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그들이 눈 멀면 보기 위하여 연구는 골목높은 쪽으로 가기의 프로세스 이다. ~Marston화
1. 시약: 분석실험 시약은95%에타놀의50ml안에Coomassie파란G250의 100 마그네슘을 녹에서 한다. 해결책은85%인산의 100ml에 그때 섞고 1개L에 증류수에 변상된다. 시약은Whatman제 1 여과지를 통해서 거르, 실내 온도에 호박색 병안에 그때 저장되어야 한다. 그것은 몇 주를 위해 안정되어 있는다. 그런데, 이 시간동안에 해결책에서 침전시키고 저장한 시약은 사용의 앞에 걸러야 한다.
2. 단백질 기준. 둔감한 γ- 증류수안에 1mg/mL(XXr오았애을 위해 100킽/mL)의 농도에 글로불린은 모액으로 이용한다. 이것은20oC에 얼어 저장되어야 –한다. 단단한 단백질의 수분 함유량이 저장동안에 변화하기 수 있기 때문에, 표준 해결책안에 단백질의 정확한 농도는280nm에 그것의 흡수도에서 결의가 굳어야 한다. 1개의mg/mL해결책의 흡수도의 γ- 글로불린은, 1 1-cm 가벼운 경로안에,1.35년 이다. 2개의 양자택일 단백질 기준, 둔감한 혈청 알부민 및 오v알b음인을 위해 해당 가치는,0.66과0.75, 각각으로 이다.
3. 분석실험안에 이용하는 플라스틱과 유리 그릇은 절대로 청결하다 및 세제 이어야 자유롭게 한다. 염료가 이 물자에 묶기 때문에, 석영 (실리카) 분광 광도계 큐벳은 사용되면 안된다. 유리 그릇 플라스틱에 염료 경계의 자취는 메탄올 또는 제정성 해결책에 헹궈서 제거될 수 있는다.
1. 시험관으로 100개의킠총계 양안에 단백질의 10과 100킽사이에 피펫으로 옮기십시요. 대략 견본 농도가 불명하면, 희석 (1,1:10년,1:100,1:1000)의 범위를 분석하십시요. 각 견본의 등본을 준비하십시요.
2. 보정 곡선를 위해, 1mg/mL의 10,20,40,60,80, 및 100킠의 이중 양을 - γ시험관으로 글로불린 표준 해결책 피펫으로 옮기고, 각자에게 100개 종사하고를 증류수에킠만들십시요. 시약 공백을 제공하기 위하여 더 관으로 증류수의 100킠을 피펫으로 옮기십시요.
3. 단백질 시약의 5ml을 각 관에 추가하고 역환에 의하여 잘 섞으나vortexmixing을 길들이십시요. 거품이 일n 기피하십시요, 가난할 재현성에 지도할 것이다.
4. 섞기다음에 2 분과 1개의h사이 시약 공백향하여 견본 및 기준의A595을 측정하십시요. 100개의킽기준은 대략0.4의A595가치를 줘야 한다. 표준 곡선은 선형이 아니고 이고지 않, 정확한 흡수도는 분석실험 시약의 나이의지하고 있는 변화한다. 분석실험의 각 세트를 위해 보정 곡선을 건설하는것은 필연적으로, 근본적 이다.
Microassay방법은 분석실험의 이 양식 단백질에 더 과민하다. 불명한 단백질의 총계가 제한될 때 필연적으로, 유용하다 (또한 주 9)을 보십시요. 1. 1.5ml폴리에틸렌microfuge관으로 100킠의 총계 양안에 1과 10킽사이에 포함하는 이중 견본을 피펫으로 옮기십시요. 대략 견본 농도가 불명하면, 희석 (1,1:10년,1:100,1:1000)의 범위를 분석하십시요.
2. 보정 곡선를 위해, 100킽/mL의 10,20,40,60,80, 및 100킠의 이중 양을 - γmicrofuge관으로 글로불린 표준 해결책 피펫으로 옮기고, 근해에 100킠에 양을 맞추십시요. 시약 공백을 위해 관으로 증류수의 100킠을 피펫으로 옮기십시요.
3. 단백질 시약의 1ml을 각 관에 추가하고 온후하고, 그러나 철저하게 섞으십시요.
4. 단백질 시약의 추가다음에 2의 그리고60분사이 각 견본의 흡수도를 측정하십시요. 10킽을 포함하는 견본의A595가치 γ- 글로불린은0.45이다.
또한 보십시요: Bradford단백질 분석실험
NicholasJ.Kruger에의해 프로토콜에서 변경하는.
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