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단백질 Microarray는 잘게 썬다

단백질과 항체 Microarrays

목차

단백질과 항체 Microarrays에 소개 그리고 배경

항체와 단백질 칩의 유형

단백질과 항체 부착 방법 - Microarray 칩의 작성

단백질 칩 납품 방법

단백질 칩 붙잡음 분자와 그들의 제한

항체 Microarrays: 문제와 해결책

단백질 Microarray 검출 방법과 분석

단백질 배열을 위한 단백질 생산

단백질 배열과 단백질 칩의 응용

단백질 Microarrays: 진로 및 결론

 

단백질과 항체 Microarrays를 위한 참고

 

단백질과 항체 Microarrays에 소개 그리고 배경.

분자 생물학의 우리의 이해에 있는 최근 전진에도 불구하고, 많은 경우에 우리는 질병에 특정 단백질을 내포할 수 없습니다.  Genomics와 microarray 기술은 저희를 mRNAs의 수천을 한번에 분석하고 mRNA 표정이 질병 국가에서 바뀐ㄴ다는 것을 결정하는 것이 허용했다.  그러나, 연구원은 오래 세포 내의 mRNA의 농도가 그 단백질 (1,2,3)의 실제적인 풍부와 부족하게 상관된ㄴ다는 것을 알고 있었다.  이것은 개별적인 mRNAs의 강직의 비율 및 단백질 분해 (6)에 의하여 단백질이 다르다 는 사실, 단백질 번역 (4)의 포스트 transcriptional 통제, 단백질 (5)의 다수 포스트 transcriptional 수정, 및 단백질 강직 때문이.
특정 단백질 양을 직접 측정해서, 우리는 유전자 기능의 확실한 수준을 측정하고 있다.  그러나, 사람이 다수 포스트 번역상 수정을 고려할 때, 인간 세포는 무엇이든이 모두 분석의 업무를 만드는 질병에서 거대한 업무 바꾸일 수 있던 백만닢의 수 있다 또는 포함할 더 다른 단백질 이체.  단백질 microarrays 또는 단백질 칩은 이 문제에 해결책을 허용할 수 있다.  활주 또는 "칩"는 알려진 항체의 수천으로 더럽혀질 수 있었다 또는 칩 및 결정된 어떤 바인딩든지 DNA microarray 같이 펩티드에 의하여, 생물학 견본 퍼졌다.  연결은 또한 시간 의 비행 질량 분석 (MS) 및 펩티드 대량 fingerprinting와 같은 표준 proteomic 기술을 사용하여 분석될 수 있었다.  단백질 칩은 이렇게 질병에 있는 단백질 변경을 윤곽을 그리기의 빠른과 높 처리량 방법이 될 수 있다. (7)


            단백질 칩은 단백질 단백질, 단백질 약 상호 작용, DNA 단백질 상호 작용, 단백질 지방화, 항원 항체 상호 작용, enzyme-substrate 및 수정할 수 있는 배열하 유형 높 처리량 검열 (7,8)일지도 모른다 수용체 ligand 상호 작용의 연구 결과를 포함하여 다른 많은 응용에서 작용하는 가능성으로 가지고있ㄴ다.


            2개의 접근은 생물학 견본에 있는 다중 단백질을 성격을 나타내기 위하여 이용되었다.  첫번째 접근은 질량 분석 (계속 MS)에 의하여 절단과 ID에 의하여 단 하나 실험에 있는 2000-10,000까지 단백질을 (9) 분리하고 구상하기 위하여 널리 이용되는 2 차원 젤 전기 이동법이다.  이 방법은 시간이 걸리기도 하고 MS와 조차 가장 풍부한 단백질만 검출될 수 있다.  더구나, 재현성은 비록 프리카스트 젤 및 통용되는 시약, 프로토콜 및 하드웨어 구성요소가 향상한 성과 (17)로 이끌어 내더라도, 문제적이다.  3D 젤 별거 기술의 제한 때문에, 증가 주의는 대안으로 두번째 접근의 발달, 단백질 microarrays의 발달 및 무료한 접근 (10-12)에 집중하고 있다.
            단백질에 의하여 microarray 근거한 ligand 의무적인 분석실험을 위한 이론적인 배경은 1980년대 (13-16) 후반에 Ekins에 의해 처음에 그 외 여러분 개발되었다.  모형에 따르면, 항체 microarrays는 뿐만 아니라 분석물 위원회의 동시 검열을 허용하고, 그러나 또한 전통적인 검열 방법 보다는 더 과민할 급류이골 것입니다.  검열 큰 단백질 세트에 있는 관심사는 DNA microarrays와 인간 게놈 프로젝트 (17)에 의하여 genomics에 있는 공적 결과로서만 발생했다. 

            첫번째 배열 접근은 일반적으로 96-well 미량역가판 (18-19)에서 실행된 생화확 적이고 및 immunobiological 분석실험을 소형화하는 것을 시도했다.  96-well 항체 배열은 표준 효소 연결된 immunosorbent 분석실험 (ELISAs)를 위한 144 성분 각각으로 처음으로 만들었다 (20).  유사한 배열은 (21) 전립선 특정 항원 (PSA) 및 cytokines를 측정하기 위하여 이용되었다. 

            필터 막은 또한 그들의 우량한 단백질 의무 수용량 때문에 처음에 사용되었다.  그(것)들은 ELISA 기술을 사용하여 항체로 주로 시험되다.  녹음방송에서 포함된 방사선 DNA, RNA, ligands 및 다른 작은 화학제품을 가진 단백질의 특정 상호 작용의 수사를 위해 48의 순화된 단백질의 저밀도 배열은 (22) 개발되었다.  막 근거한 고밀도 배열은 37830마리의 복제품으로 이루어져 있는 인간적인 태아 두뇌 cDNA 표정 도서관을 가린 의 목적으로 개발되었다.  순화된 단백질은 300 견본 (23) cm2의 조밀도에 PVDF 막에 더럽혀졌다.  다른 필터는 배열의 구성되었다 기초를 두었다 그러나 제한은 종양 생검의 단백질 표정 윤곽을 그리기와 같은 견본 양 제한을 가진 응용에서 그(것)들을 사용한 것을 어려워던 하는 낮은 해결책 및 상당한 배경 이었다.


            단백질 배열은 칩에 제 2 어드레스로 불러낼 수 있는 격자에서 고정된 단백질 항체의 도서관의 손상된다 (숫자 1)를 보십시오.  단백질 microarray 바이오칩은 추출하고 액체 매체에서 표적을 유지하고 제자리의 수송 매체에 있는 분리되고는 가공 단백질 microfluidic 장치 (24,25)를 사용하는 microfluidic 바이오칩에서 명백하다.  전형적인 배열은 (26) 1개 cm2의 전체 면적 내의 103-104의 명백한 성분을 공간에 포함할 수 있다.

 

다음으로: 항체와 단백질 칩의 유형

단백질과 항체 Microarrays를 위한 참고