경고: function.include 일단] include_once (/home/molec2/public_html/advpoll/poll_cookie.php) [: 스트림을 열지 못하는: 라인에 3 /home/molec2/public_html/protein-microarrays/protein-chip-attachment/index.php에 있는 그 같은 파일 또는 디렉토리 없음
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부착 단단한 표면에 단백질을 붙이기 위하여는, 기질의 표면은 최대 의무 수용량 (8,27)를 달성하도록 변경되어야 한다. 단백질은 단백질 부착 층에 칩에 붙어 있다 (숫자 3)를 보십시오. 이 층은 전형적으로 응용의 본질로 변화하는 유기 필름이다. 다양한 물자는 agarose (39), 덱스트런 근거한 히드로겔 시트 (40), 다공성 polyacrylamide 히드로겔 시트 친수성 중합체 및 polyamino 산 (41)를 포함하여 공부되었다. 편리한 부착 방법은 니트로셀룰로오스 막을 사용했다 또는 단백질이 일반적인 상호 작용 (34,42,43)를 통해 표면에 수동적으로 흡수될 수 있었다 많 L 리진은 유리를 그 같은 입혔다. 붙어 있던 단백질은 무작위 오리엔테이션에 있는 표면에 묶고 엄격한 세척 조건 하에서 떨어져 세척될 수 있다. 그러나, 잡음 레벨은 일반적으로 일반적인 흡수 또는 흡착 때문에 더 높다. 특정 및 더 강한 부착은 단백질 (31,36,26)에 교차 결합 공유 원자가로 할 수 있는 유리에 민감하는 표면을 만들어서 달성된다. bifunctional 실란 cross-linker는 각자 소집된 단층을 (SAM), 유리에 수산기 그룹으로 유리제 표면을 반작용하는 1명의 기능적인 그룹이 있는, 및 최대 특이성 (44,45)를 도달하기 위하여 화학적으로 변경된 단백질의 1 차적인 아민 그룹으로 반작용하게 자유롭 또는 추가일 수 있는 다른 그룹을 형성하기 위하여 이용된다. 또 다른 변이는 gold-coated 유리 (46,47)이다. gold-coated 칩의 이점은, 및 붙잡은 분자를 확인하기 위하여 반응의 역동성을 감시하기 위하여 SPR와 질량 분석이 검출 방법으로 통합될 수 있다 이다. 상술하는 공유 원자가 cross-linking 접근에는 그러나 불리가 있다. 그들의 무작위 부착이 단백질의 고유한 확인을 바꾸거나, 단백질의 활동을 감소시키거나, 조사 (8,27)에 그(것)들을 접근하기 어려운 시킬 수 있다 민감하는 ligands가 또한 단백질의 곁사슬에서 존재한다 는 사실 때문에 가능하다. 칩의 표면에서 단백질을 uniformily 멀리 동쪽으로 향하게 하기 위하여는, 단백질은 그들의 아미노 carboxy termini에 높 친화력 꼬리표로 융합될 수 있다. 이 방법으로, 고정된 단백질은 또는 항체는 그들의 고유한 구조에서 남아 있기 위하여 확률이 높, 따라서 분석물에게 단백질의 액티브한 사이트에 능률적인 접근을 주어진. 이 방법은 성공적으로 니켈 입히는 유리 슬라이드 (26)에 그의 꼬리표를 포함하는 5800의 융해 단백질의 부착으로 설명된 첫번째이었다. glutathione/GST와 같은 다른 친화력 방법은 또한 사용되었다 (48). Streptavidin는 또한 동원정지 방법의 넓게 배열 표면 (49)에 어떤 biotinylated 생물학 성분든지 붙이기 위하여 고용되었다 기초를 두었다. 칩 지원 자료는 단백질이 physiochemical 속성에 매우 민감하기 때문에 중요하다. 예를 들면, 극지 배열은 친수성 단백질에 묶기 위하여 화학적으로 취급된다 그러나 소수성 도메인을 (9) 소유한 대로 그 같은 표면이 세포막 단백질 (예를들면 G 단백질에 의하여 결합되는 수용체)를 위해 부적한. 단백질은 핵산 같이 작동하지 않으며, 동일한 지상 화학에 드러낼 때 다른 단백질은 다른 방법으로 작동할 것이다. 다른 유형은 지상 화학 이렇게 약간 단백질의 보유를 승진시키고 그 외의 활동의 변성 또는 손실을 일으키는 원인이 될 것이다. 그러므로, 지상 화학의 적당한 선택은 이것이 다양한 유형의 고정되기 단백질이 그들의 이차와 삼차 구조를 유지하기 것을 허용하기 때문에 중요한, 그리고 이렇게 그들의 생물 활성도이다. 이 문제는 모든 단백질의 적당한 폴딩 그리고 기능을 얻기 위하여 거기로 칩 증가에 다른 반점의 수가, 100개의 다른 단백질을 고정시킬 100가지의 다른 방법일지도 모르다 때 확대된다. 중요한 문제는 대부분의 단백질의 기능이 지금 미지수이기, 이렇게 거기 없다 실제로 칩 (7)에 아직도 기능적다는 것을 시험할 것이다 아무 방법도 또한 때문이다.
