
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Immunoprecipitation을 수리하십시요 |
Immunoprecipitation에 관하여 배우십시요 |
임믄옵r엊입XXXX이온IP의 응용의지하고 있는, 너는 다를 세포의 용해 버퍼를 이용하고 싶을 것이다. 세포의 용해 버퍼의 선택은 중요하 관심사의 단백질의 특성에 의존한다.
단백질 단백질 단백질 상호 작용의 인산화를 공부하고 싶으십시요, 너는Np-40을 해봐야 한다.
너가 단백질의 총계 단백질 수준을 공부하면, 너는RIPA을 해봐야 한다.
RIPA버퍼는 임믄옵r엊입XXXX이온안에 더 낮은 배경을 준다. 그런데,RIPA은 몇몇 단백질을 변성시킬 수 있는다. 너가 지휘하면protein:protein상호 작용을 혼란시키는 수 있는 때 단백질 단백질 상호 작용,RIPA을 공부하기 위하여 임믄옵r엊입XXXX이온은 사용되면 안된다 실험한다.
NP-40버퍼에는 더 낮은deanturing수준이 있고, 키니아제 활동을 보기같은 인산화 실험을 위해 이렇게 사용된다. 또한NP-40은 단백질 단백질 상호 작용을 위해 사용된다. NP40은 비이온성 세제 이고, 임믄옵r엊입XXXX이온과 서쪽 오점을 위해 세포 세포의 용해 버퍼안에 일반적으로 이용한 세제 이다.
세포lysate안에 일반적인 단백질의 총계를 낮추기 때문에preclear단계는 임믄옵r엊입XXXX이온을 위해 흔하게 행해졌. 게다가 또는 항체 의무적인 단백질의 것은 모두가 불용해성 양식이라고 너가 접는 식에 너의 항체를 이용하고 있다, 전 개간은 또한 단백질A의 단백질 G,Immunoprecipitin, Zysorbin을 위해 가능한 일반적인 상호 작용 그리고 높은 친화력이 있을 수 있는 단백질에는 제거한다. 몇몇 연구원은 이 단계를 불필요한 발견하고 이 단계를 건너뛴다. 너가 임믄옵r엊입XXXX이온을 해볼 첫번째로 시험 전 개간. 너의 결과가 확실히 명확하면, 전 개간 다음 실험을 건너뛴 해보고 끄는 까 라고 보십시요.
너는 어느 항체를 임믄옵r엊입XXXX이온을 위해 이용해야 하는가? 흔하게Polyclonal항체는immunoprecipation을 위해 이용한다.
항체 항원 복합물은 불용해성이 아니다 저절로,ie임믄옵r엊입XXXX이온, 완전한 아이디어가 아니다 이지 않는다. 항원에 항체 그리고 그들의 바인딩은 혈액, 버퍼안에, 그리고 임믄옵r엊입XXXX이온 실험동안에 녹는다. 이 복합물에서 침전시키는 이용되는 무엇이 불용해성 항체 의무적인 단백질 이다. 단백질A과G은 박테리아에서, 고립시키고, 항체의 일정한 지구에 묶는다.
불용해성 항체 의무적인 단백질의 보기는 아래와 같는다 임믄옵r엊입XXXX이온안에 복합물을 침전시켰었다:
너가IP다음에 분석하고 싶을 것을의지하고 있는 복합물을 세척함것은RIPA,PBS을 사용하여 하고, 다른 버퍼를ip세척한다. PBS이 보다 적게 엄격해도 이지만RIPA버퍼는 더 엄격하다.
Immunoprecipitation성공은 그것의 항원을 위해 항체의 친화력에 의존한다. 너가IP다음에 다른 기술을 사용하여 견본을 분석할 경우 좋을 임믄옵r엊입XXXX이온 항체는 너에게 낮을 배경을 줄 것이다. 이용하는 불용해성 항체 묶는 단백질은 또한 아주 중요하다. Polyclonal항체는 그런데 순화한 단일 클론항체를 이용하는 제일 항체 또한 사용될 수 있는다 이다. 너의 단일 클론항체가 임믄옵r엊입XXXX이온을 위해 시험되면 보기 위하여 너의 항체 납품업자를 검사하십시요.
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| 07-07-200808:46PM | 3 | 1220년 | |
| 01-01-200811:35PM | 1 | 498 | |
| 12-22-200603:07PM | 7 | 1968년 | |
| 07-17-200708:15PM | 1 | 686 | |
| 07-17-200708:08PM | 3 | 908 | |
| 01-22-200811:03있 | 0 | 566 | |
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