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단백질Microarray검출 방법과 분석

단백질과 항체Microarrays

단백질과 항체 칩 을 위해 검출 방법 그리고 분석

검출 방법과 일반적인 바인딩
            배열에 일반적인 바인딩은 극소화된것을 필요로 하고 이것은 둔감한 혈청 알부민 기초를 둔 버퍼 (BSA)안에 배열을 (31) 가라앉혀서 전형적으로 한다.
            단백질 배열에 분석물 묶음 그리고 보유는 조사에 핵산 표적의 교잡에 유사한 열역학으로 몰n 의무 기계장치경유 진행한다. 그런데, 단백질에 행이는 표적의 탐지는DNAmicroarray탐지 (9)의 저것보다는 상당하게 더 복잡하다. 현재 다양한 검출 방법은 시험되고 있다. 예를 들면 필터 모두 배열 (66,67) 및 유리 배열 (68)을 위해 단백질을 검출하기 위하여,ELISA은 첫째로 이용되었다. ELISA에 의하여 기초를 두는 검출 방법에는 많은 틀린 확실성에 지도하는 단백질 항체 상호 작용의 무 특이성의 불리가 있는다.   방사성 동위원소 레테르를 붙임것은Ge그 외 여러분에의해 사용되었다. (22), 단백질 단백질, 단백질DNA–, 필터 배열–에 단백질 약–상호 작용을 공부하기 위하여 레테르를 붙이는 방사성 동위원소. 주 그 외 여러분. 배열 (36)에 순화된 효모 키니아제 단백질을 사용해서 다른 기질의 키니아제 분석실험을 지휘하기 위하여 레테르를 붙이는 이용한 방사성 동위원소. 이 방법이 일반적으로 안전하기 때문에 탐지의 좋아한 방법은 형광 탐지, 극단적으로 과민하고, 간단하다 이고 그리고 아주 고해상을 있을 수 있는다. 이 검출 방법은 표준microarray스캐너에 또한 양립하다. 일반적으로, 칩은 직접적으로fluorescently레테르를 붙인 친화력 시약 (예를들면streptavidin)을 사용하여 제 2 단계안에 그때 (16,56) 검출될 수 있는 형광성 분자 (표를 붙인 조사 (예를들면 비타민b복합체를 사용해)에서 예를들면fluorescently레테르를 붙인 단백질 또는 작은 분자, 시험되는 어느 쪽이든 이다. 다른 형광성 레테르를 붙이는 방법은 또한 극단적으로 과민한 회전 원형 확대 (RCA) 이다, (32).
            비교의 밑에proteomes이fluorophores에 대등한 유행안에 레테르를 붙여 수 있어도, 이 화학 반응의 재현성은 단백질 항체 상호 작용 현재에 가난하다 방해 추가 복합성 (9) 이다. 또한, 단백질의 비균일에게 레테르를 붙임것은 곳에 내부 기준이 (9) 측정하는 각 표적 단백질을 위해 출석하는 이중 색깔ratiometric분석실험을 실행해서 연설될 수 있는다.          레이블의 합동이 (9) 단백질의 바인드 재산을 바꾸기 수 있기 때문에,fluorophores에 레테르를 붙이는 단백질의 불리는 분석실험의 양이 많은 정확도의 감소 이다.

직접적인 단백질 레테르를 붙여 검출 방법이 아직도 널리 써도, 언급되는 본질적인 문제는 단백질microarrays을 위해 레이블 자유롭게 검출 방법의 증가 사용안에 유래했다. 이 방법은 질량 분석 (Ms), 원자 힘 현미경 검사법 (AFM) (70), 및 지상 플라스몬 공명 (SPR) (71) 이다.
단백질 활동이 분자를 레테르를 붙임에 의하여 영향을 미치기 때문에 무 레테르를 붙이는 방법에는 항체microarrays을 위해 직접적인 탐지 접근으로 이점이 있는다. 붙잡은 단백질 (69)의low-density배열을 검출하기 위하여SELDI(표면 강화된 레이저desorption/ionization) 질량 분석은 이용되었다. 단백질은 금속 표면 배열 (SELDI단백질 배열)에 붙잡고 레이저 광선을 사용하여 기체화된다. 이 단백질의 신원을 계시하기 위하여 질량 분석 데이터을 사용하여 분석은 그때 실행된다.

항체 배열 (70)에 붙잡은 단백질을 확인하는 원자 힘 현미경 검사법 (AFM) 방법 사용 표면 지세학 변화. 토끼 상호 작용을 묶는 측정하IgG이 금 표면에 고정시키골 그것의 칭찬 항체, 산양 개미 토끼IgG,AFM에 묶을 때 고도안에 증가를 검출하고, 이렇게 있는다. 항원 항체 상호 작용의 활동을–공부하기, 실시간 검출 방법은 유용할 것이다 그런데. 분자량, 친화력 및 의무적인 비율 (72-74)의 광범위에 수용체ligand상호 작용의–활동을 공부하기 위하여 지상 플라스몬 공명 (SPR)은 다재다능한 탐지 공구로 성숙했다. 상업적인SPR칩은 유효하다 그런데 그들의 탐지 결의안 한정된다. 단순한 교류 세포안에64의 개인적인 동원정지 사이트에 감지기 표면은 개발되었다 (75). 검출 방법으로 평면 도파관을 사용하여 묶는 항원의 활동을 공부하기 위하여 항체 배열 바이오 센서는 또한 개발되었다. 이 방법을 사용하여, 뜻깊은 신호 강렬이 직경안에 200 밀리미터 작았던 반점에서 달성될 수 있은 것을 그룹은 시범했다. 이 접근이 높 처리량과 평행할 활동 학문을 위해 적당할다 고 그런 까닭에 예기된다. (76).

탐지 의 범위
단백질과DNAmicroarrays의 다른 차이는 단순한 생물학 견본 세포안에 단백질 농도가 보다 큰magnitute의 몇 순서mRNAs을 위해 저것 이다 고 이다. 따라서 단백질 칩 발견자 시스템에는mRNA을 위해104에 비교되는1014년의 – 요인까지 탐지 작동의 아주 큰 범위가 있어야 한다. 따라서 특별한 표적에nanomolar친화력에 항체는micromolar농도에 이 표적의 존재에의해 포화시키고pico-또는femtomolar목표 수준을 검출하지 못할 것이다. 따라서 희소하고 풍부할 단백질을 수용함 가능하게 분리될 배열 (7,8,9)을 요구할 것이다.
배열한 항체의 단20%이 낮은 농도 (33)에 단백질의 측량을 제공하는 것을 표적을 위해 변화 친화력에 다각 항체는 배열 그런데 학문의 다른 지역에 보였다 둘 수 있는다.

다음: 단백질 배열을 위해 단백질 생산

단백질과 항체Microarrays을 위해 참고

등을맞댄:

단백질 칩과 항체 칩에 소개 그리고 배경.

항체와 단백질 칩의 유형

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